分化拮抗非蛋白编码RNA与肿瘤相关性的研究进展

长链非编码RNA(lncRNA)已被证实在多种疾病的发生发展过程中与细胞分化、增殖、迁移和凋亡密切相关。同时,lncRNA通过调控转录和转录后调控肿瘤的发生和发展。分子生物学研究发现,lncRNA作为重要的调控因子参与肿瘤的形成及发展,其异常表达可直接发挥癌基因和(或)抑癌基因的作用,在预后或诊断中具有重要作用。分化拮抗非蛋白编码RNA(DANCR)是近年来新定义的一种lncRNA,目前已有较多的研究表明DANCR在维持表皮内未分化的细胞状态方面起重要作用。DANCR也参与肿瘤发生发展的各种分子事件,下调DANCR表达可抑制胃癌、肝癌、结直肠癌、前列腺癌等大多数恶性肿瘤的增殖、侵袭和转移。

乳腺癌分化拮抗非蛋白编码RNA表达及作用研究进展

长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是一种包含长于200个核苷酸序列且无法编码为蛋白的非编码RNA。已有较多研究证实lncRNA在乳腺癌中表达失调,参与乳腺癌的进展。分化拮抗非蛋白编码RNA是人类染色体4q12上编码的lncRNA,在乳腺癌中呈异常上调表达并广泛参与乳腺癌进展的多种信号通路。全文就分化拮抗非蛋白编码RNA在乳腺癌中的表达、功能及作用机制作简要综述。

分化拮抗非编码RNA-201对单核-巨噬细胞功能的调控研究

目的:探究分化拮抗非编码RNA-201(differentiation antagonizing non-protein coding RNA,DANCR-201)在单核-巨噬细胞炎症反应中的调控作用。方法:纳入中国医学科学院阜外医院疑为冠心病接受冠状动脉CT检查的患者25例,年龄≥45岁。根据冠状动脉CT血管造影图像,研究对象分为3组,包括无斑块健康对照组(n=10)、完全钙化斑块组(n=10)和易损斑块组(n=5)。采用全转录组测序技术分析外周血全血中表达差异的长链非编码RNA分子。培养人单核细胞白血病细胞系(THP)-1细胞,用于建立M1和M2型巨噬细胞极化模型,采用慢病毒感染和Smart Silencer转染技术分别过表达和敲低DANCR-201,检测炎症因子、脂质代谢与血管钙化相关基因的表达水平,采用油红O染色法检测巨噬细胞脂质吞噬能力,采用胆固醇流出实验检测巨噬细胞胆固醇逆转运能力。结果:DANCR-201在易损斑块组患者外周血的表达水平显著升高。在单核细胞系中过表达DANCR-201,可促进单核趋化蛋白-1(MCP-1)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)高表达(P<0.01);反之,敲低DANCR-201时,可使MCP-1和TNF-α的表达水平显著下降(P<0.01)。在M1和M2型巨噬细胞中,DANCR-201显著抑制Runt相关转录因子2(Runx 2)表达水平(P<0.01),并促进骨保护素(OPG)高表达(P<0.05);反之,敲低DANCR-201时,M1和M2型巨噬细胞中的Runx 2表达水平升高,而OPG表达水平下降(P<0.01)。DANCR-201对巨噬细胞脂质吞噬和胆固醇逆转运能力无显著影响。结论:DANCR-201促进M1和M2型巨噬细胞的炎症反应,其在动脉粥样硬化斑块形成中的作用机制仍需深入研究。

