刀豆素蛋白A诱导小鼠肝纤维化模型的建立

目的 建立小鼠的肝纤维化模型。方法 2 0只Balb c小鼠随机分 2组。实验组 (E组 )小鼠经尾静脉注射12 .5mg kg剂量的 1mol L刀豆素蛋白A(ConA) ,每周 1次 ,连续 6周 ;而对照组 (N组 )正常小鼠则相应地经尾静脉注射 2 5 0 μLPBS。每次注射ConA或PBS 2 4h后 ,经小鼠尾静脉取血检测ALT和AST。第 6次注射ConA一周后处死小鼠 ,取肝组织做HE染色及MassonTrichrome染色 ,显微镜下观察肝脏组织形态改变及胶原沉积情况。结果 与对照组比较 ,实验组小鼠的ALT和AST均明显升高 ,肝体积明显增大 ,表面不光滑 ,布满增生小结节。光镜下见肝组织结构紊乱 ,肝细胞坏死明显 ,有较多的淋巴细胞浸润。MassonTrichrome染色胶原明显增多。结论 反复静脉注射ConA可成功诱导建立小鼠肝纤维化模型。

牛精子膜伴刀豆素A结合糖蛋白的分离与定位

用ＮＰ－４０处理牛精子获得膜抽提液，经伴刀豆素Ａ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析，分离出与伴刀豆素Ａ结合的糖蛋白，经ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳显示出分子量为７２、５７和３ｌｋＤ的３条蛋白质带。将分离到的糖蛋白电转移在硝酸纤维素膜上，用酶标的伴刀豆素Ａ检测，３条蛋白质带均呈阳性。用分离的糖蛋白免疫兔，制备抗血清。用抗血清对牛精子膜ＮＰ－４０抽提物进行免疫印迹法分析，检测出３条阳性带，与亲和层析法分离的糖蛋白带相对应。用抗血清对牛精子进行免疫细胞化学标记，表明该糖蛋白主要分布于精子顶体区。

牛精子膜伴刀豆素A结合糖蛋白的抗原特性与生物学意义

用抗牛精子膜伴刀豆素Ａ结合糖蛋白血清，在兔、小鼠、地鼠和人精子表面进行了免疫细胞化学定位观察。结果表明，几种动物和人的精子均被特异性标记。标记的主要部位是顶体区，与伴刀豆素Ａ亲和细胞化学的标记相似。地鼠精子用抗血清封闭后，进行精子－卵子透明带的体外结合试验，证明精子与卵子透明带的结合受到显著抑制。本实验结果表明，精子膜伴刀豆素Ａ结合糖蛋白抗原具有种间交叉反应性，并且参与精子与卵子透明带的识别过程。

刀豆素A诱导巨噬细胞受体介导内吞及溶酶体过程

本文采用电子显微镜对胶体金标记刀豆素Ａ（ＣｏｎＡ－Ａｕ）与小鼠腹腔巨噬细胞表面ＣｏｎＡ受体的结合、内吞及其在巨噬细胞中转运的形态学变化；同时采用共聚焦显微镜对巨噬细胞内Ｃａ２＋和ｐＨ的动态变化进行了观察。电镜观察表明：ＣｏｎＡ的内吞属于受体介导内吞，低温对其有抑制作用。内吞体是受体与配体的分离场所，配体被溶酶体降解，而受体则返回细胞膜表面形成再循环。共聚焦显微镜观察表明：细胞内Ｃａ２＋瞬时增高，溶酶体内ｐＨ值下降且有周期性波动，间隔为１０—１５ｍｉｎ。

