Notch信号通路抑制剂DAPT改善酒精诱导的斑马鱼神经元分化障碍

目的探讨Notch信号通路在胎儿酒精谱系障碍(FASD)斑马鱼模型的神经元分化及及感觉-运动能力中的作用。方法首先,将斑马鱼胚胎分为二甲基亚砜(DMSO)组和50μmol/L氮-[氮-(3,5-二氟苯乙酰基)-L-丙氨酰]-S-苯基甘氨酸丁酯(DAPT,Notch信号通路抑制剂)处理组,检测比较两组斑马鱼的死亡率、孵化率以及畸形率;比较两组斑马鱼的身体长度;利用原位杂交和qRT-PCR技术检测两组神经干/前体细胞标志物sox2、神经前体细胞分化因子neurogenin1、神经元标志物huc的表达;检测两组在无刺激、强光、震动刺激情况下的行为学表现。其次,将斑马鱼胚胎分为DMSO组、1.5%酒精处理组、DAPT处理组、酒精和DAPT联合处理组,利用原位杂交和qRT-PCR技术检测各组sox2、neurogenin1、huc的表达,检测Notch信号通路相关基因(Notch)信号受体notch1a,促进神经发育的靶基因her8a及Notch胞内活性片段(NICD)的mRNA表达水平;检测各组在无刺激、强光、震动刺激情况下的行为学表现。结果50μmol/L DAPT处理斑马鱼胚胎后,受精后1 d(1 dpf)胚胎死亡率(P<0.01)显著增加,2 dpf孵化率显著降低(P<0.01),3 dpf畸形率(P<0.001)显著增加,15 dpf斑马鱼体长显著缩短(P<0.05);斑马鱼胚胎sox2表达水平显著降低(P<0.01),neurogenin1(P<0.05)和huc mRNA(P<0.01)表达水平显著增加;在无刺激、强光、震动刺激情况下,DAPT处理组的斑马鱼运动距离均显著缩短(P<0.001),运动速度均显著降低(P<0.05)。单独使用1.5%酒精处理斑马鱼胚胎后,notch1a、her8a及NICD的mRNA表达水平显著升高(P<0.05);1.5%酒精联合DAPT处理斑马鱼胚胎后,较酒精单独处理组,neurogenin1和huc mRNA表达水平显著增加,sox2 mRNA表达水平显著降低(P<0.01),在强光刺激下的运动距离显著变长,运动速度显著变快(P<0.05)。结论酒精上调斑马鱼胚胎Notch信号、抑制神经元分化并降低感觉-运动能力,而抑制Notch信号通路可改善斑马鱼胚胎神经元分化及感觉-运动能力。

Ku70作为RNA解旋酶调节miR-124的加工成熟及神经细胞的分化

目的Ku70蛋白主要通过其DNA结合特性参与双链DNA断裂(DSB)的非同源端连接(NHEJ)修复,有报道称其具有RNA结合功能,本文探索Ku70是否具有RNA解旋酶活性并影响miRNA加工成熟。方法利用RNA免疫共沉淀(RIP)测序结合生物信息学分析Ku蛋白结合的RNA;蛋白质印迹法(Western blot,WB)结合定量反转录PCR(qRTPCR)检测Ku蛋白与miRNAs的表达关系;生物膜干涉技术(BLI)实验分析Ku蛋白与RNA的结合能力;电泳迁移率变动分析(EMSA)实验确定Ku70及Ku80的RNA解旋酶活性;形态学检测结合WB分析Ku70调节miR-124引起的神经细胞功能变化;免疫荧光结合形态学分析寨卡病毒(ZIKV)感染后Ku70及miR-124的变化与神经元分化关联。结果研究发现,Ku70蛋白具有RNA解旋酶活性,并通过其RNA解旋酶活性影响miRNA加工成熟。Ku70缺失引起许多miRNAs上调,其中包括神经细胞特异的miR-124。在人神经前体细胞(h NPCs)和人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)中敲低Ku70可促进miR-124的成熟,从而导致上述细胞向神经元分化。本文进一步发现,ZIKV感染影响了Ku70及miR-124的表达,导致细胞形态的分化。结论本研究揭示了Ku70的一种新功能,即Ku70有可能参与miRNA的成熟调控和神经细胞的分化,并且可能是ZIKV病毒致小头症的原因之一。

