刀豆凝集素快速检测技术的研究现状及发展趋势

刀豆凝集素主要存在于刀豆中,是一种能与多糖、糖蛋白等物质发生特异性结合的植物凝集素。刀豆凝集素具有抗营养和抗虫害作用,是植物自我保护的重要环节,也是造成食用豆类食物中毒和过敏反应的主要原因。因此刀豆凝集素的检测对豆类蔬菜的育种、食用安全性评估等工作具有重要意义。详细介绍了新型刀豆凝集素快速检测技术的研究进展,包括基于纳米材料的生物传感器、免疫传感技术、糖传感技术和核酸适配体传感技术等。基于纳米材料的生物传感器具有较高的精度但是缺乏生物特异性;免疫传感技术改进了传统免疫法的检测速度但仍存在信号重复性差的问题;糖传感技术大幅提升了血凝法的特异性和检测精度,但无法区分糖特异性相同的凝集素。基于核酸适配体的检测技术具有优秀的检测精度、特异性和可重复性,还可通过化学修饰获得非天然核酸适配体进一步加强特异性,是未来刀豆凝集素快速检测的发展趋势。

地尔硫卓对刀豆凝集素诱导单个核细胞细胞因子表达的影响

目的探讨地尔硫卓对刀豆凝集素(ConA)诱导单个核细胞细胞因子表达的影响。方法ficoll密度梯度离心法分离大鼠脾脏单个核细胞,分对照组、ConA组和地尔硫卓-ConA处理组。ELISA测定上清中细胞因子浓度。结果单个核细胞在ConA的刺激下,其上清液中IL-10、TNF-α、IL-6急剧增高,IL-1β低水平表达,TGF-β1未见明显表达。地尔硫卓干预后,IL-10、TNF-α、IL-6的浓度明显减低。结论地尔硫卓能抑制ConA所诱导的单个核细胞IL-10、TNF-α、IL-6的表达。

白血病人白细胞膜刀豆凝集素及麦芽胚凝集素受体分布的观察

本文报道人白血病(3例单核细胞性,1例毛细胞性、3例淋巴细胞性)白细胞膜刀豆凝集素(ConA)及麦芽胚凝集素(WGA)受体分布.白细胞膜表面均有WGA及ConA受体,WGA受体明显多于ConA受体.白血病的类型及分化程度不同,金颗粒在细胞膜表面的分布也有显著差异(1)毛细胞性白血病及淋巴细胞性白血病细胞膜上,WGA及ConA受体的分布多于单核细胞性白血病.(2)白血病白细胞膜上受体的多少与细胞分化程度成正相关,分化越低,受体数越少.文章对上述受体的分布进行了讨论.

4.0代树枝状分子-卟啉标记伴刀豆凝集素亲和吸附固体基质室温磷光法测定人血清中甲胎蛋白异质体

提出一种4.0代树枝状分子(4.0G-D)-卟啉(P)双发光分子新的磷光标记试剂(4.0G-D-P).基于4.0G-D-P标记伴刀豆凝集素(Con A)的产物(4.0G-D-P-Con A)能在聚酰胺素膜(PAM)上发射强而稳定的室温磷光(RTP),而且该标记产物能与甲胎蛋白异质体(AFP-V)发生特异性的亲和吸附(AA)反应,其反应产物保持了4.0G-D-P双发光分子RTP的优良特性,且ΔIp值与AFP-V的含量呈线性关系,加入Tween-80可以提高ΔIp值,据此建立了Tween-80-4.0G-D-P双发光分子标记Con A亲和吸附固体基质室温磷光法(AA-SS-RTP)测定人血清中AFP-V的新方法.直接法的检出限为0.31 pg/mL(4.0G-D)和0.43 pg/mL(P),灵敏度较高.无论用4.0G-D或P的激发/发射波长测定人血清中AFP-V的含量,结果与酶联免疫法(ELISA)相吻合.

