基于刃天青的电化学方波伏安法快速鉴别大肠杆菌的耐药性

目的:评价5株食源性大肠杆菌临床分离株对环丙沙星、庆大霉素和氨苄西林的抗生素耐药性。方法:基于细菌能量代谢过程中的电子传递理论,引入刃天青作为氧化还原探针,建立了一种基于刃天青介导的大肠杆菌耐药性快速鉴别的电化学方波伏安法(square wave voltammetry,SWV)。结果:在1.69×10^(2)~1.69×10^(8)CFU/mL范围内,大肠杆菌浓度与刃天青氧化峰电流(I)之间存在较好的线性关系,回归方程为Y=-0.1560 X-2.9655,R^(2)=0.9775;在进行大肠杆菌耐药性测定时,参考美国临床和实验室标准协会制定的药敏试验标准,以刃天青的氧化峰电流(I_(0))和大肠杆菌直接与刃天青作用后得到的氧化峰电流(I_(-a))作为对照,测定大肠杆菌用抗生素处理后与刃天青作用得到氧化峰电流(I_(+a)),引入细菌活性值V_(ETA)作为电化学方波伏安法鉴别细菌耐药性的指标,建立了刃天青介导的大肠杆菌电化学快速药敏试验方法;运用建立的方法检测了5种食源性大肠杆菌临床分离株对3种抗生素的耐药性,以V ETA=50作为判断细菌敏感和耐药的临界值,均得到与纸片扩散法结果相符的药敏试验结果,而纸片扩散法报告结果需18 h,该法仅需2 h。结论:建立的基于刃天青介导的大肠杆菌耐药性快速鉴别的电化学方波伏安法能够准确且快速检测5株食源性大肠杆菌临床分离株对环丙沙星、庆大霉素和氨苄西林的抗生素耐药性。

硫乙醇酸盐培养基中的刃天青的作用分析

目的分析刃天青在硫乙醇酸盐培养基中的作用。方法按2000版《中国生物制品规程》中培养基灵敏度的测定方法,将0.1%刃天青以不同量加入硫乙醇酸盐培养基中,用厌氧菌株生孢子梭状芽胞杆菌、需氧菌株短芽胞杆菌及乙型溶血性链球菌分别进行不同含量刃天青、煮沸驱氧与未驱氧的灵敏度比较。结果不同刃天青含量与未加刃天青、煮沸驱氧与未驱氧的硫乙醇酸盐培养基的灵敏度无明显差异。结论用以上3个标准菌株检测不同刃天青含量的硫乙醇酸盐培养基的灵敏度,其指示剂的作用不明显。

快速龋病活跃性检测—刃天青药片的研究

目的研制一种能快速检测龋活性的刃天青成品药片,预测龋活跃性与幼儿乳牙龋蚀状况的相关性,为幼儿龋病预防工作提供一种成品化的预测方法。方法用研制的检测龋病活跃性的刃天青药片,和日本R.Dtest成品药片对照,分别检测大连市1019名4-6岁幼儿口腔情况并观察其纸片变色程度与龋失补牙数(dmft)的关系,评价与龋失补牙数(dmft)的相关性。结果本试验研制的刃天青药片变色程度与龋失补牙数(dmft)呈正相关关系(r=0.441,P<0.01),与对照组(r=0.364,P<0.05)无显著性差异(P>0.5);灵敏度为91.39%,特异性为20.65%,阳性预测值70.84%。结论本试验所研制的刃天青药片,灵敏度,准确率高,与日本R.Dtest成品药片相一致,可反映受试者的患龋现状。

奶牛乳房炎大肠杆菌刃天青微量板快速诊断及药敏试验

为了建立奶牛乳房炎大肠杆菌快速诊断与药敏试验方法,用刃天青钠取代大肠杆菌选择培养基MQQ中的酚红指示剂,通过对刃天青的工作浓度、大肠杆菌接种量和培养时间等参数的研究,建立了奶牛乳房炎大肠杆菌刃天青微量板快速诊断方法。将不同细菌及其感染模拟奶样进行刃天青微量板快速培养结果显示,此刃天青微量板对大肠杆菌具有很强的选择培养特性,能在10h内获得明确诊断结果,并能反映奶牛乳腺大肠杆菌感染强度。对89份临床奶样进行大肠杆菌刃天青微量板快速诊断敏感性和特异性检测,结果显示,此刃天青微量板法诊断大肠杆菌阳性奶样敏感性高达100%,诊断大肠杆菌阴性奶样特异性高达94.9%,总符合率高达95.5%。在此基础上用矫正浓度10种抗生素包被微量板,分别用10株大肠杆菌纯培养菌株及其感染模拟奶样和10份大肠杆菌阳性奶样进行快速药敏试验,所获结果与标准纸片扩散法完全一致。这些研究结果表明,本研究建立的刃天青微量板法可以取代常规方法用于奶样大肠杆菌的快速诊断及药敏试验。