七氟烷抑制新生小鼠前额叶皮质神经祖细胞向神经元分化发育

目的·基于单细胞转录组测序(single-cell RNA sequencing,scRNA-seq)探究单次和重复七氟烷麻醉对新生小鼠前额叶皮层(prefrontal cortex,PFC)神经元发育的损伤机制。方法·将新生小鼠分为重复麻醉暴露(Sev3)组、单次麻醉暴露(Sev1)组和对照组,每组3只。Sev3组于出生后第6、第7、第8日接受3%七氟烷和60%氧气的麻醉,Sev1组仅在出生后第6日接受麻醉,出生后第9日获取3组小鼠的PFC进行scRNA-seq。通过UMAP(uniform manifold approximation and projection)聚类、RNA速度分析、转录因子分析(SCENIC)获得七氟烷麻醉后新生小鼠PFC细胞图谱和神经元细分亚群图谱,并进行差异表达基因分析;通过基因本体论(Gene Ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)数据库分析研究差异基因富集的生物学过程和通路;利用QuSAGE分析描述细胞周期及Hippo信号通路基因集的激活情况。通过CytoTRACE评分判断七氟烷麻醉后新生小鼠PFC神经元谱系细胞转录本丰富度和干性;利用拟时序分析(pseudo-time analysis)确定神经元分化轨迹,通过分支表达分析模型(BEAM)对发育节点进行解析,以确定决定细胞不同命运的关键基因。结果·3组新生小鼠PFC经scRNA-seq共获得40061个细胞,10种细胞类型。单次七氟烷麻醉后PFC细胞下调的基因富集在细胞分化、前脑神经元分化、去甲肾上腺素能神经元分化和大脑皮层γ-氨基丁酸能中间神经元分化。重复七氟烷麻醉后下调基因富集在细胞分化的正向调节。单次七氟烷麻醉后下调的差异基因富集的KEGG通路有转化生长因子β信号通路。重复七氟烷麻醉后下调的差异基因富集的KEGG通路有Notch信号通路。SCENIC显示,早期生长反应因子1(early growth response 1,Egr1)、SRY-box转录因子7(SRY-box transcription factor 7,Sox7)在单次和重复七氟烷麻醉后均上调(均P<0.01),HES家族bHLH转录因子6(HES family bHLH transcription factor 6,Hes6)、NKX同源框-1基因(NK2 homeobox 1,Nkx2-1)仅在单次七氟烷麻醉后下调(均P<0.01)。七氟烷麻醉后放射状胶质细胞和神经元与细胞周期相关的基因集激活度增加,并且重复麻醉暴露后激活度增加更明显。重复七氟烷麻醉后神经元与Hippo信号通路相关的基因集由抑制变为激活。将8224个神经元单独进行亚群分析获得8种神经元谱系细胞,CytoTRACE评分表明七氟烷麻醉后神经元干性增加,神经元发育迟滞。PFC神经元经拟时序分析区分为3个发育阶段,重复七氟烷麻醉使PFC神经元分化拟时间后退(P=0.000)。单次七氟烷麻醉暴露后新生小鼠PFC神经元下调的基因富集在细胞周期蛋白依赖性蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶活性的调节、有丝分裂细胞周期相变、细胞分化、长期记忆、有丝分裂细胞周期G1/S转换。重复七氟烷麻醉暴露后PFC神经元下调基因富集在细胞群增殖的负向调控、细胞分化的正向调节、前脑神经元的分化、典型Wnt信号通路的正向调控和细胞分化。结论·单次和重复七氟烷麻醉均促进新生小鼠PFC神经祖细胞增殖和神经元迁移,重复七氟烷麻醉抑制PFC的神经祖细胞向神经元分化,其潜在机制可能与细胞周期转换有关。

