江苏省白纹伊蚊对溴氰菊酯抗性及击倒抗性突变分析

目的了解江苏省白纹伊蚊对溴氰菊酯的抗性,探究其与击倒抗性(kdr)基因突变的关联,为白纹伊蚊科学防治提供理论依据。方法用美国疾病预防与控制中心生物瓶法制备溴氰菊酯含量为1、2、4、6和8μg/瓶的测试瓶和不含溴氰菊酯的对照瓶,每瓶放10~25只实验室培养的敏感品系白纹伊蚊,确定诊断剂量。2020年8—9月,分别从徐州市睢宁县、淮安市淮阴区和无锡市宜兴市采集白纹伊蚊的幼虫或蛹,培养至子一代(F1代),取10~25只F1代雌蚊置含诊断剂量溴氰菊酯的测试瓶或对照瓶中充分接触30 min,计算白纹伊蚊的死亡率,评价其抗性水平。提取抗性测试后蚊虫的DNA,PCR扩增电压门控钠离子通道(VGSC)跨膜结构域Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的基因编码区并测序,用Bioedit、Seqman等软件分析kdr基因突变情况,统计kdr基因型和突变频率,抗性表型与敏感表型蚊虫kdr突变率的差异使用χ^(2)检验。结果用实验室敏感品系白纹伊蚊确定的溴氰菊酯诊断剂量为4μg/瓶。从睢宁县、淮阴区和宜兴市共采集到白纹伊蚊149只。睢宁县的白纹伊蚊在诊断剂量下的校正平均死亡率为(28.2±1.4)%,淮阴区和宜兴市的平均死亡率分别为(64.4±5.5)%、(56.3±17.7)%,3个县(市、区)的白纹伊蚊对溴氰菊酯均已产生抗药性。共获得DNA序列447条,测序结果显示,3个县(市、区)白纹伊蚊VGSC结构域Ⅳ的基因编码区1532和1534位点均存在kdr基因突变,其中1532位点共有2种等位基因,分别为野生型ATC/I(279/298,93.6%)和突变型ACC/T(19/298,6.4%);组成3种基因型,分别为野生型纯合子I/I(133/149,89.3%)、野生型/突变型杂合子I/T(13/149,8.7%)和突变型纯合子T/T(3/149,2.0%)。1534位点共有4种等位基因,分别为野生型TTC/F(275/298,92.3%)和突变型TCC/S(5/298,1.7%)、TTA/L(14/298,4.7%)和TTG/L(4/298,1.3%);组成4种基因型,分别为野生型纯合子F/F(128/149,85.9%)、突变型/野生型杂合子F/S(5/149,3.4%)和F/L(14/149,9.4%),突变型纯合子L/L(2/149,1.3%)。72只有抗性表型的白纹伊蚊成蚊中,1532、1534位点野生型分别占87.5%(63/72)和86.1%(62/72),kdr基因突变型分别占12.5%(9/72)和13.9%(10/72);77只敏感表型白纹伊蚊成蚊中,1532和1534位点野生型分别占90.9%(70/77)和85.7%(66/77),kdr基因突变型分别占9.2%(7/77)和14.3%(11/77)。抗性表型和敏感表型个体中,1532和1534位点kdr基因突变型间的差异无统计学意义(χ^(2)=0.168、4.111,P>0.05)。结论江苏省睢宁县、淮阴区和宜兴市的白纹伊蚊对溴氰菊酯均产生抗药性,但1532和1534位点kdr基因突变频率均较低,未发现抗性表型与1532位点、1534位点kdr基因突变的相关性。