过表达lncRNA HAGLR促胫骨骨折大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的机制研究

目的研究骨质疏松(OP)-胫骨骨折(TF)大鼠长链非编码RNA同源盒D基因簇反义生长相关长链非编码RNA(lncRNA HAGLR)与其下游靶基因的表达情况,并探讨lncRNA HAGLR对大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)成骨分化的作用与机制。方法30只SD雌性大鼠随机分为sham组、OP组、OP-TF组,每组10只。ELISA法检测大鼠血清碱性磷酸酶(ALP)和抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)的水平。对大鼠MSC细胞系R7500使用成骨分化诱导培养基进行诱导,并分为MSC组和成骨诱导组(Osteogenic-MSC组)。分别转染pcDNA-HAGLR、pcDNA-NC、miR-19a-3p的模拟物(miR-19a-3p mimic)、mimic的阴性对照(NC mimic)、miR-19a-3p的抑制剂(miR-19a-3p inhibitor)、miR-19a-3p inhibitor的阴性对照(NC inhibitor)至R7500后进行相应分组。双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA HAGLR和miR-19a-3p以及骨形态发生蛋白2(BMP2)和miR-19a-3p的靶向关系。qRT-PCR检测各组lncRNA HAGLR和miR-19a-3p的表达。Western blot检测BMP2、ALP、胶原蛋白I(COL-I)、骨钙素(OCN)、骨桥蛋白(OPN)的表达。ALP染色和AR染色检测MSC的成骨分化能力。结果OP组和OP-TF组的血清ALP和TRAP水平均高于sham组,差异有统计学意义(P<0.05)。而OP组与sham组胫骨组织中lncRNA HAGLR、miR-19a-3p、BMP2的表达水平比较差异均无统计学意义(P>0.05),而OP-TF组胫骨组织中lncRNA HAGLR、BMP2的表达水平均明显低于sham组和OP组(P<0.05),OP-TF组胫骨组织中miR-19a-3p的表达水平高于sham组和OP组(P<0.05)。与MSC组相比,Osteogenic-MSC组的lncRNA HAGLR表达水平明显升高(P<0.05),而miR-19a-3p的表达降低(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验表明lncRNA HAGLR与miR-19a-3p具有靶向关系,miR-19a-3p与BMP2具有靶向关系。pcDNA-HAGLR组的miR-19a-3p的表达水平低于pcDNA-NC组(P<0.05)。miR-19a-3p mimic组与NC mimic组的lncRNA HAGLR的表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与NC mimic组相比,miR-19a-3p mimic组BMP2的表达水平降低(P<0.05),miR-19a-3p表达水平升高(P<0.05)。pcDNA-HAGLR组细胞较pcDNA-NC组具有更强的成骨分化能力和更高的ALP活性(P<0.05)。miR-19a-3p inhibitor组细胞较NC inhibitor组具有更强的成骨分化能力和更高的ALP活性(P<0.05)。结论胫骨骨折大鼠lncRNA HAGLR和BMP2表达降低,miR-19a-3p表达增高。过表达lncRNA HAGLR通过靶向调控miR-19a-3p/BMP2轴促进大鼠MSC的成骨分化。

骨形态发生蛋白2诱导C3H10T1/2细胞成骨分化中长链非编码RNA的作用

背景:人类长链非编码RNA是现今的研究热点,已有研究报道其在肿瘤发生中的作用机制,但其在成骨分化方面的机制并不明确。目的:观察人类长链非编码RNA在经骨形态发生蛋白2诱导小鼠C3H10T1/2细胞成骨分化中的作用,并探讨其分子机制。方法:首先进行碱性磷酸酶染色和成骨指标基因检测。对C3H10T1/2细胞在骨形态发生蛋白2诱导下的成骨分化过程长链非编码RNA表达变化进行芯片分析。采用高通量测序比较骨形态发生蛋白2诱导组和未经骨形态发生蛋白2诱导组的表达变化,筛选出表达下降的基因。过表达相应长链非编码RNA后观察对骨形态发生蛋白2诱导成骨分化的影响。结果与结论:骨形态发生蛋白2诱导C3H10T1/2细胞导致碱性磷酸酶活性增加。骨形态发生蛋白2诱导72 h后,碱性磷酸酶、Id1、骨钙素、Runx2、sp7表达上升(P<0.05)。未诱导C3H10T1/2细胞与骨形态发生蛋白2诱导细胞芯片杂交后结果比较,下降达1.5倍的长链非编码RNAs有24条,其中只有AK035085有内含子。与未过表达AK035085的对照组相比,骨形态发生蛋白2诱导72 h后AK035085过表达的C3H10T1/2细胞碱性磷酸酶、Id1、骨钙素、Runx2、sp7表达均下降(P<0.05)。提示骨形态发生蛋白2可刺激C3H10T1/2细胞发生成骨分化,AK035085可能对C3H10T1/2细胞的成骨分化存在抑制作用。

