头颈部鳞癌分化标志物与维甲酸的调变作用

现代肿瘤发育生物学观点认为，肿瘤起源于机体的正常干细胞，它的发生主要表现为一种分化障碍，不是去分化（ｄｅｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ）现象，而是由于基因表达的程序发生差错所导致的分化的异常，即异分化（ｄｉｓｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ）。头颈部鳞状细...

膀胱上皮分化标志物Uroplakins的研究进展

本文简述了Uroplakins的发现及其作为膀胱上皮终端分化标志物的证据、它们在刚性斑中的结构及可能的加工定位过程 ,并探讨了 (Ups)与膀胱炎症及膀胱癌的相关性 ,最后讨论了将Ups组织特异性启动子用于转基因研究的现状与前景。

IL-10调控HaCaT细胞增殖及分化的分子机制

目的探讨白细胞介素10(IL-10)对皮肤角质形成细胞(HaCaT)增殖影响和对氯化钙(CaCl 2)诱导的角质形成细胞分化标志物的表达影响及其可能的分子机制。方法以不同浓度IL-10(0、3、10、30 ng/ml)处理HaCaT细胞不同时间(0、24、48、72 h),MTS分析细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期;IL-10(终浓度为10 ng/ml)预处理HaCaT 1 h,加入或不加CaCl 2(终浓度为1.2 mmol/L)培养24、48、72 h,Western blot检测IL-10对HaCaT分化标志物表达影响;丝裂原蛋白激活激酶-胞外信号调节激酶(MAPKs-ERK1/2)特异性抑制剂PD98059及磷脂酰肌醇激酶-丝氨酸/苏氨酸激酶(PI3K-AKT)特异性抑制剂LY294002预处理HaCaT细胞,分别提取细胞总RNA和蛋白,荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blot检测IL-10对HaCaT细胞分化标志物(Keratin1、Keratin5、Involucrin)表达影响。结果MTS结果显示,在72 h内,IL-10(30 ng/ml和较低浓度)对HaCaT细胞增殖无影响;流式细胞分析结果提示IL-10不影响HaCaT细胞周期进程。Western blot分析显示,IL-10上调HaCaT角质形成细胞角质细胞分化标志物Involucrin表达,而对Keratin1及Keratin5没有显著的影响。机制研究分析显示,IL-10能够活化ERK1/2和AKT,增加其磷酸化水平;RT-qPCR和Western blot结果显示PD98059及LY294002部分阻断IL-10诱导的Involucrin的表达。结论IL-10在一定浓度范围内不影响HaCaT的增殖;IL-10部分通过MAPKs-ERK1/2和PI3K-AKT途径上调HaCaT分化标志物Involucrin表达。

MYOCARDIN的表达和在平滑肌细胞分化中的作用

目的在用血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)联合20%胎牛血清(FBS)诱导骨髓间充质干细胞(BM-SC)向平滑肌细胞(SMC)分化过程中,通过对促血管SMC分化因子myocardin和平滑肌分化标志物基因α-actin,SM-22等表达的研究,探讨myocardin在促血管SMC分化中的重要作用。方法采用骨髓干细胞培养基和贴壁法从小鼠骨髓中分离BMSC,然后细胞分为两组,诱导其向SMC分化:(1)20%FBS单独诱导;(2)PDGF-BB(50ng/ml)联合20%FBS诱导BMSC。分别于诱导0d,4d,8d,12d后用逆转录-聚合酶链反应法(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)和免疫组化法检测细胞myocardin,α-actin,SM-22的mRNA表达和蛋白表达情况.结果RT-PCR和免疫组化结果显示在对小鼠BMSC的诱导过程中,检测出了myocardin,同时还有平滑肌分化标志物基因α-actin,SM-22等的表达。0d,4d,8d两诱导组细胞的myocardin,α-actin,SM-22的mRNA和蛋白表达水平随着诱导时间延长而增强(P<0.05),而诱导8d及12d时表达基本趋于稳定,与SMC相比无明显统计学差异(P>0.05);并且各项指标的表达水平在PDGF-BB与20%FBS联合诱导时比20%FBS单独诱导表达增强。不同诱导组之间统计学比较有差异(P<0.05)。结论PDGF-BB联合20%FBS可有效诱导BMSC向SMC分化,myocardin在此过程中起着关键性作用,且PDGF-BB,20%FBS两者联合诱导比20%FBS单独诱导作用要强。