刀豆凝集素的血凝活性及其性质研究

[目的]为进一步研究刀豆凝集素提供依据.[方法]从豆科植物刀豆属（Canamlia）中Canavalia ensiformis（L．）DC的干燥成熟种子中提取刀豆凝集素（Concanavalin A，简称ConA），进行血凝活性测定，并对其部分性质作了初步研究。[结果]结果表明：采用胰蛋白酶修饰人血（A型）红细胞来检测ConA凝集活性时，发现其活性提高了8倍。ConA对人A、B、O、AB型及供血动物（兔，鸡，鸭，鸽，鲤、鲫鱼）的血红细胞都具有一定程度的凝集活性，无供体细胞专一性或血型专一性；D-葡萄糖和D-甘露糖是ConA的专一性结合糖。ConA是一种对热较稳定的凝集素，40℃以下时ConA很稳定，80℃以上保温20min后，血凝活性完全丧失：在pH值范围5．8～8．3，ConA的凝集活性较高，在pH〉11．9时，凝集活性完全丧失。变性剂脲浓度达到0．4mol／L以上时，ConA的凝集活性可完全丧失。[结论]该研究对今后系统阐明其生物学作用．扩大应用范围具有重要意义。

乌药提取物对伴刀豆凝集素A致免疫性肝损伤小鼠保护作用的研究

免疫性肝损伤是由免疫反应介导的肝实质炎症性病变，其重要特征是血清自身抗体阳性，肝组织内有大量的炎症细胞浸润，从而导致肝脏损伤。免疫性肝损伤是肝纤维化、肝硬化甚至肝癌等肝脏疾病转归和发生发展的诱发因素。因此，积极治疗免疫性肝损伤有着十分重要的意义。

血液与刀豆凝集素作用过程的阻抗特性

目的:研究血液与刀豆凝集素相互作用形成血凝过程中血细胞的阻抗特性。方法:选用家兔血细胞与刀豆凝集素构成实验组,以精密阻抗分析仪为基础搭建阻抗监测平台,持续采集各实验组反应过程的复阻抗幅模量、相位角、频率、实部值、虚部值等阻抗特征参数进行整理分析。结果:在50%比容的家兔血细胞悬浮液中,分别加入10、20和30 mg/mL浓度的刀豆凝集素后,家兔血细胞的特征频率从19.80 MHz提高到(27.31±2.19)MHz;在特征频率下,随反应时间的增加,复阻抗幅模量的增量均值和相位角的增量均值分别为(-18.27±1.29)Ω、3.86°±0.38°,与不含刀豆凝集素的空白对照组呈相反趋势。结论:刀豆凝集素可使家兔血细胞的特征频率升高,复阻抗幅模量降低,相位角增大,凝集速度加快。

外源刀豆凝集素对菲律宾蛤仔免疫机能的影响

为了解外源刀豆凝集素对菲律宾蛤仔免疫因子的影响,开展了不同浓度刀豆凝集素对菲律宾蛤仔血细胞吞噬活性、溶菌酶(LSZ)、碱性磷酸酶(AKP)和超氧化物歧化酶(SOD)的影响研究。结果表明,投喂刀豆凝集素后第1、3、4、6、7天,菲律宾蛤仔吞噬细胞活性显著高于对照普通养殖(P<0.05);投喂5μg/L刀豆凝集素后第4、6、7天,菲律宾蛤仔溶菌酶含量显著高于对照普通养殖(P<0.05);投喂刀豆凝集素后第1~7天,菲律宾蛤仔碱性磷酸酶活性显著高于对照普通养殖(P<0.05);投喂5μg/L刀豆凝集素后第3、7天,菲律宾蛤仔的超氧化物歧化酶活性显著高于对照普通养殖(P<0.05)。刀豆凝集素在第2~5天对菲律宾蛤仔免疫力具有很大的促进作用,3μg/L刀豆凝集素效果最佳,第7天后投喂5μg/L刀豆凝集素效果最佳。

