鼻滴脂多糖对新生小鼠肺发育的影响及机制探讨

目的:观察鼻滴脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对新生小鼠肺发育的影响及NF-κB、MIP-1α和VEGFR-2的变化,探讨出生后肺部炎症在支气管肺发育不良发病中的作用及可能的机制。方法:新生1 d内的C57BL/6小鼠20只随机分为生理盐水组和LPS组:LPS组于出生后1 d(P_1)到出生后13 d(P_(13))每天鼻滴LPS 25 mg/kg,生理盐水组P_1到P_(13)每天鼻滴等量生理盐水。第14天收集2组小鼠肺组织标本进行检测,运用HE染色观察各组小鼠肺组织形态学改变,免疫组化观察CD31的表达并进行肺微血管密度计数,qRT-PCR检测VEGFR-2、MIP-1αmRNA水平变化,Western blot检测P65、IκBα、磷酸化P65(Ser536)、磷酸化IκBα(Ser32)及VEGFR-2蛋白水平的变化。结果:与生理盐水组相比,LPS组HE染色表现为肺泡增大,血管周围可见炎性细胞浸润。LPS组放射性肺泡计数(4.533±0.166)低于生理盐水组(8.377±0.290)(P=0.000),肺泡平均截距(54.890±2.074)高于生理盐水组(32.750±0.787)(P=0.000)。CD31免疫组化示LPS组肺微血管密度(3.387±0.007)低于生理盐水组(5.631±0.014)(P=0.000)。q RT-PCR示LPS组VEGFR-2 m RNA表达下降(P=0.000),MIP-1αm RNA表达升高(P=0.000)。Western blot示LPS组P65蛋白、磷酸化P65(Ser536)及磷酸化IκBα(Ser32)蛋白水平升高,IκBα蛋白及VEGFR-2蛋白水平降低(P=0.000)。结论:鼻滴脂多糖抑制新生小鼠肺发育,出生后肺部炎症可能参与支气管肺发育不良的发生,其机制可能和VEGFR-2表达下降、NF-κB激活上调MIP-1α有关。

脂多糖滴鼻对新生小鼠肺微血管发育的影响

目的:探讨脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)滴鼻对新生小鼠肺微血管发育的影响及机制。方法:将32只新生24 h内的C57BL/6小鼠按随机数字表法分为生理盐水组和LPS组,每组16只。LPS组采用鼻内滴入LPS 25 mg/kg,持续20 d,生理盐水组用等体积生理盐水代替。每组分别于实验的14 d、21 d收集肺组织标本进行检测,采用苏木素-伊红(HE)染色观察肺组织病理改变,免疫组化法检测肺组织中CD31、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)表达,ELISA法检测肺组织匀浆中巨噬细胞炎性蛋白-1α(macrophage inflamma-tory protein-1α,MIP-1α)和单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant pro-tein-1,MCP-1)含量,RTPCR检测肺组织中VEGF及以上炎症因子基因的表达情况。结果:LPS组小鼠肺组织的病理改变表现为肺部炎症细胞浸润,肺泡简单化。LPS组14 d和21 d肺部微血管密度计数(microvessel density,MVD)均明显低于生理盐水组(F=7.646,P=0.000;F=9.596,P=0.000);肺组织VEGF蛋白表达也明显低于生理盐水组(F=10.375,P=0.000;F=7.091,P=0.000);LPS组TNF-α、IL-1β、MIP-1α和MCP-1蛋白表达明显升高(IL-1β:F=5.949,P=0.000;F=8.386,P=0.000;TNF-α:F=9.132,P=0.000;F=7.375,P=0.000;MIP-1α:F=4.248,P=0.003;F=4.827,P=0.000;MCP-1:F=5.990,P=0.000;F=4.107,P=0.001);LPS组VEGF、TNF-α、IL-1β、MIP-1α和MCP-1 mRNA表达水平分别与其蛋白表达水平趋势一致。结论:LPS诱导的出生后肺部炎症可导致新生小鼠肺微血管发育紊乱,其机制可能与炎症因子和趋化因子表达升高及VEGF表达下降有关。