云南省埃及伊蚊击倒抗性基因流行特征研究

目的 在云南省埃及伊蚊重点分布区,检测埃及伊蚊引起击倒抗性(kdr)的电压门控钠离子通道基因(VGSC)突变并分析,阐明VGSC基因流行特征。方法 收集云南省盈江县、瑞丽市、镇康县、耿马傣族佤族自治县(耿马县)、勐海县、景洪市和勐腊县共7个重点县(市)野生埃及伊蚊成蚊或幼蚊样本,直接测序法扩增VGSC部分基因片段,分析各位点突变率和联合突变构成情况。χ^(2)检验比较不同位点突变率和不同性别成蚊VGSC基因kdr突变的差异等。结果 7个县(市)共计561只(雌蚊276只、雄蚊242只和幼蚊43只)埃及伊蚊样本成功提取蚊DNA基因组并被用于kdr突变的检测,共发现VGSC中4个位点突变。每个县(市)均存在S989P、V1016G和F1534C突变,S989P突变率为71.43%~100%,均值为92.51%[95%置信区间(CI)90.33%~94.70%];V1016G突变率均为100%;F1534C突变率为55.81%~100%,均值为85.38%(95%CI:82.45%~88.32%);首次发现瑞丽市、耿马县和镇康县3个县(市)存在Y1527F位点突变(0~35.45%),均值为8.73%(95%CI:6.39%~11.08%)。同时存在4种联合突变类型:S989P+V1016G、V1016G+F1534C、S989P+V1016G+F1534C和S989P+V1016G+Y1527F+F1534C,未发现单个位点突变情况。除盈江县外的6个县(市)雌蚊与雄蚊分别进行989、1016、1527和1534位点突变率以及联合突变构成比的比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论 云南省埃及伊蚊VGSC基因中kdr突变以多位点联合突变为主,且出现Y1527F新突变,应定期开展埃及伊蚊kdr突变监测,及时掌握其对杀虫剂靶标抗性变化规律。

电压门控钠离子通道基因I1532T突变与白纹伊蚊对菊酯类杀虫剂敏感性的相关性

目的探讨I1532T突变与白纹伊蚊对氯菊酯和溴氰菊酯杀虫剂抗药性的相关性。方法利用实验室饲养的白纹伊蚊长宁株作为试虫,分别对幼虫和成虫阶段,以幼虫浸渍法和成虫接触筒法对溴氰菊酯和氯菊酯的敏感性进行生物测定。收集生物测定死亡和存活的个体单只抽提基因组DNA,PCR扩增电压门控钠离子通道(voltage-gated sodium channel,VGSC)基因部分片段,测序并检测击倒抗性(knockdown resistance,kdr)突变情况,χ^(2)检验I1532T与2种菊酯类杀虫剂抗药性的相关性。结果幼虫浸渍法的结果显示,白纹伊蚊长宁株对氯菊酯和溴氰菊酯的LC_(50)分别是敏感品系的2.23倍和3.31倍,提示对2种杀虫剂均为敏感。成蚊接触筒测定的结果显示,接触氯菊酯和溴氰菊酯后成蚊的死亡率分别为74.69%和78.79%,提示白纹伊蚊长宁株对氯菊酯和溴氰菊酯均已产生抗性。本研究共测定了401只白纹伊蚊长宁株的VGSC基因部分片段,1532位点为突变基因型(突变纯合子ACC/ACC和野生突变杂合子ATC/ACC)的占59.10%,其余为野生型ATC/ATC,占40.90%;1534位点为突变基因型(突变纯合子TCC/TCC和野生突变杂合子TTC/TCC)的占4.49%,其余为野生型TTC/TTC,占95.51%。结果显示,白纹伊蚊幼虫氯菊酯或溴氰菊酯抗药性表型与敏感表型之间的I1532T突变频率差异均无统计学意义(P>0.05);成虫的氯菊酯抗药性表型与敏感表型之间的I1532T等位基因型频率差异(P=0.019)和基因型频率差异(P=0.044)有统计学意义,而溴氰菊酯抗药性表型与敏感表型的I1532T等位基因型和基因型频率差异无统计学意义(P>0.05)。结论VGSC基因I1532T突变使白纹伊蚊成虫对氯菊酯敏感性下降,但与溴氰菊酯敏感性无相关性。