刃天青显色法检测结核分枝杆菌的耐药性

目的用刃天青显色法检测结核分枝杆菌对4种一线抗结核药物的耐药性,并探讨该法的临床应用价值。方法来自河南省3家结核病医院的共240株结核分枝杆菌分别用刃天青显色法检测异烟肼(INH)、利福平(RFP)、乙胺丁醇(EMB)、硫酸链霉素(SM)的耐药性,并与比例法作比较。结果刃天青显色法检测平均时间为8d,与比例法相比结果一致性好,INH、RFP、EMB、SM 4种药物的折点浓度分别为0.25、2.0、4.0、2.0μg/mL。结论刃天青显色法检测结核分枝杆菌的耐药性具有成本低、快捷、操作简便、准确等优点,为结核耐药检测提供了一种较好的方法。

刃天青纸片法对龋易感儿童的应用评价

目的:评价刃天青纸片法(resazurin disctest,RD test)对龋易感儿童的临床应用价值。方法:采用整群抽样调查方法,对百色市4所幼儿园338名5岁儿童进行RD实验检测及患龋状况(龋失补牙数,dm-ft)检查,将测试结果(CAT值)与患龋状况(dmft)进行相关分析。以dmft检查结果为标准,dmf≥8为龋易感者,dmft<8为龋不易感者,计算刃天青纸片法的敏感度、特异度、可信度。结果:龋活跃性(CAT值)与患龋状况(dmft)呈正相关关系。RD试验的敏感性为53.2%,特异性为64.5%,可信度为60.4%。结论:刃天青纸片法对龋易感者的筛选有一定的临床应用价值,其敏感性和特异性有限,应将RD试验结果与龋病的相关因素加以考虑,才能更好地进行龋易感儿童的筛选和监控龋病的发生、发展。

海藻酸钠-培养基-刃天青-硅藻土微球法快速检测细菌总数

通过制备海藻酸钠-培养基-刃天青-硅藻土（alginate-medium-resazurin-diatomaceous silica, AMRD）微球，建立一种快速检测细菌总数的新方法。结果表明：单倍培养基浓度下，海藻酸钠：硅藻土为1：1．4（m／m）时，AMRD微球变色时间与细菌数量呈最佳线性关系，检测限为2．02×10^2CFU／mL，检测时间为2～16．5h。AMRD微球对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的检测灵敏度分别为1．62×10^3、2．03×10^3CFU／mL。微球对细菌的吸附符合Freundlich等温吸附方程，参数1／n在0．5-1．0之间，属于中等吸附，低浓度条件下受温度影响不大，吸附饱和需要30-45min。AMRD微球细菌计数法是一种快速而经济的细菌计数新方法，有望用于食品、饮用水以及环境检测等领域细菌总数的定量检测。

刃天青显色法检测铜绿假单胞菌对几种抗菌药物的敏感性

采用刃天青显色法检测3种抗菌药物（头孢哌酮钠、链霉素、青霉素）对铜绿假单胞菌的MIC和最佳作用时间，并比较与微量稀释法的相关性，探讨应用该法的可行性。结果表明：刃天青的试验浓度在75—150ug/mL为宜．细菌接种量1×10 5cfu／孔，肉眼即可判定MIC值结果，判定时间为8h。3种抗菌药物对铜绿假单胞菌的MIC和最佳作用时间分别为：5ug／mL，4～6h；20ug,／mL，6～8h；不敏感。刃天青显色法与稀释法MIC值检测结果一致。本试验结果说明，刃天青显色法具有简便、快速、灵敏度高的特点，能动态地反映细胞随时间变化的生长情况，能检测药物的最佳作用时间。

奶牛乳房炎链球菌的刃天青微量板快速诊断与药敏试验

本研究以刃天青钠取代链球菌选择培养基EN的溴甲酚紫指示剂,建立了奶牛乳房炎链球菌快速诊断与药敏试验用微量板。将不含指示剂EN的培养基分装到96孔板,接种不同细菌或其感染模拟奶样,培养2h加入优化浓度的刃天青指示剂,结果表明能显示无乳链球菌、停乳链球菌和乳房链球菌生长,不能显示大肠杆菌和葡萄球菌生长;检测三种奶牛乳房炎链球菌总敏感性达105cfu/m L,能在10h内获得诊断结果。60份临床奶样诊断结果显示,刃天青微量板法检测链球菌阴性奶样特异性达100%,检测链球菌单阳性奶样敏感性为100%,检测链球菌混合阳性奶样敏感性达97.1%。用矫正浓度的10种抗生素包被微量板,分别用10株链球菌纯培养、感染模拟奶样和9份链球菌阳性奶样进行刃天青微量板法快速药敏试验,所获结果与标准纸片扩散法完全一致。试验结果表明,本研究建立的刃天青微量板法可取代标准方法用于奶牛乳房炎链球菌的快速诊断及药敏试验。

