苜蓿萎蔫病菌Taq Man探针实时荧光PCR检测方法的建立

苜蓿萎蔫病菌是我国对外检疫性二类有害生物 ,目前国内尚无发生。在出入境检验检疫中主要是采用生物学和血清学方法进行检测 ,劳动强度大 ,耗费时间长。根据苜蓿萎蔫病菌与其它细菌菌株 1 6SrDNA序列差异 ,设计出对苜蓿萎蔫病菌具有稳定点突变特异性探针 ,利用该探针对棒形杆菌属 4个种及其它属细菌进行了实时荧光PCR检测实验。结果表明 ,只有苜蓿萎蔫病菌能检测到荧光信号 ,其它细菌没有荧光产生。该方法特异性强 ,灵敏度高 ,能检测到 2 1 4fg质粒DNA ,比常规PCR灵敏 1 0 0倍 ,而且整个过程只需要 2～ 3h。该方法可有效地应用于进出境病原菌检测之中。