基底硬度对MSCs细胞Lamin A与成骨分化关系的影响

目的探讨基底硬度对骨髓间充质干细胞LaminA与成骨分化关系的影响。方法(1)探讨Lamin A对不同硬度基底上MSCs成骨分化的影响:分别在硬度不同的基底上接种MSCs,利用基因干扰技术降低Lamin A表达,干扰组为实验组,未处理组为对照组。培养3 d后利用蛋白免疫印迹法检测骨分化标志物碱性磷酸酶(ALP)、Runx 2和骨桥蛋白(OPN)的表达。

脑肿瘤干细胞体外分化过程中的回逆现象分析

目的探讨脑肿瘤干细胞(BTSCs)体外分化过程中的回逆现象,为研究其分化抑制机制奠定基础。方法利用CD133免疫磁珠筛选系统,从肿瘤组织中分离获得的CD133^-细胞(BTSCs)分成4组进行培养:(1)含10%胎牛血清(FCS);(2)10%FCS+丙戊酸钠注射液(VPA);(3)无FCS+生长因子;(4)无FCS+生长因子+VPA。取不同时间点上的细胞,相差显微镜观察其形态变化;流式细胞术检测与分化相关的标志物、细胞周期和DNA倍体变化:利用免疫激光共聚焦分析与分化相关标志物的共表达情况。结果无FCS条件下培养的BTSCs呈悬浮球状生长,高表达CD133和巢蛋白(nestin),不表达胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和β-微管蛋白Ⅲ(β-TubulinⅢ)。G0/G1期细胞占大多数,G2/M期细胞接近0%,DNA都是异倍体,对VPA反应不敏感。含FCS培养的原本悬浮的细胞约4h开始贴壁,均呈圆形。此后逐渐向多形性分化,至7d时分化的细胞部分又返回至圆形,至10 d～21d时,有的还能重新恢复球形,并呈悬浮生长。培养3d、7d、10d和21d时,CD133、nestin阳性细胞数先降后升,GFAP^+和β-TubulinⅢ^-细胞数始终处于较低水平。含FCS培养液中加入VPA,细胞形态上未见上述的回逆现象,CD133和nestin表达的先降后升现象消失,GFAP和β-TubulinⅢ在第7天以后表达明显升高,但极大部分细胞共表达nestin。而神经干细胞(NSCs)在含FCS培养至10 d时,即以GFAP和β-TubulinⅢ表达为主,未见CD133^+细胞。此外,含血清培养时BTSCs仍以异倍体为主,含少量的G2/M期细胞,加VPA诱导后细胞周期和DNA倍体变化不明显。结论BTSCs在含血清条件下培养出现的多向分化表型不稳定,时有去分化所导致的回逆。加入诱导分化剂VPA培养,虽然能阻止回逆现象出现,并有代表星形胶质细胞和神经元标志物表达上升,但因其共表达nestin而仍属于未完全分化细胞,表明BTSCs分化始终处于受抑状态。

诺帝对大鼠C6脑胶质瘤的诱导分化治疗作用及对信号转导分子STAT3和p-STAT3蛋白表达的影响

目的研究诺帝对大鼠C6脑胶质瘤GFAP、Vimentin及信号传导和转录激活因子3(STAT3)和酪氨酸磷酸化STAT3(pSTAT3)表达水平影响,探讨恶性胶质瘤发生机制及诺帝诱导分化作用的分子机制。方法立体定向接种法将C6胶质瘤细胞悬液接种于雄性Wistar大鼠右脑尾状核,采用本室专利方法合成的抗胶质瘤新药诺帝(27和54mg/kg体重腹腔注射)作为治疗方法,观察移植瘤病理组织学和超微结构变化,检测胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和vimentin两种分化标志物的表达,并观测细胞信号转导分子STAT3及其磷酸化状态pSTAT3蛋白表达水平。结果诺帝治疗组的抑瘤率分别为79.83%～97.74%,移植瘤体积明显减小,肿瘤无论在形态上还是免疫表型上均呈现诱导分化现象,GFAP表达增强,而vimentin表达降低,STAT3和pSTAT3平均光密度值也减低。结论诺帝对C6细胞的原位移植瘤具有诱导分化治疗作用,抑制STAT3表达及其酪氨酸磷酸化活性从而上调GFAP表达可能是其诱导分化治疗作用的机制之一。

肺透明细胞间质肿瘤1例

肺透明细胞间质肿瘤是新近认识的一种罕见的惰性间叶性肿瘤,分子遗传学上具有重现性的YAP1::TFE3基因融合。因其组织发生尚不明确,缺乏特异性的分化标志物,鉴别诊断谱系宽泛,容易误诊。本文报道1例原发于肺的透明细胞间质肿瘤,探讨其组织学诊断和鉴别诊断要点。