刃天青纸片法预测龋活性的研究

目的研究龋活性试验(cariesactivitytest,CAT)之一的刃天青纸片法(Rezazurindisctest,RDtest)纸片变色程度与唾液、菌斑中致龋细菌以及龋失补牙数(dmft)的关系。方法给94名受测试者应用RD法,检查受测试者dmft,并取其唾液和菌斑样本培养致龋细菌。结果RD法纸片变色程度与唾液、菌斑中致龋细菌以及dmft呈正相关关系,敏感度为58.8%,特异度为83.7%,阳性预测值为70.2%。结论RD法能反映唾液、菌斑中致龋细菌数量以及受测试者患龋现状。

一种快速检测儿童唾液内MS菌的方法——刃天青纸片法

本试验收集202例3～5岁学龄前儿童唾液标本,用微氧培养法及刃天青纸片法检查唾液内致龋的MS菌群(包括:Streptococeus·mutans,S·sobcinus,S·cncetus,S·sattus四个菌种),同时记录每个儿童口腔内患龋情况。通过对试验结果的对照分析发现:儿童的龋齿发生的数量和唾液内MS菌群的数量成正比关系,有龋和无龋之间的菌数有一个明显界线(1.6×10~5)。同时从唾液与刃天青纸片的颜色反应发现:不同的颜色反应(兰、

刃天青法检测mtDNA缺失C6ρ0细胞的活力

目的建立以刃天青为氧化还原指示剂测定mtDNA被完全清除的大鼠胶质瘤C6细胞(C6ρ0)增殖及活力的方法,并对其有效性进行验证。方法取对数生长期的C6ρ0细胞,采用刃天青法比较不同细胞数量、刃天青浓度、孵育时间对荧光强度的影响,优化测定C6ρ0细胞活力的条件。比较MTT法和刃天青法测定C6ρ0和C6细胞活力的灵敏性,并以天然化合物熊果酸对C6ρ0和C6细胞活力的影响对该方法进行验证。结果 C6ρ0细胞数为0~30 000/孔,25μg/mL刃天青培养基避光孵育1~4 h,细胞数量与荧光强度呈良好线性关系,灵敏性高于MTT法。熊果酸0~50μmol/L对C6ρ0和C6细胞具有增殖抑制作用,且增殖抑制率差异有统计学意义(P<0.05),IC50分别为20.82、14.62μg/mL。结论刃天青法灵敏、简单、安全无毒、经济便宜、重复性好,特别适用于生长代谢缓慢的细胞系,可用于其细胞增殖测定、活力分析及化合物细胞毒的高通量筛选。

刃天青微孔板法在本科实验教学中的应用

刃天青微孔板法是一种新近开发的快速测定抑菌活性的方法,已广泛应用于杀菌剂的高通量筛选及活性评价。文章以代表性病原真菌灰霉病菌为供试菌,应用刃天青微孔板法,设计了嘧菌酯杀菌剂对灰霉病菌的抑菌活性测定实验。与传统菌丝生长速率法相比,该方法具有样品消耗少、观察便捷、反应灵敏等优点,可用于杀菌剂活性定量测定实验,也可与农药化学、天然产物化学的杀菌剂合成或提取分离相关实验相结合,设计探究式实验,更好地培养学生的科研创新思维和综合实践能力,提高教学质量。

利用刃天青试剂快速检验普通白菜种子活力的研究

为了探索简单、快速、非破坏性检测普通白菜种子活力的方法,以苏州青、上海青种子为试材,44℃条件下人工老化处理0、2、4、6 d,测定种子活力指标及刃天青浸泡液颜色变化、吸光度,并进行相关性分析。结果表明:2个普通白菜品种的种子活力变化趋势相同,均随着种子老化程度的增加发芽率、发芽指数、活力指数明显下降;随着种子老化程度的加剧,刃天青浸泡液颜色从蓝色到粉色再到无色,吸光度亦明显下降;老化种子的发芽率与刃天青浸泡液吸光度、蓝色孔比例呈极显著正相关,相关系数均在0.96以上;老化种子的活力指数、发芽指数与刃天青浸泡液吸光度呈显著或极显著正相关。