人健康肝组织刀豆凝集素(Con A)结合型糖蛋白组学研究

通过凝集素亲和层析技术结合双向电泳-质谱技术构建人健康肝组织Con A结合型糖蛋白数据库并进行生物信息学分析;利用研磨和匀浆两步法抽提人健康肝组织总蛋白,通过固相凝集素亲和层析获得与刀豆凝集素(Con A)结合型糖蛋白,经过双向电泳、荧光染色、图像分析获得人健康肝组织表达谱;通过MALDI-TOF-MS质谱鉴定及生物信息学分析获得人健康肝组织数据库,并建立了高重复性的人健康肝组织Con A结合型糖蛋白表达谱,图谱均点数为301±15,挖取139个蛋白点进行质谱鉴定,去冗余后确定了85个与细胞周期、代谢通路相关的蛋白质;通过NetNGlyc和NetOGlyc对糖基化位点进行预测,并按照geneontology对其功能定位等进行分类,并对其中与肿瘤发生发展相关的蛋白进行具体分析.由此可见,凝集素亲和层析结合2-DE,质谱鉴定是一种高通量的检测方法,Con A结合型糖基化修饰谱的构建为后续研究奠定了基础.

胆汁刀豆凝集素A结合蛋白在胆固醇结石早期形成阶段的作用

应用快速蛋白液相色谱分子筛与离子交换技术结合另一亲和层析系统——蜗牛凝集索(HP),对胆汁主要成核效应蛋白系统——刀豆凝集索A(ConA)结合蛋白的成核活性进行系统研究,得到一种抑成核的60KD蛋白与一种130KD的促成核蛋白。借助减法试验,对分离获得的这两种蛋白的成核重要性作了评估,为进一步寻找更重要的成核效应蛋白提供了又一途径。

玉竹糖蛋白分离纯化及其体外抗氧化能力

采用磷酸缓冲液浸提法提取玉竹糖蛋白粗品(Polygonatum odoratum glycoprotein,PDG),经葡聚糖凝胶G-100和刀豆凝集素A分离纯化,得到糖蛋白组分PDG1和PDG3,经高效液相色谱测定其分子质量,并检测PDG、PDG1和PDG3的体外抗氧化活性。结果表明,PDG1和PDG3的分子质量分别为186 k D和28.3 k D;玉竹糖蛋白具有一定的还原能力,对羟自由基和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基具有较强的清除作用,对脂质过氧化具有抑制作用,且在一定质量浓度范围内(1~10 mg/m L)存在剂量关系,其抗氧化能力随着玉竹糖蛋白质量浓度的增加而增强,PDG1和PDG3的抗氧化能力优于PDG。

ConA识别的高甘露糖型糖蛋白在肿瘤患者血清中表达的研究

目的研究ConA识别的高甘露糖型糖蛋白在鼻咽癌、肺癌、肝癌和结直肠癌患者血清中的表达规律。方法应用ConA(刀豆凝集素)亲和层析法从正常人血清中获得ConA识别的高甘露糖型糖蛋白。结果ConA识别的高甘露糖型糖蛋白明显高于正常人和良性疾病患者,阳性率分别为77.4%,65.2%,70.3%;鼻咽癌患者血清阳性率为21.4%。且在结直肠癌患者有效治疗后该糖蛋白水平显著下降,阳性率也下降。结论血清中ConA识别的高甘露糖型糖蛋白,可用于肿瘤患者血清糖基化异常和肿瘤发病机理的研究,并可为临床诊断和治疗效果的评价提供参考指标。

维药菊苣提取物对Balb/c小鼠肝纤维化的治疗作用研究

目的探讨维药菊苣正丁醇提取物(CGB)抗雄性小鼠肝纤维化的治疗作用。方法采用刀豆凝集素(Con A)在Balb/c雄性小鼠诱导肝纤维化,造模成功后第6周分别用低剂量(100 mg/kg)和高剂量(500 mg/kg)CGB干预治疗,并以秋水仙碱(0.1 mg/kg)做阳性对照。治疗第10周处死小鼠留取肝脏组织和血清,比较各组小鼠肝功能、关键性肝纤维化指标。病理分析肝脏组织变化和TGF-β1/Smad信号通路相关因子表达差异。结果与模型组比较,CGB治疗组的肝功能指标(ALT,AST)和血清肝纤四项指标(PC-Ⅲ、CIV、LN和HA)指标不同程度降低(P<0.05);肝组织TGF-β1蛋白表达下降,Smad7蛋白表达升高(P<0.05)。肝脏组织病理显示,不同剂量CGB治疗均能一定程度上减缓小鼠肝纤维化的发展。结论 CGB具有抗肝纤维化的活性,影响TGF-β1/Smad信号通路可能是其潜在的抗肝纤维化作用机制。

