Caveolin-1克隆、表达及其抗体的制备

目的运用基因工程方法制备Caveolin-1重组蛋白及其抗体,为研究Caveolin-1的功能奠定基础。方法构建原核表达载体pGEX-5X-1-Caveolin-1,酶切鉴定后,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达产物经SDS-PAGE及Western blot方法鉴定基因片段的正确性及表达蛋白的特异性后,进行纯化。纯化的重组蛋白免疫Balb/c小鼠3次后,ELISA法测定兔多克隆抗体滴度。结果克隆得到的目的基因片段大小与预期相符。重组Caveolin-1蛋白相对分子质量约为48000,以包涵体形式存在Caveolin-1蛋白N端融合GST标签便于纯化及鉴定。获得的高纯度Caveolin-1融合蛋白,免疫动物后,可产生特异的高滴度抗体(ELISA滴度达1:10000)。结论构建了高表达Caveolin-1蛋白的原核表达系统,制备的Caveolin-1重组蛋白免疫动物,获得了特异、高效价的抗体,为研究Caveolin-1基因的生物学活性提供了实验材料和依据。

凹陷蛋白-1基因在乙型肝炎相关性肝癌中的表达及其意义

目的探讨候选抑癌基因凹陷蛋白（Caveolin）-1在肝细胞癌（HCC）中的表达及其与HCC侵袭、转移的关系。方法对123例HCC标本以及MHCC-97L和MHCC-97H肝癌细胞株进行实时荧光PCR法、免疫组化法及Western印迹法检测Caveolin-1mRNA及蛋白表达，分析其表达与肿瘤侵袭、转移性间的关系。结果Caveolin-1在肝癌组织中较癌旁组织表达明显下调（P〈0．05）；HCC中的表达水平与大／小肝癌（≥5cm或〈5cm）、AFP表达水平、有无大血管侵袭、肿瘤单发或多发及pTNM分期5个因素均呈显著负相关（P〈0．05），其在MHCC-97H细胞株中的表达显著低于MHCC-97L（P=0．000）；Caveolin-1与HBx表达显著负相关（P=0．044）。结论Caveolin-1表达与HCC侵袭转移密切相关，其表达下凋，预示HCC的预后不良；有可能存在HBx蛋白下凋Caveolin-1表达的机制。