P物质对刀豆素A和美洲商陆诱导小鼠脾细胞产生γ干扰素的调节作用

本实验研究了不同浓度(10^(-11) ～10^(-5) mol/L)P物质(SP)在体外对刀豆素A(ConA)和美洲商陆(PWM)诱导小鼠脾细胞产生γ干扰素(IFN-γ)的影响。结果显示,10^(-11)～10^(-6)mol/L SP对10μg/mlPwM诱生IFN-γ没有影响。用5、2.5及1.25μg/ml ConA或PWM诱生时,10^(-9) ～10^(-5) mol/L SP可增高IFN-γ效价,10^(-7) ～10^(-5)mol/L SP作用更明显。单独加SP而不加诱生剂,未检测到IFN-γ.先加入10^(-9) ～10^(-6) mol/L SP 6h后,再加ConA诱生的IFN-γ效价,略高于同时加入10^(-9) ～10^(-6)mol/L SP时ConA诱生的IFN-γ效价。先加入10^(-5)mol/L SP,IFN-γ效价并不比同时加10^(-5) mol/L SP时增高,反而有降低的趋势.在先加入SP时,10^(-8)mol/L SP即表现出明显的增高IFN-γ效价的作用,而同时加SP,则在10^(-7)mol/L才有明显作用。

灵芝多糖与刀豆素A相互作用对小鼠脾细胞体外增殖反应的影响

灵芝多糖（GLB）与刀豆素A（ConA）对小鼠脾细胞增殖反应有三种不同的相互作用。当ConA为亚适浓度（0．5mg／L）时，GLB有轻度的协同刺激作用；当ConA为最适浓度（2mg／L）时，高浓度GLB（＞100mg／L）可轻度对抗ConA的刺激作用；当ConA为超适浓度（16mg／L）时，GLB可逆转ConA的抑制作用，并恢复ConA的刺激作用至最适水平，可能是多糖与ConA发生沉淀反应所致。

伴刀豆素A对红细胞在切变流场中取向的影响

红细胞流变特性的研究已成功地应用于临床诊断和治疗,特别是在心脑血疾病的诊断和治疗方面更是引人关注。红细胞在切变流场中的取向能力虽然仍处在基础理论研究阶段,但已显示出良好的应用前景。本论文报道了采用分子生物学方法和激光衍射技术研究伴刀豆素A对红细胞在切变流场中的取向和变形的影响。结果发现:伴刀豆素A与红细胞膜带3蛋白表面的糖链结合后会引起红细胞变形指数(DI)和取向指数(OI)的改变,并且OI指数反应更加强烈。该现象对临床诊断和治疗都有重要意义。

封闭群东方田鼠染色体制备中刀豆素的应用技术研究

在按常规技术制备东方田鼠染色体前2 4 h,腹腔注射 2 0 μg/g体重的刀豆素 ,并记数随机显微视野中 ,分裂相的多少 ,发现用刀豆素处理的东方田鼠骨髓细胞中 ,分裂相大大多于未经刀豆素处理的东方田鼠。按此剂量处理的东方田鼠 ,染色体形态与未经刀豆素处理的东方田鼠没有明显的差别。因此 ,刀豆素的处理便于对东方田鼠染色体的分析。