巨噬细胞细胞内吞过程中膜受体流动性的测量——两种标记受体方法的比较

本文首次实现了细胞内吞过程中膜受体流动性的测量。实验选择巨噬细胞膜和伴刀豆凝集素A(ConA),分别用Con A-Biotin+Avi-din-FITC(ABC法)和Con A-FITC(直接法)两种方法标记巨噬细胞膜Con A受体,比较了这两种方法标记的巨噬细胞Con A受体的荧光强度;利用FRAP(Fluorescence RecoveryAfter Rhotobleaching)技术,分别用两种标记方法测量了巨噬细胞Con A受体的流动性。结果显示Con A-Biotin+Avidin-FITC标记的巨噬细胞受体的平均荧光强度比用Con A-FITC标记的平均荧光强度高大约3倍;直接标记法应用于细胞内吞过程中受体流动性的测量在方法学上存在着很大的缺陷,ABC标记法适合于测量细胞内吞过程中膜表面受体的流动性的变化,且灵敏度高、误差小;ABC方法标记受体的测量结果显示,Con A刺激后巨噬细胞膜表面Con A受体的扩散系数和荧光恢复率与静息状态相比呈下降趋势。

D-甘露糖电化学阻抗生物传感器的研究

糖类的研究已经成为生物及化学领域一个新的热点。凝集素与糖类之间的作用是生命活动中一个重要的部分。试验设计了一种比较简单的D-甘露糖电化学阻抗传感器,以刀豆凝集素为分子识别物质,共价键合法将刀豆凝集素固定到金圆盘电极的表面,用电化学阻抗法进行检测。结果表明,以[Fe(CN)6]3-/4-氧化还原电对作为探针,电子转移阻抗变化值与D-甘露糖的浓度之间呈现良好的线性关系。

基于静电结合的电化学阻抗D-甘露糖生物传感器的研究

糖组学的研究已经成为后基因时代一个重要的研究领域.糖类物质与凝集素之间的特异性相互作用,能够用于制备糖生物传感器,文章设计了一种简便的D-甘露糖电化学阻抗生物传感器,以刀豆凝集素为分子识别物质,静电吸附法将刀豆凝集素固定到金圆盘电极的表面,用电化学阻抗法进行检测.实验结果表明,以[Fe（CN）6]3-4-氧化还原电对作为探针,电子转移阻抗变化值与D-甘露糖浓度的对数在5.0×10-8～1.0×10-5 mol/L之间呈良好的线性关系,检出限为0.02μmol/L.

小麦条锈菌吸器分离方法研究

[目的]从小麦条锈菌侵染的叶片中分离纯度较高且结构较完整的吸器。[方法]根据锈菌吸器表面含有可以与伴刀豆球蛋白凝集素(Concanavalin A)结合的糖类物质的特性,参照蚕豆锈菌吸器的分离方法对小麦条锈菌吸器进行了分离。[结果]从被条锈菌侵染小麦叶片中成功分离出条锈菌吸器,提取吸器的纯度为83.3%,提取率为5.0×105个/g小麦叶片鲜重。[结论]根据蚕豆锈菌吸器的分离方法,稍作改进,成功分离得到小麦条锈菌吸器,为小麦条锈菌功能基因组学及其致病机制的研究奠定了基础。

缺氧缺糖后再给氧给糖对培养心肌细胞膜糖蛋白变化的影响

本实验应用凝集素伴刀豆球蛋白Ａ（ＣｏｎｃａｎａｖａｌｉｎＡ，ＣｏｎＡ）为探针，以能量制剂ＭｇＡＴＰ、氧自由基清除剂ＳＯＤ及钙阻滞剂异搏定作用于体外缺氧缺糖培养后再给氧给糖，观察对大鼠乳鼠培养心肌细胞的影响。发现心肌细胞膜、肌质网膜、线粒体膜等生物膜上存在ＣｏｎＡ受体；缺氧缺糖后再给氧给糖组心肌细胞生物膜上致密阳性产物减少，而用药组不减少，与正常组相近，对照组则无这种阳性产物。提示，尽管这种变化机制尚不大清楚，但与糖蛋白合成、加工、运输和分泌的细胞的结构和功能变化有关。