Ghrelin通过调节MAPK/ERK通路对脂肪间充质干细胞神经元分化的影响

目的:探讨Ghrelin对脂肪间充质干细胞(ADSCs)向神经元分化的影响,并阐明可能的机制。方法:ADSCs随机分为空白组、神经分化诱导剂组、Ghrelin组(给予600μg·L^(-1)Ghrelin)、U0126组(给予40 ng·L^(-1)U0126)、Ghrelin+U0126组(给予600μg·L^(-1)Ghrelin+40 ng·L^(-1)U0126)和Ghrelin受体阻断剂D-赖氨酰3生长激素释放肽6(D-Lys3-GHRP-6)组(给予10-10g·L^(-1)D-Lys3-GHRP-6)。倒置显微镜观察各组细胞病理形态表现,免疫荧光法检测各组细胞中神经丝蛋白(NF)-200和微管蛋白(Tuj-1)阳性表达率,Western blotting法检测各组细胞中丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)/细胞外信号调节激酶(ERK)通路蛋白、神经元特异性核蛋白(NeuN)及Tuj-1、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、NF、生长激素促分泌受体(GHSR)、胎肝激酶1(Flk1)和CD29蛋白表达水平。结果:细胞培养第10天,空白组ASCs呈长梭形和螺旋状融合;神经分化诱导剂组细胞胞体收缩,长梭形胞体向类圆形转变、突起长度延长及类似神经元样细胞数增多;Ghrelin组细胞胞体突起进一步增多,类圆形细胞数进一步增多;U0126组和D-Lys3-GHRP-6组仅有少量细胞胞体收缩及类圆形转变。免疫荧光法检测,与空白组比较,神经分化诱导剂组细胞中NF-200和Tuj-1阳性表达率升高(P<0.05);与神经分化诱导剂组比较,Ghrelin组细胞中NF-200和Tuj-1阳性表达率升高(P<0.05),U0126组和D-Lys3-GHRP-6组细胞中NF-200及Tuj-1阳性表达率降低(P<0.05);与Ghrelin组比较,U0126组、D-Lys3-GHRP-6组和Ghrelin+U0126组细胞中NF-200和Tuj-1阳性表达率降低(P<0.05)。Western blotting法检测,与空白组比较,神经分化诱导剂组细胞中NSE、NeuN、Tuj-1、NF、GHSR蛋白表达水平和磷酸化MAPK(p-MAPK)/MAPK及磷酸化ERK(p-ERK)/ERK比值升高(P<0.05),Flk1和CD29蛋白表达水平降低(P<0.05);与神经分化诱导剂组比较,Ghrelin组细胞中NSE、NeuN、Tuj-1、NF、GHSR蛋白表达水平和p-MAPK/MAPK及p-ERK/ERK比值升高(P<0.05),Flk1和CD29蛋白表达水平降低(P<0.05),U0126组和D-Lys3-GHRP-6组细胞中NSE、NeuN、Tuj-1、NF、GHSR蛋白表达水平及p-MAPK/MAPK和p-ERK/ERK比值降低(P<0.05),Flk1和CD29蛋白表达水平升高(P<0.05);与Ghrelin组比较,U0126组、D-Lys3-GHRP-6组和Ghrelin+U0126组细胞中NSE、NeuN、Tuj-1、NF和GHSR蛋白表达水平及p-MAPK/MAPK和p-ERK/ERK比值降低(P<0.05),Flk1和CD29蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论:Ghrelin可诱导ASCs向神经元分化,其作用机制与激活MAPK/ERK通路有关。

甘草苷抑制吗啡引起的神经损伤作用及机制

目的:探讨甘草苷对吗啡引起神经损伤的调节作用及机制。方法:采用侧脑室注射吗啡建立神经损伤模型;腹腔注射甘草苷5 d和10 d,采用病理学观察、蛋白免疫印迹、细胞活力、凋亡及原代神经元分化检测。结果:吗啡处理之后,皮层组织中神经元减少,原代神经元细胞相对活力下降,凋亡数目增加,轴突断裂和胞体缩小;甘草苷给药后,细胞活力显著改善;轴突、树突及胞体结构逐渐完整,细胞凋亡情况减轻;蛋白Akt在473位点和PKA在197位点的磷酸化水平下降,自噬相关蛋白Becline和LC3B1/2不变。结论:甘草苷显著抑制吗啡引起的神经元分化抑制和神经元凋亡,这些作用可能是通过甘草苷协同吗啡对Akt通路。