妊娠期糖尿病患者血清LncRNA DANCR和miR-33a-5p水平表达对妊娠结局预测价值研究

目的 探讨妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus,GDM)患者血清长链非编码核糖核酸分化拮抗非蛋白编码RNA (long noncoding RNA differentiation antagonizing nonprotein coding RNA,LncRNA DANCR)、微小RNA-33a-5p (miR-33a-5p)水平表达对妊娠结局的预测价值。方法 选取2021年8月~2023年2月于衡水市第四人民医院产检和分娩的154例GDM患者为GDM组,并根据妊娠结局分为良好结局组(n=115)和不良结局组(n=39);同期收集24周葡萄糖耐量试验正常的149例健康孕产妇作为对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测血清LncRNA DANCR和miR-33a-5p水平;采用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析血清LncRNA DANCR和miR-33a-5p预测GDM患者不良妊娠结局的价值;采用Pearson相关性分析GDM不良妊娠结局患者血清LncRNA DANCR,miR-33a-5p与空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、稳态模式评估法计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)的相关性;Logistic回归分析GDM患者不良妊娠结局的影响因素。结果 GDM组血清LncRNA DANCR水平(0.69±0.15)显著低于对照组(1.01±0.22),miR-33a-5p (1.59±0.40)及不良妊娠结局总发生率(25.34%)显著高于对照组(1.02±0.23,5.36%),差异具有统计学意义(t/χ^(2)=14.835,15.140,23.011,均P<0.05)。不良妊娠结局组血清LncRNADANCR水平(0.50±0.14)显著低于良好结局组(0.75±0.18),miR-33a-5p (2.00±0.58),FBG (8.97±0.66mmol/L),FINS (18.63±1.31pmol/ml)和HOMAIR (7.42±0.98)显著高于良好结局组(1.45±0.26,8.01±0.59mmol/L,14.32±1.29pmol/ml,5.10±0.86),差异具有统计学意义(t=7.895~17.961,均P<0.05)。LncRNA DANCR,miR-33a-5p单独及二者联合预测GDM患者不良妊娠结局的曲线下面积(area under curve,AUC)分别为0.820,0.819和0.897。GDM不良妊娠结局患者血清LncRNA DANCR与FBG,FINS,HOMA-IR呈负相关(r=-0.498,-0.513,-0.509,均P<0.05),miR-33a-5p与FBG,FINS,HOMA-IR呈正相关(r=0.517,0.494,0.507,均P<0.05)。LncRNA DANCR是影响GDM患者不良妊娠结局的保护因素(OR=0.804,95%CI:0.693~0.933,P=0.004),miR-33a-5p是影响GDM患者不良妊娠结局的危险因素(OR=2.747,95%CI:1.444~5.225,P=0.002)。结论 GDM不良妊娠结局患者LncRNADANCR降低,miR-33a-5p升高,二者均是不良妊娠结局的影响因素。

小儿急性复杂性阑尾炎血清lncRNA-DANCR、miR-214-5p水平及其诊断价值

目的 分析血清长链非编码RNA(lncRNA)-分化拮抗非蛋白编码RNA(DANCR)和miR-214-5p对小儿急性复杂性阑尾炎的诊断价值。方法 本研究选取2019年1月—2022年1月宝鸡市中医医院收治的急性阑尾炎患儿102例作为研究组,根据病理结果分为单纯性阑尾炎组和复杂性阑尾炎组,另选同期本院健康体检儿童50例作为对照组;实时荧光定量PCR检测血清lncRNA-DANCR和miR-214-5p水平;采用全自动化学发光免疫分析仪检测C反应蛋白(CRP)以及降钙素原(PCT);Pearson法分析血清lncRNA-DANCR和miR-214-5p以及二者与CRP、PCT的相关性;Logistic回归分析小儿急性复杂性阑尾炎的影响因素;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清lncRNA-DANCR、miR-214-5p、CRP和PCT水平对小儿急性复杂性阑尾炎的诊断价值。结果 复杂性阑尾炎组和单纯性阑尾炎组血清lncRNA-DANCR、CRP和PCT水平显著升高(P<0.05),复杂性阑尾炎组和单纯性阑尾炎组血清miR-214-5p显著降低(P<0.05)。Pearson相关性分析血清lncRNA-DANCR和miR-214-5p呈负相关(P<0.05),血清lncRNA-DANCR与CRP和PCT呈正相关(P<0.05),miR-214-5p与CRP和PCT呈负相关(P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,lncRNA-DANCR、CRP和PCT高表达和miR-214-5p低表达是影响小儿急性复杂性阑尾炎的危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析四者联合优于lncRNA-DANCR和miR-214-5p各自单独诊断(Z_(联合vs. lncRNA-DANCR=2.647)、Z_(联合vs. miR-214-5p=4.256)、Z_(联合vs. CRP=3.245)、Z_(联合vs. PCT=3.267),均P<0.05)。结论 在急性复杂性阑尾炎患儿血清中lncRNA-DANCR高表达,miR-214-5p低表达,二者联合可诊断小儿急性复杂性阑尾炎。

