外周血单个核细胞向血管内皮祖细胞分化的体外研究

目的该实验从简化方法、提高得率的角度出发,试图建立直接培养单个核细胞(MNC)而得到血管内皮祖细胞(endothelialprogenitorcells,EPCs)的方法。方法抽取人外周抗凝血,用Ficoll密度梯度离心法分离得到MNC,体外对MNC进行诱导分化培养,然后选择免疫荧光、免疫组化、流式细胞记数和RT-PCR方法鉴定培养所得的细胞是否具有EPCs的特征。结果MNC在培养的第2天开始出现成簇现象;第4天细胞由圆形转变为梭形贴壁细胞,呈条索状或管状分布;第7天85%的贴壁细胞摄取Ac-LDL;第14天免疫荧光和免疫组化检测CD31、CD34、vWF、Flk-1均阳性;同时流式细胞记数检测结果显示CD31和CD34均为阳性;另外RT-PCR结果显示培养的细胞表达内皮细胞特异性基因Flt-1,Flk-1、ecNOS、tie-2等。结论用此方法培养的MNC细胞具备了内皮细胞以及干细胞双重特征,故初步认定,人外周血MNC在体外经适当条件的培养,完全可以分化成EPCs。