脂肪组织来源的基质细胞向神经元样细胞分化

目的 研究脂肪来源的基质细胞向神经元样细胞分化的可能性 ,为神经移植探索新的细胞来源。方法 采用β-巯基乙醇诱导脂肪来源的基质细胞向神经元样细胞分化 ,以免疫细胞化学方法对分化的和未分化的细胞进行鉴定。结果 从成年大鼠的脂肪组织中分离出基质细胞 ,在体外生长形态类似成纤维细胞 ,可以维持在未分化状态稳定增殖 ,体外扩增可超过 10多代。β-巯基乙醇可诱导这种细胞向神经元样细胞分化 ,分化的细胞早期表达巢蛋白 ,后期则表达神经元的标志物——神经元特异性烯醇化酶和神经微丝 ,在最适合的诱导条件下约 60 %～85 %的细胞表达这两种神经元的标志物。

羊水干细胞定向及稳定分化为神经元样细胞体系的建立

背景:利用干细胞分化代替受损神经元的设想,已经逐渐受到科研工作者的关注。胚胎干细胞和诱导性多能干细胞虽然具有良好的神经元分化潜能,但由于接种活体动物具有致瘤性,限制了其进一步的深入研究。目的:建立稳定的羊水干细胞分选、培养、成神经诱导分化体系,探讨其作为神经元再生种子细胞的可行性。方法:经B超引导下,穿刺获取孕19-22周期间的羊水样本10 mL,磁珠分选其中c-Kit阳性的羊水干细胞。免疫荧光染色鉴定羊水干细胞标记物Oct-4、Sox2;RT-PCR检测羊水干细胞多次传代后干性标记物c-Kit、Oct-4、Sox2、Nestin的表达;羊水干细胞悬滴培养4 d观察拟胚体的形成情况;采用"两阶段"分步诱导羊水干细胞向神经元方向分化,免疫荧光染色观察Neuro D、Tuj1的表达。结果与结论:①羊水中可分选出大约1%的c-Kit阳性羊水干细胞;②(75.0±4.6)%的羊水干细胞表达Oct-4,(86.0±2.8)%的羊水干细胞表达Sox2;③RT-PCR方法检测干性标记物c-Kit、Oct-4、Sox2、Nestin的表达量并不随细胞传代数的增加而改变;④经悬滴培养可形成拟胚体并表达Oct-4;⑤免疫荧光证实未经诱导的羊水干细胞表达神经元标记物Tuj1,但缺乏典型的神经元形态特征;RT-PCR证实不同羊水干细胞标本都能检测到Tuj1的表达,同一样本多次传代也能稳定检测到Tuj1的表达;⑥羊水干细胞经碱性成纤维细胞生长因子、脑源性神经营养因子、神经营养因子3的两阶段分步诱导后表达神经干细胞标记物Neuro D和神经元标记物Tuj1,具有神经元样细胞的形态特征。

羊水干细胞拟胚体与耳蜗基底膜共培养向神经元分化的可行性

目的探讨人来源的羊水干细胞以拟胚体样结构与小鼠耳蜗基底膜组织共培养,分化为神经元的可行性。方法分离培养人来源的羊水干细胞,悬滴法培养,观察羊水干细胞拟胚体形成情况;免疫荧光检测拟胚体细胞干性标记物的表达;将拟胚体与小鼠基底膜组织共培养,不添加神经生长因子及神经元信号诱导因子,观察拟胚体向神经元分化情况。结果羊水干细胞经悬滴培养可形成拟胚体样结构,表达神经干细胞标记物Sox2、Nestin;与小鼠耳蜗基底膜组织共培养,拟胚体细胞有神经元标记物Tuj1表达,但无神经元形态特征。结论羊水干细胞体外悬滴后可形成形态均一且具有神经干性的拟胚体,与耳蜗基底膜组织共培养,不能诱导拟胚体细胞向形态典型的神经元分化。