长链非编码RNA AK089560在间质干细胞成骨与成脂分化中的表达

背景:最近研究发现众多长链非编码RNA调控干细胞多潜能性和分化。长链非编码RNA AK089560在干细胞多向分化中的表达变化及作用,目前尚不清楚。目的:观察间质干细胞C3H10T1/2成骨分化与成脂分化过程中AK089560的表达。方法:重组人骨形态发生蛋白2诱导间质干细胞C3H10T1/2成骨分化,碱性磷酸酶染色鉴定早期成骨分化。地塞米松、吲哚美辛和胰岛素三因子联合诱导C3H10T1/2成脂分化,油红O染色鉴定成脂分化结果。采用qRT-PCR检测诱导前后不同时间点AK089560表达的变化。采用RNAfold软件预测AK089560二级结构,UCSC基因组浏览器分析AK089560邻近编码蛋白基因,fancyGENE在线软件构件长链非编码RNA与编码基因关系图。结果与结论:C3H10T1/2经成骨诱导后,70%以上细胞碱性磷酸酶染色阳性;成脂分化诱导后,80%以上细胞油红O染色阳性。qRT-PCR结果显示,长链非编码RNA AK089560在成骨分化与成脂分化第2,4,6天表达均明显下降,成骨分化与成脂分化第2,4,6天与相应时间未分化组相比均差异有显著性意义(P<0.05)。生物信息学分析表明,LncRNA AK089560具有复杂茎环结构,与编码基因Sema3a形成sense overlap关系。结果表明AK089560在间质干细胞成骨与成脂分化中下调表达,提示其可能参与调控间质干细胞多向分化。

长链非编码RNA MEG3对成骨分化及骨性疾病影响的研究进展

非编码RNAs(non-coding RNAs,ncRNAs)是一类没有编码蛋白功能的RNA分子,根据它的大小,可分为小非编码RNA和长链非编码RNAs(long non-coding RNAs,lncRNAs)。lncRNA是一种长度超过200个核苷酸的非编码RNA,ncRNA的80%都是长链非编码RNA。人们最初认为lncRNA是转录的垃圾,但后来逐渐发现了lncRNA通过参与调控目的基因的表达,或者通过与启动子和增强子相互作用,进而对染色质重构、DNA甲基化、组蛋白修饰及RNA聚合酶的活性进行调控,从而调节细胞的增殖和分化过程。母系表达的基因3(Maternally expressed gene3,MEG3)是母系表达的lncRNA,为一种位于染色体14q32的肿瘤抑制基因。

血清长链非编码RNA DANCR在非小细胞肺癌诊断中的临床应用

目的探讨长链非编码RNA DANCR在非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清中的表达水平及其在NSCLC诊断中应用价值。方法收集82例NSCLC患者、45例肺部良性疾病患者及50例健康体检者的外周血标本。提取血清中的总RNA,应用实时荧光定量PCR技术检测血清中DANCR的表达水平,并分析其与NSCLC患者临床病理学特征之间的关系。结果DANCR在NSCLC患者血清的相对表达量为3.05(1.94,4.29),显著高于肺部良性疾病患者[1.33(0.96,2.48)]及健康对照者[1.01(0.81,1.50)](P<0.01),而肺部良性疾病患者与健康对照者之间差异无统计学意义(P>0.05)。NSCLC患者血清DANCR表达水平与TNM分期(P<0.05)及肿瘤大小(P<0.05)相关。ROC曲线分析结果显示:DANCR、CEA和Cyfra21-1的曲线下面积(AUC)分别为0.830、0.763、0.738。当联合DANCR、CEA和Cyfra21-1进行检测时,AUC达0.923,诊断敏感度和特异度分别为89.02%和84.00%。结论DANCR在NSCLC患者血清中表达水平升高,可能作为NSCLC辅助诊断的生物标志物。

