消逝波显微镜观察“一吻即逝”的胰岛素出胞作用

目的用消逝波显微镜观察胰岛β细胞瘤来源的Ins-1细胞的胰岛素出胞作用,旨在为"一吻即逝"胰岛素分泌方式提供新的证据。方法用含囊泡相关膜蛋白2和增强型绿色荧光蛋白融合蛋白基因的质粒标记Ins-1细胞的胰岛素分泌囊泡,用含高葡萄糖和高氯化钾的溶液刺激Ins-1细胞,用基于物镜的消逝波显微镜观察胰岛素的出胞作用。结果 Ins-1细胞经高葡萄糖高氯化钾溶液刺激后,消逝波显微镜可观察到两种现象:①荧光基团(亮点)在细胞膜出现并一直或长期停留在细胞膜;②荧光基团在细胞膜出现,停留较短时间后又逐渐消失(离开细胞膜)。前者应属于传统的膜融合分泌方式,即胰岛素分泌囊泡与细胞膜融合,其内容物被释放,囊泡膜成为细胞膜的一部分。后者应属于"一吻即逝"分泌方式,即胰岛素分泌囊泡与细胞膜接触并部分融合,释放部分内容物后,囊泡离开细胞膜,囊泡膜不成为细胞膜的一部分。结论该项研究结果支持胰岛素的分泌方式,除了传统的膜融合方式外,还存在"一吻即逝"的分泌方式。

渐逝场荧光显微术的原理及应用

渐逝场荧光显微术是新发展起来的一种显微镜技术。该技术利用入射光在不同折射率的两种介质表面所产生的穿透极浅的渐逝波来激发并观察邻近界面的荧光团。渐逝场荧光显微术已在生命科学领域的研究中得到了广泛应用,比如观察出胞作用和入胞作用,对活细胞实时动态观测和对单个分子成像。