刃天青-酵母混合试剂快速鉴定小麦种子活力研究

为探索小麦简便、快速的活力检测方法,采用刃天青-酵母混合试剂对单粒小麦种子进行浸泡,通过浸泡液颜色的变化判断种子活力高低。对小麦种子进行人工老化3d、6d以获得活力不同的种子,将人工老化后的3种不同活力种子平均分布于96孔板中,在35℃条件下反应后进行颜色观察,并用酶标仪在570nm下进行吸光度检测。结果显示:160μL是适宜的反应体积,5.5h是适宜的保温时间。相关分析表明,小麦种子活力、浸泡后种子的发芽率与5.5h刃天青浸泡液的吸光度值呈显著正相关,且蓝色部分的百分比与种子活力具有高度相关性。可以采用刃天青试剂颜色变化或570nm平均吸光度值来快速、准确地预测小麦种子活力。

刃天青微孔板显色法在抗念珠菌药敏实验中的应用

目的探讨刃天青微孔板显色法在抗念珠菌药敏实验中的应用。方法采用NCCLS之M27-A方案测定伊曲康唑、氟康唑和两性霉素B对87株临床分离的念珠菌属真菌的最低抑菌浓度（MIC），终点判定同时采用NCCLS推荐的直接观察法和刃天青微孔板显色法。结果直接观察法和刃天青微孔板显色法判定所得的MIC结果具有高度的-致性。结论刃天青微孔板显色法具有结果客观、灵敏度高、准确等特点，因而可替代直接观察法用于真菌药敏实验终点的判定。

刃天青法检测K562细胞对几种抗肿瘤药物的敏感性

采用刃天青法检测丝裂霉素（MMC）、顺铂（DDP）、5-氟尿嘧啶（5-Fu）三种抗肿瘤药物对人慢性髓系白血病细胞K562的敏感性,并与传统MrTT法的检测结果进行比较探索刃天青法用于检测抗肿瘤药物敏感性的可行性.结果表明：采用刃天青法测得丝裂霉素（MMC）、顺铂（DDP）、5-氟尿嘧啶（5-Fu）作用于K562细胞的最适浓度分别为100 μg/mL、30 μg/mL、100 μg/mL,最佳时间分别为6～16h、10 ～24h、6～16h,刃天青法和MTT法结果没有显著差异（P＞0.05）.结果提示：刃天青法和MTT法检测结果具有一致性,可用于抗肿瘤药物的敏感性检测.

刃天青药片的研究

目的研制一种能快速检测龋活性的刃天青成品药片，预测龋活跃性与幼儿乳牙龋蚀状况的相关性，为幼儿龋病预防工作提供一种成品化的预测方法。方法用研制的检测龋病活跃性的刃天青药片和日本R．Dtest成品药片对照，分别检测大连市1019名4～6岁幼儿口腔情况并观察其纸片变色程度与龋失补牙数（dmft）的关系，评价与龋失补牙数的相关性。结果本试验研制的刃天青药片变色程度与龋失补牙数呈正相关关系（r=0．441，P〈0．01），与对照组（r=0．364，P〈0．05）无显著性差异（P〉0．5）；灵敏度为91．39％，阳性预测值70．84％。结论本试验所研制的刃天青药片灵敏度、准确率高，与日本R．Dtest成品药片相一致，可反映受试者的患龋现状。

一种基于刃天青还原的荧光方法对β-葡萄糖苷酶活性的检测

建立了一种简单的荧光分析方法实现了对β-葡萄糖苷酶的定量分析检测。其原理是底物2-O-β-D-葡萄糖基-L-抗坏血酸(AA-2βG)在β-葡萄糖苷酶的水解作用下生成抗坏血酸,后者将刃天青还原生成具有强烈荧光的试卤灵,通过溶液荧光强度的变化对β-葡萄糖苷酶活性进行检测。结果发现,抗坏血酸浓度在3～400μmol/L范围内与反应体系在585 nm处的荧光强度呈线性关系,相关系数r^2=0.981。并基于此实现了对β-葡萄糖苷酶活性的定量检测:β-葡萄糖苷酶的浓度在1～30 U/L范围内与溶液在585 nm处的荧光强度呈良好的线性关系,相关系数r^2=0.995,检出限为1.0 U/L。该方法操作简单,反应灵巧,检测范围较宽,可实现对β-葡萄糖苷酶活性的定量分析检测。

利用相转移催化剂合成刃天青

在相转移催化剂聚乙二醇-600催化下,以间苯二酚为主要原料,经氧化合成刃天青,优化了反应条件,找到对环境更友好、产率较高的合成方法。