慢病毒介导神经生长因子过表达诱导脐带间充质干细胞向神经元样分化

目的探讨神经生长因子(NGF)过表达慢病毒转染脐带间充质干细胞(UMSCs)对细胞分化的影响。方法分离培养UMSCs,流式细胞术鉴定后利用慢病毒载体感染细胞,使其过表达NGF,72h后,通过免疫荧光检测NGF和GFP的表达,Western blot检测NGF蛋白表达水平,ELISA法检测细胞上清液NGF的含量,qRT-PCR检测相关神经因子基因的表达。结果流式细胞术显示细胞表面CD105、CD90、CD73阳性而CD34、CD45、CD19和CD14阴性,鉴定为脐带间充质干细胞。慢病毒转染后细胞NGF和GFP阳性,细胞内NGF和培养液中b-NGF含量都显著性增加,NGF、nestin、GFAP、MAP2及tubulin等mRNA的表达显著性增加。结论神经生长因子过表达慢病毒转染脐带间充质干细胞会促使细胞向神经元样细胞分化,可应用于后续研究。

热处理延缓维甲酸诱导P19细胞的生长及向神经元分化

研究热环境对P19细胞生长和RA诱导的向神经元分化的影响 ,为探讨热环境刺激对神经系统发育的影响提供参考。成熟的P19细胞在热环境的条件下培养 1h后 ,消化接种至培养皿中正常培养 ,于不同时间点取样分析细胞数目。热环境处理P19细胞后用维甲酸诱导分化 4d ,随后接种至培养皿中 ,参照神经元的原代培养方法培养12d ,用神经元抗体免疫鉴定 ,计数不同培养时间NSE、NF阳性神经元在总体细胞中的比例。结果发现接受热处理的P19细胞贴壁不良 ,生长始终缓慢 ,说明热环境刺激阻止细胞生长分裂。P19细胞经RA诱导分化后出现类似神经细胞的突起和纤维网络 ,而热环境导致P19细胞向神经元分化明显迟缓 。

再程序化星形胶质细胞的制备及体外定向分化为神经元的研究

目的探讨再程序化星形胶质细胞制备并在体外诱导其分化为神经元。方法在体外培养大鼠脑皮质来源星形胶质细胞(astrocyte),随后将提纯、鉴定过的第三代星形胶质细胞接种于12孔培养皿中,并分为A、B、C 3组。其中A组为带有绿色荧光蛋白(GFP)的慢病毒载体介导neurogenin2(Ngn2)基因转染的星形胶质细胞,制备再程序化星形胶质细胞;B组为带有GFP基因的空载体病毒转染的星形胶质细胞;C组为未进行慢病毒介导基因转染的星形胶质细胞;转基因1周后加入含细胞生长因子诱导培养基诱导分化15 d,光镜下观察各组细胞形态变化以及定向神经元分化的差异。结果 A组星形胶质细胞转基因后再诱导15 d,很大部分细胞形态呈神经元样改变,胞体呈梭形或椭圆形,有多个突起伸出且突起较长,表达神经元核蛋白(Neu N)、神经丝蛋白(NF)及神经元特异性烯醇化酶(NSE)的比例大大提高,相比B组及C组,差异有统计学意义(均P<0.05);而B组与C组神经元分化比例的差异无统计学意义(P>0.05)。结论慢病毒介导Ngn2基因体外转染星形胶质细胞可制备出再程序化星形胶质细胞,诱导后具有更强的向神经元定向分化能力。

