慢病毒介导microRNA-214在成牙骨质细胞分化过程中的功能研究

目的:构建microRNA-214沉默慢病毒载体并研究其在成牙骨质细胞分化过程中的作用。方法:常规条件下培养成牙骨质细胞系(OCCM-30 cell lines),并对其进行矿化诱导,检测牙骨质分化相关标记物的变化。构建microRNA-214沉默慢病毒载体并感染成牙骨质细胞后,用荧光显微镜检测其感染效率,cck8测定各组细胞的增殖速率;用茜素红和Von kossa染色检测各组成牙骨质细胞的矿化能力;Real-Time PCR检测各组细胞牙骨质分化标志物的表达水平。结果:常规诱导成牙骨质细胞并检测其标志物的改变,结果表明成牙骨质细胞矿化诱导成功。荧光显微镜显示,microRNA-214沉默载体能够顺利进入细胞;cck8测定结果显示,microRNA-214沉默组能显著提高成牙骨质细胞的增殖速率;茜素红和Von kossa染色结果发现,空白组和阴性对照组矿化结节形成量较少,而microRNA-214沉默组则形成较多的矿化结节;成牙骨质细胞矿化标志物检测显示,microRNA-214沉默组成牙骨质矿化标志物表达量较高(P<0.05)。结论:microRNA-214沉默能够促进成牙骨质细胞的分化。

GDF11通过介导PI3K/AKT通路对人牙髓干细胞体外矿化能力的影响研究

目的:探究GDF11在人牙髓干细胞(hDPSCs)矿化过程中的作用及潜在机制。方法:收集拔除的25岁以下患者第三磨牙组织,用成骨培养基诱导培养原代hDPSCs,对传代培养的细胞进行流式细胞术hPDSCs鉴定。用RNA干扰技术对hDPSCs进行生长分化因子11(GDF11)基因敲减实验。免疫荧光染色用于验证hDPSCs中GDF11的表达和分布,商业试剂盒用于检测hDPSCs牙源性分化和矿化能力;qRT-PCR用于检测牙本质相关标志物(牙本质唾液酸磷蛋白(DSPP)、骨钙素(OCN)和Ⅰ型胶原α1链(COL1a1))的表达水平;Western Blot用于检测PI3K/AKT信号通路中相关蛋白分子的蛋白磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)和磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR))表达水平。结果:GDF11在hDPSCs中表达主要分布在细胞质中,敲减GDF11后可减弱牙源性分化和矿化能力(P<0.05),导致牙本质标志物相关基因DSPP、OCN和COL1a1的转录水平显着下调(P<0.05),并下调PI3K/AKT信号通路中相关蛋白分子的蛋白p-AKT和p-mTOR表达(P<0.05)。结论:GDF11通过PI3K/AKT信号通路正向调节h DPSCs的牙源性分化和矿化。