长链非编码RNA调控成骨分化对骨代谢疾病影响的研究进展

长链非编码RNA(long non-coding RNA,lnc RNA)是一类转录本长度超过200bp的不编码蛋白质的RNA,lncRNA在早期被认为是无生物学功能的"转录噪音",属于RNA聚合酶Ⅱ转录的副产物,不具有生物学功能[1]。随着人们对lncRNA的了解加深,发现lncRNA在生物发育、基因表达等众多生命活动中发挥着重要的调控功能。

人辅助性T细胞分化过程中长非编码RNA的表达和功能

长非编码RNA（long noncoding RNAs,lncRNAs）是一种长度大于200个碱基,且由于序列中含大量的终止密码因此基本不会翻译成为蛋白的RNA。哺乳动物基因组预计可以编码超过10,000个长非编码RNA。长非编码RNA发挥作用的方式包括转录激活或抑制蛋白编码基因、与mRNA结合影响其翻译、与蛋白结合影响其功能等等,进而参与机体的多种生理和病理过程。已报导在人体和动物模型中,长非编码RNA水平的升高或降低与多种病生理状态相关。

LncRNA DANCR靶向miR⁃3646减轻缺氧诱导的大鼠心肌细胞系H9c2的损伤

目的研究长链非编码RNA(lncRNA)分化拮抗非蛋白编码RNA(DANCR)在心肌缺血中的作用与微小RNA-3646(miR-3646)的靶向调控关系。方法大鼠心肌细胞系H9c2分为6组:对照组、缺氧组、pc-DANCR(DANCR过表达)组、pc-NC(DANCR过表达对照)组、miR-3646 mimic(miR-3646模拟物)组、mimic NC(miR-3646模拟物对照)组及pc-DANCR+miR-3646 mimic组。RT-qPCR检测lncRNA DANCR及miR-3646表达以判定转染效果;流式细胞测量术检测细胞凋亡率;CCK-8法检测细胞生存率;电镜观察H9c2细胞结构损伤;Western blot检测活化半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶-3(cleaved caspase-3)和血红素加氧酶-1(Ho-1)表达。双荧光素酶实验验证miR-3646与lncRNA DANCR和Ho-1的靶向关系。RNA干扰Ho-1(ShHo-1)与pc-DANCR共转染H9c2细胞,检测细胞生存率。结果与对照组相比,缺氧组H9c2细胞损伤、凋亡严重,生存率及lncRNA DANCR表达降低,miR-3646表达升高(P<0.05)。与缺氧组相比,pc-DANCR组H9c2细胞损伤、凋亡减轻,细胞生存率升高,Ho-1表达升高,miR-3646表达降低(P<0.05)。miR-3646模拟物组H9c2细胞损伤和凋亡进一步加重,且miR-3646模拟物可减弱pc-DANCR的抗损伤及抗凋亡作用(P<0.05)。干扰Ho-1可减弱lncRNA DANCR对缺氧诱导的H9c2细胞生存的促进作用(P<0.05)。结论LncRNA DANCR可靶向下调miR-3646表达减轻缺氧诱导的H9c2细胞损伤。

长链非编码RNA DANCR在结肠癌组织细胞中表达及其对LOVO细胞侵袭能力的影响

目的观察长链非编码RNA分化拮抗非编码RNA(lncRNA DANCR)在结肠癌组织细胞中的表达情况及其对结肠癌细胞侵袭能力的影响。方法采用qRT-PCR法检测92例结肠癌及癌旁组织中的DANCR,比较不同临床病理特征患者结肠癌组织中DANCR表达; qRT-PCR法检测结肠癌细胞LOVO及正常肠上皮细胞NCM460中的DANCR;将LOVO细胞随机分为对照组和沉默组,分别转染对照质粒si-con及DANCR沉默质粒si-DANCR,qRT-PCR法检测DANCR,Transwell侵袭实验计数穿膜细胞数评价细胞侵袭能力,Western blotting法检测侵袭转移相关因子基质金属蛋白酶9(MMP9)。结果结肠癌组织DANCR相对表达量为高于癌旁组织,LOVO细胞DANCR相对表达量高于NCM460细胞(P均<0. 01)。临床分期Ⅲ期+Ⅳ期、T分期T3期+T4期、淋巴结转移和远处转移患者结肠癌组织中DANCR高表达率高于临床分期Ⅰ期+Ⅱ期、T分期T1期+T2期、无淋巴结转移和无远处转移者(P均<0. 01)。与对照组比较,沉默组细胞DANCR表达降低、穿膜细胞减少、细胞MMP9蛋白表达降低(P均<0. 01)。结论 lncRNA DANCR在结肠癌组织及细胞中表达升高,在结肠癌的发生发展过程中起到了癌基因的角色; DANCR可提高结肠癌细胞的侵袭能力,该作用与上调MMP9蛋白表达有关。