再程序化脂肪源性干细胞的制备及体外定向分化为神经元的实验研究

目的制备再程序化脂肪源性干细胞以及探索诱导其定向分化为神经元的方法。方法体外培养脂肪来源干细胞(ADSCs),取纯化、鉴定过的第3代ADSCs接种于24孔板中并分A,B,C三组:A组为带有绿色荧光基因(GFP)的慢病毒载体介导Neurogenin2(Ngn2)基因转染的ADSCs,制备再程序化脂肪干细胞;B组为带有GFP的空载体病毒转染的ADSCs;C组为未进行慢病毒介导基因转染的ADSCs;转基因7d后加入含细胞生长因子诱导培养基诱导分化15d。光镜下观察各组细胞形态变化以及免疫荧光研究各组ADSCs诱导后定向分化为神经元的差异。结果与B组和C组相比,A组ADSCs转基因后再经诱导分化15d后绝大部分细胞类似神经元,胞体呈梭形或椭圆形,有两个或三个突起伸出,细胞表达神经丝蛋白NF、神经元特异性蛋白NeuN及神经元特异性烯醇化酯酶NSE比例大大提高。B组与C组的神经元分化效率,无显著差异,P>0.05。结论慢病毒介导Neurogenin2基因体外转染ADSCs可以制备出再程序化脂肪源性干细胞,诱导后具有更强的定向分化为神经元的能力。

牛膝多肽可能通过ERK1/2途径诱导PC12细胞向神经元分化

目的:研究牛膝多肽(ABPP)诱导PC12细胞向神经元分化的作用,初步探讨ABPP作用于PC12细胞的信号转导途径。方法:以体外培养的PC12细胞为研究模型,观察在低血清的情况下不同浓度ABPP(0.25、0.50、1.00μg/ml)诱导PC12细胞发生的形态学改变。采用免疫荧光细胞化学法,观察神经丝蛋白(NF-H)在ABPP诱导分化的PC12细胞中的表达;采用Western blot法观察ABPP(1.0μg/ml)加药后不同时间段(0、6、12h和1、2、3、7d)和不同浓度ABPP(0.25、0.50、1.00μg/ml)加药2 d后对PC12细胞ERK1/2活性的影响,同时应用ERK1/2特异性拮抗剂PD98059与ABPP共培养PC12细胞,分析ABPP对PC12细胞的作用与ERK1/2通路的关系。结果:ABPP处理3 d后,部分PC12细胞开始出现神经元样的形态。随着加药时间延长具有神经元样的细胞逐渐增多,到7 d时,可以见到神经生长因子(NGF)和ABPP处理组PC12细胞的突起都显著增多,能形成网络;14 d时,这种现象愈发显著。加药后7 d和14 d,ABPP各浓度组的细胞分化率以及细胞突起长度均明显提高,且存在明显的剂量反应关系。加药第7天和第14天,ABPP高剂量组与NGF组的PC12细胞均出现NF-H标记阳性的分化细胞。ABPP对ERK1/2的激活作用存在明显的量效关系,以1.0μg/ml作用2 d为最大。当用PD98059抑制ERK1/2的活化时,ABPP对ERK1/2的激活作用被部分阻断。结论:ABPP具有诱导PC12细胞神经元性分化的作用,此作用可能是通过ERK1/2信号转导途径实现的。

NGF诱导PC12细胞神经元样细胞分化

目的:建立PC12细胞的神经元样细胞分化模型,并探讨ERK蛋白在PC12细胞神经元样细胞分化中的可能机制.方法:以10、20、50 g/L的NGF(NGF溶于PBS,培养基中PBS的终浓度不超过2%)培养PC12细胞,应用倒置相差显微镜、显微镜测微尺及流式细胞仪鉴定PC12细胞的分化,以确定NGF使用剂量.运用免疫印迹检测不同浓度、不同作用时间时ERK蛋白在PC12细胞中的表达,并进行统计学分析.结果:随NGF剂量的升高,PC12细胞的体积、最长突起长度和突起数目均会增大或增多。统计学分析证明50 g/L的NFG作用48 h足以诱导PC12细胞的交感神经样改变。尽管ERK总蛋白水平在NFG作用前后无明显改变,但在NFG作用5 min后磷酸化的ERK蛋白水平即显著升高,达到峰值,并持续约1 h.50 g/L的NFG作用于PC12细胞48 h可使细胞发生明显的G1期阻滞.结论:PC12细胞可在NGF作用下出现交感神经样改变,并且细胞的分化程度依赖于NGF的使用剂量和作用时间.在NGF诱导的PC12细胞神经元样分化中ERK蛋白的磷酸化对NGF呈现剂量和时间依赖性,提示ERK蛋白在分化的早期发挥重要作用.