白藜芦醇对刀豆素A诱导小鼠自身免疫性肝炎的保护作用

目的:探究白藜芦醇(Res)对刀豆素A(Con A)诱导小鼠自身免疫性肝炎(AIH)的保护作用及机制。方法:C57BL/6小鼠随机均分为对照组、AIH组、AIH+低剂量Res组和AIH+高剂量Res组,AIH+低剂量Res组和AIH+高剂量Res组小鼠每天分别以5 mg/(kg·d)及20 mg/(kg·d)Res灌胃,持续5 d;对照组小鼠以相同体积生理盐水灌胃,AIH组小鼠不灌胃;灌胃3 d后,AIH组、AIH+Res低剂量组及AIH+Res高剂量组经尾静脉单次注射Con A 20 mg/kg建立AIH模型;建模48 h时处死各组小鼠,收集肝脏组织,Real-time PCR检测Foxp3、RORγt、Bax、Bcl-2、Caspase-3及Caspase-9 mRNA相对表达水平,Western blot检测Foxp3、RORγt、Bax、Bcl-2、Cleaved Caspase-3及Cleaved Caspase-9蛋白相对表达水平,肝组织HE染色观察肝脏组织学变化、TUNEL染色观察肝细胞凋亡情况;同时收集外周血,检测血清中AST、ALT/GPT、IL-6、IL-10与IL-17A水平。结果:与对照组小鼠相比,AIH组小鼠血清AST、ALT/GPT、IL-6、IL-17A水平,肝组织中肝细胞凋亡水平、Bax、Caspase-3、Caspase-9、RORγt mRNA表达水平、Bax、Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9、RORγt蛋白显著上升,血清IL-10,肝脏组织Bcl-2、Foxp3 mRNA和蛋白表达水平显著下降(P<0.05),HE染色结果显示肝脏组织损伤程度与淋巴细胞浸润程度显著增加;与AIH组小鼠相比,AIH+高剂量Res组小鼠血清AST、ALT/GPT、IL-6、IL-17A,肝脏组织中肝细胞凋亡水平、Bax、Caspase-3、Caspase-9、RORγt mRNA表达水平、Bax、Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9、RORγt蛋白显著下降,血清IL-10、肝脏组织Bcl-2、Foxp3 mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.05),HE染色结果显示肝脏组织损伤程度与淋巴细胞浸润程度显著减轻;AIH+低剂量Res组小鼠上述指标介于AIH组及AIH+Res高剂量组之间。结论:Res可能通过减少血清炎症因子的表达,抑制Con A诱导的AIH小鼠肝脏细胞的凋亡,而这种保护作用随Res剂量的增加而增强。

刀豆素标记神经元在大鼠中脑的分布──凝集素组织化学的研究

本文采用凝集素组织化学方法，观察了刀豆素标记神经元在大鼠中脑的分布。结果表明，中脑内与刀豆素结合的细胞主要位于红核腹外侧区、黑质致密部、动眼神经副交感核、中脑楔形核和中缝中央上核等富含单胺类递质及Ｐ物质样免疫反应胞体的区域。其中刀豆素与红核神经元的结合具有显著特点，可将其分为三类：第一类神经元，除胞核区不显色外，其余部位均被深染，细胞突起明显，为体积大小不一的多极神经元；第二类细胞几乎完全为刀豆素反应产物所覆盖，其染色较第一类神经元为深，未显色的胞核区隐约可见，细胞较小，呈圆形；第三类神经元胞浆均为淡染的刀豆素反应颗粒所填充，其周边的胞膜区亦为粗大、深染的反应颗粒所占据，胞核着色不明显，有短的突起，细胞较大。其余各核群神经元与刀豆素的结合也各具特点。本文结果表明，刀豆素标记细胞在中脑的定位具有明显的选择性，并且同一核团的细胞对刀豆素的亲和力也有不同。

Resolvin D_2对刀豆素A诱导的小鼠肝损伤的保护作用及机制的研究

目的探讨Resolvin D2对刀豆素A(ConA)诱导的肝损伤的保护作用及作用机制。方法实验小鼠随机分为三组,每组8只。正常小鼠对照组,ConA诱导的肝损伤模型组,ConA诱导肝损伤小鼠+Resolvin D2治疗组。测定血中的AST、ALT含量;病理切片观察各组肝组织病理变化;ELISA法测定各组小鼠血中细胞因子TNF-α、IFN-γ的水平;RT-PCR测定各组肝组织细胞因子TNF-α、IFN-γ的含量。结果 ConA模型组的转氨酶(AST、ALT)及细胞因子(TNF-α、IFN-γ)水平显著高于其他两组,差异具有统计学意义(P<0.05);而正常组与治疗组之间差异无统计学意义(P>0.05);病理切片显示,进行过Resolvin D2预处理的小鼠肝脏组织坏死程度较ConA模型组明显减轻。结论 Resolvin D2能够明显减轻肝脏损伤,这种保护作用是通过抑制细胞因子TNF-α、IFN-γ的释放取得的。