分化拮抗非编码RNA-201对人脐静脉内皮细胞增殖的影响

目的探讨分化拮抗非编码RNA(DANCR)-201对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖的影响。方法分离培养HUVECs后,构建过表达或敲低DANCR-201的细胞模型,采用长时间动态活细胞成像方法和细胞划痕实验检测HUVECs增殖和迁移能力。采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测细胞增殖相关蛋白Phospho-c-Raf和细胞周期蛋白p16、p53的表达。结果过表达DANCR-201可促进HUVECs增殖[(67.1±5.4)%比(90.4±3.5)%,P<0.01]和迁移[(64.2±1.5)%比(88.6±3.1)%,P<0.05],同时细胞增殖相关蛋白Phospho-c-Raf表达水平升高(P<0.01),细胞周期蛋白p16、p53表达水平均降低(P<0.01或0.05)。敲低DANCR-201对HUVECs增殖和迁移无影响,但细胞周期蛋白p16、p53表达水平均升高(P<0.01或0.05)。结论DANCR-201促进HUVECs增殖,但其在动脉粥样硬化斑块形成中的作用机制仍需深入研究。

非编码RNA及其研究进展

目前 ,大致有 10类ncRNA的神秘面纱被揭开 ,这些分布广泛的ncRNA ,在多种生物体的重要生命过程中具有不可替代的作用。它们的长度变化很大 ,但都不编码蛋白质 ,直接在RNA水平上发挥着调控作用 ,如细胞的生长和分化 ,个体的发育时序调控 ,以及疾病的形成和抑制等。因而 ,对ncRNA的深入研究将对基因功能开发、人类疾病防治及生物进化的探索有重要意义。

长链非编码RNA TINCR在肿瘤中作用的研究进展

近年来随着肿瘤研究的深入,长链非编码RNA(long non-coding RNA,lnc RNA)受到高度重视,在肿瘤的发生、发展、治疗和预后等方面发挥重要的作用。组织分化诱导非蛋白编码RNA(tissue differentiation inducing non-protein coding RNA,TINCR)在表皮细胞分化中具有重要作用,可促进表皮形成,TINCR缺如时则表现为表皮形成障碍。研究发现TINCR在结直肠癌、胃癌、鳞状细胞癌、膀胱癌、乳腺癌、肝细胞癌和黑色素瘤等表达异常,TINCR与多种分子相互作用而影响基因转录及转录后过程,可加速肿瘤发展,研究TINCR在肿瘤中的作用对肿瘤早期诊断及预后评估具有重要意义,TINCR可作为多种肿瘤的标志物及治疗的潜在靶标。

lncRNA ANCR调节骨质疏松大鼠脂肪源性干细胞分化成骨细胞及对Wnt信号通路的作用机制

目的探讨lncRNA ANCR调节骨质疏松(osteoporosis,OP)大鼠脂肪源性干细胞分化成骨细胞及对Wnt信号通路的作用机制。方法将lncRNA ANCR siRNA慢病毒载体及慢病毒空载体分别转染至脂肪源性干细胞,分为siRNA组、空载体组、干细胞组。分别通过碱性磷酸酶染色观察ALP染色效果、Western blot法检测Wnt/β-catenin蛋白水平、茜素红染色实验检测成骨染色效果、免疫组化法检测Wnt/β-catenin信号阳性表达的差异性。结果与空载体组、干细胞组相比较,siRNA组细胞中ALP染色显著加深(P均<0.05),成骨染色更为显著(P均<0.05);与空载体组,干细胞组相比较,siRNA组细胞Wnt/β-catenin蛋白表达显著上升(P均<0.05),Wnt/β-catenin阳性数显著升高(P均<0.05);空载体组与干细胞组比较,细胞中Wnt/β-catenin蛋白、ALP表达水平、Wnt/β-catenin阳性数相近,无显著差异(P>0.05)。结论lncRNA ANCR的表达水平与骨质疏松大鼠体内脂肪源性干细胞的分化存在显著相关性,下调lncRNA ANCR能够促进脂肪源性干细胞向成骨细胞分化,其作用机制可能与调控Wnt/β-catenin的表达有关。