应激大鼠血清对淋巴细胞转化的抑制作用与刀豆素A浓度的关系

目的 探讨应激大鼠血清对淋巴细胞转化的抑制作用与刀豆素A浓度的关系。方法 雄性SD大鼠随机分成实验组和对照组 ,实验组大鼠应激 15d。取正常雄性BALB C小鼠脾细胞悬液分别给予不同浓度刀豆素A ,以MTT法测定应激大鼠血清对脾淋巴细胞在刀豆素A诱导下的转化率。结果 给予浓度为 2 .5～ 5 μg ml的刀豆素A的实验组与对照组相比具有显著性差异 (P <0 .0 1,n =6 ) ,给予浓度为 10 μg ml的刀豆素A的实验组与对照组相比差异不显著 (P >0 .0 5 ,n =6 )。结论 刀豆素A在应激大鼠血清对淋巴细胞转化的抑制作用中的适当浓度为 2 .5～ 5 μg ml。

刀豆素蛋白引起免疫性肝损伤小鼠肝脏基因表达谱变化

目的：观察刀豆素蛋白引起免疫性肝损伤小鼠肝脏相关基因表达谱变化。方法：小鼠一次静脉注ConA 26．5mg／kg后提取肝脏总RNA，反转录后用Cy3-dUTP和Cy5-dUTP分别标记肝cDNA探针并与小鼠基因表达谱芯片杂交，经芯片扫描仪扫描后用GenePix Pro3．0软件分析。结果：在观察的4096个基因中，与正常对照组相比，ConA肝损伤组可见301条差异表达基因，占基因芯片总点数7．35％。在上述差异表达基因中，已知功能基因有154条。ConA免疫性肝损伤小鼠差异表达的功能基因主要与参与调控肝细胞免疫炎症（胸腺生成素、干扰素诱导蛋白、脉管细胞黏附因子、吸引素、聚腺苷分裂因子、T细胞激活蛋白）、细胞凋亡（谷胱甘肽转移酶、嗜酸粒细胞过氧化物酶、Bcl-2转录因子、细胞分裂周期及凋亡调控因子1、成纤维细胞生长因子受体）、肝脏糖及能量代谢（乙酰辅酶A合酶、琥珀酸脱氢酶复合体、脂肪酸脱饱和酶l、4-羟类固醇脱氢酶、硫腺苷甲硫氨酸合成酶、磷酸甘油酸变位酶、丙酮酸激酶等）等过程密切相关。此外，尚有部分不明功能基因的表达也发生变化。上述发现对深入了解ConA引起免疫性肝损伤过程中基因调控网络，探讨免疫性肝损伤的分子病理机制具有十分重要的意义，同时也为抗肝炎药保肝机制和作用靶点研究提供思路。

镍冶炼烟尘处理的NIH3T3细胞对刀豆素A的凝集反应

为了检测镍冶炼烟尘处理的NIH3T3细胞的某些生物学特征 ,采用刀豆素A (ConA)凝集试验 ,分别用两份镍冶炼烟尘与小鼠NIH3T3细胞接触 2 4小时 ,培养 2 1天后观察与ConA的凝集反应。以N -甲基 -N′ -硝基 -N -亚硝基胍 (MNNG)为阳性对照 ,二氧化钛 (TiO2 )为阴性对照。结果表明 ,用镍冶炼烟尘和MNNG处理的细胞均与ConA发生了凝集 ,呈剂量 -依赖关系。用TiO2 处理的细胞凝集反应为阴性。镍冶炼烟尘处理的细胞与ConA发生凝集意味着该细胞的生物学特征发生了改变。这一变化提示两份受检样品可能存在致癌活性 。

刀豆素A、结核特异性转移因子联合应用对结核菌感染小鼠的保护效应

目的 研究刀豆素A(ConA)、结核特异性转移因子(PSm·tb-TF)联用对结核菌感染小鼠的保护效应及作用机制。方法 小鼠感染结核分枝杆菌后1天起,分别给予CbnA和/或Psm·tb-TF治疗,观察各组治疗后半数死亡时间、一定时间内的死亡率、脾脏内结核活菌数;检测脾细胞分泌γ干扰素(IFN-γ)、IL-4及腹腔巨噬细胞(P-Mφ)产生NO水平。结果与感染对照组、ConA单用组、PSm·tb-TF单用组比较,ConA联合PSm·tb-TF组小鼠半数死亡时间明显延长,28天内的死亡率明显降低,脾脏内结核活菌数明显减少。脾细胞分泌IFN-γ水平明显升高;IL-4水平降低。P-Mφ产生NO显著增加。结论 ConA、PSm·tb-TF联合应用对结核菌感染小鼠的保护效应明显好于单用ConA或PSm·tb-TF组。

刀豆素A诱导人乳腺癌细胞自噬性死亡及其机制

目的探讨刀豆素A对人乳腺癌细胞MCF-7的杀伤作用及其机制。方法采用MTT法检测不同浓度ConA(concanavalin A)处理MCF-7细胞后,MCF-7细胞的增殖情况,并检测自噬标记蛋白LC-3Ⅱ,加入自噬特异性抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)后再检测MCF-7细胞对ConA的敏感性。利用基因沉默技术,抑制BNIP3的表达,再检测ConA处理后MCF-7细胞的增殖和自体吞噬。结果 ConA可显著抑制MCF-7细胞的增殖(P<0.01),并诱导其发生自噬性死亡。ConA处理后MCF-7细胞的BNIP3显著增高(P<0.05,P<0.01),利用小RNA抑制BNIP3的表达后,ConA对MCF-7的增殖抑制作用降低(P<0.01),并抑制了ConA诱导的自体吞噬效应。结论刀豆素A通过上调BNIP3的表达诱导人乳腺癌细胞发生自噬性死亡。

刀豆素A诱导小鼠腹腔巨噬细胞内吞与细胞内游离钙的关系

采用电镜和粘附式细胞仪（ＡＣＡＳ５７０）观察了胶体金标记的刀豆素Ａ（ＣｏｎＡ－Ａｕ）与小鼠腹腔巨噬细胞（Ｍφ）表面ＣｏｎＡ受体的结合、内吞及其在Ｍφ中转运的形态学改变，同时分析ＣｏｎＡ刺激后Ｍφ内游离钙（Ｃａ２＋）的变化。ＣｏｎＡ孵育１ｍｉｎ后，配体进入内吞小泡，第２次内吞约需２０ｍｉｎ。粘附式细胞仪分析表明：ＣｏｎＡ刺激后５０ｓ，Ｃａ２＋急剧上升，平均住值达０．５５７Ｕ；约１００ｓ后，恢复到刺激前水平；１８ｍｉｎ后，Ｃａ２＋重新回升，持续约１８ｍｉｎ后开始下降。本实验揭示配体再内吞与Ｃａ２＋重新上升的时间相吻合，其肯定性和机理有待于进一步研究证实。

刀豆凝集素快速检测技术的研究现状及发展趋势

刀豆凝集素主要存在于刀豆中,是一种能与多糖、糖蛋白等物质发生特异性结合的植物凝集素。刀豆凝集素具有抗营养和抗虫害作用,是植物自我保护的重要环节,也是造成食用豆类食物中毒和过敏反应的主要原因。因此刀豆凝集素的检测对豆类蔬菜的育种、食用安全性评估等工作具有重要意义。详细介绍了新型刀豆凝集素快速检测技术的研究进展,包括基于纳米材料的生物传感器、免疫传感技术、糖传感技术和核酸适配体传感技术等。基于纳米材料的生物传感器具有较高的精度但是缺乏生物特异性;免疫传感技术改进了传统免疫法的检测速度但仍存在信号重复性差的问题;糖传感技术大幅提升了血凝法的特异性和检测精度,但无法区分糖特异性相同的凝集素。基于核酸适配体的检测技术具有优秀的检测精度、特异性和可重复性,还可通过化学修饰获得非天然核酸适配体进一步加强特异性,是未来刀豆凝集素快速检测的发展趋势。

刀豆素A诱导小鼠肝损伤增加肝脏NFкB活性

肝内病理性免疫反应参与多种肝病的发病机制,在发生病毒性肝炎时常同时有肝细胞凋亡和坏死,而且细胞凋亡的强弱与病情轻重呈明显相关性[1].