LncRNA MALAT1通过miR-34c/SATB2轴对脂肪间充质干细胞成骨分化的促进作用

目的:探讨长非编码RNA肺癌转移相关转录本1(LncRNA MALAT1)通过微小RNA(miR)-34c/特异AT序列结合蛋白2(SATB2)轴对脂肪来源的间充质干细胞(ADSCs)成骨分化的影响,并阐明其作用机制。方法:人ADSCs转染Lenti-NC、Lenti-MALAT1、sh-NC、sh-MALAT1、miR-NC和miR-34c,RT-PCR法检测ADSCs中LncRNA MALAT1、miR-34c和SATB2 mRNA表达水平;miRcode和TargetScan 7.1网站预测并通过荧光素酶报告基因实验验证miR-34c与LncRNA MALAT1、miR-34c与SATB2之间的靶向结合作用;Western blotting法检测ADSCs中成骨标志物Runt相关转录因子2(Runx2)、骨桥蛋白(OPN)和骨钙蛋白(OCN)表达水平;碱性磷酸酶(ALP)染色和茜素红S(ARS)染色检测ADSCs中ALP和ARS水平及钙盐沉积。结果:与第0天比较,ADSCs成骨诱导第3、7、14和21天后,细胞中LncRNA MALAT1、SATB2、Runx2、OPN和OCN蛋白表达水平明显升高(P<0.05),miR-34c表达水平明显降低(P<0.05)。与Lenti-NC组和sh-NC组比较,Lenti-MALAT1组ADSCs中LncRNA MALAT1表达水平,Runx2、OPN和OCN蛋白表达水平,ALP和ARS水平明显升高(P<0.01),sh-MALAT1组上述指标明显降低(P<0.01)。与miR-NC+Lenti-NC组比较,miR-34c+Lenti-NC组ADSCs中Runx2、OPN和OCN蛋白表达水平明显降低(P<0.01),ALP和ARS水平明显降低(P<0.01),miR-34c+Lenti-MALAT1组ADSCs中上述各项指标比较差异无统计学意义(P>0.05)。与Lenti-NC+miR-NC组比较,Lenti-SATB2+miR-NC组ADSCs中Runx2、OPN和OCN蛋白表达水平及ALP和ARS水平明显升高(P<0.01),Lenti-SATB2+miR-34c组上述各项指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论:LncRNA MALAT1通过miRNA-34c/SATB2轴促进ADSCs的成骨分化。

长链非编码RNA TINCR通过miR-7调控肝癌细胞系Huh7侵袭和迁移

目的研究长链非编码RNA(lncRNA)组织分化诱导非蛋白质编码RNA(TINCR)通过miR-7调控肝癌Huh7细胞侵袭和迁移的机制。方法Real-time PCR测定Huh7细胞中TINCR表达。Huh7细胞中转染TINCR shRNA,CCK-8法测定增殖;Transwell小室法测定侵袭和迁移;Western blot测定MMP-2和MMP-9蛋白表达。生物信息学软件预测发现TINCR和miR-7有结合位点,荧光素酶报告系统鉴定二者靶向关系。Huh7细胞中共转染miR-7 inhibitor和TINCR shRNA,利用上述方法测定细胞增殖、迁移和侵袭变化。结果肝癌细胞中TINCR表达水平明显高于正常肝细胞(P<0.05)。转染TINCR shRNA后的Huh7细胞中TINCR水平降低(P<0.05),细胞增殖、迁移以及侵袭能力均下降(P<0.05),细胞中MMP-2和MMP-9蛋白水平也降低(P<0.05)。TINCR靶向负调控miR-7表达。miR-7 inhibitor可以提高下调TINCR后的肝癌细胞增殖、迁移、侵袭能力以及MMP-2、MMP-9蛋白表达水平(P<0.05)。结论下调TINCR可以通过靶向促进miR-7表达抑制肝癌细胞Huh7侵袭和迁移。