神经干细胞向运动神经元分化及移植的研究进展

神经干细胞是神经科学领域研究的热点之一。在体外适当的条件下神经干细胞可诱导分化成运动神经元,如添加生长因子、相关信号分子、或添加从脊髓源性神经胶质细胞提取的特殊培养液和骨骼肌培养液等,定向诱导分化的神经元移植于脑或脊髓的病变部位将成为运动神经元退行性病变的潜在治疗方法。

骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化及其在神经修复中的应用

近几年来．干细胞已成为生物学和医学领域的研究热点。间充质干细胞来源于中胚层，具有很强的自我更新、增殖能力以及多向分化的潜能。而骨髓间充质干细胞 （bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）因具有易于分离、培养、扩增、长期培养的过程中始终保持多向分化的潜能、免疫原性低、遗传背景稳定等特性，使之成为干细胞研究领域的焦点。最近的研究表明BMSCs在体外能被诱导成神经元样细胞，且植人体内能改善神经损伤症状。因此．本文结合最新研究进展就体外诱导BMSCs向神经元样细胞的分化及其在神经修复中的应用作一综述。

Necdin蛋白与神经元的生长分化

在神经系统 ,Necdin只在成熟神经元的细胞核中表达 ,可能与成熟神经元分裂静止状态的保持有关。近年的研究表明 ,Necdin是一种生长抑制蛋白 ,能与多种因子如SV4 0大T抗原 ,腺病毒E1A ,转录因子E2F1以及肿瘤抑制蛋白p5 3等结合 ,在功能上类似于成视网膜瘤蛋白Rb。necdin基因缺陷时 ,会引起脑内 ,特别是下丘脑神经元分化障碍。人类necdin基因位于PWS综合征的基因缺失区 ,可能与PWS的一些症状有关。本文从Necdin蛋白的基本概况 。

脂肪间充质干细胞成神经元诱导分化研究进展

增加具有完整功能的种子细胞数目及提高其定向分化能力一直是组织工程研究的重要课题。脂肪间充质干细胞(ADSC)诸多优点在成体干细胞研究中备受青睐,有望成为组织工程种子细胞的新成员。该文就神经组织工程中ADSC生物学特性、获取与培养、成神经元分化能力及其与生物支架的相容性等方面的研究进展,作一综述。

人神经干细胞在宿主鼠脑内分化成神经元呈脑位点特征

目的研究人胎脑神经干细胞植入年幼大鼠脑后的成神经元分化作用,探讨神经干细胞替代治疗小儿脑病的可行性。方法自孕16周的胎脑组织分离培养出神经干细胞球,在小儿脑脊液中培养诱导分化以证明其分化潜能。将培养14 d的神经干细胞球移植10 d龄鼠的侧脑室内,于移植后第4、7、14天杀鼠取脑,切片,行人神经丝特异性标志的免疫荧光分析,显示神经元的分布和细胞形态。结果培养获得典型神经干细胞球,呈漂浮生长,在小儿脑脊液中能分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。用抗人神经丝混合单抗检测移植物的成神经元分化,移植后的第4天,观察到阳性反应细胞在颗粒层表现为颗粒性细胞,锥体细胞层则出现长突起的锥体细胞,还有连接神经元样中间神经元,小脑内有单层排列的浦肯野细胞。对比各时间点的观察结果,阳性细胞分布位置未变。随着移植后天数的后延,阳性细胞数量呈减少趋势,但锥体细胞的突起明显加长。结论体外培养获得的人神经干细胞脑室途径移植年幼大鼠,在脑内发生迁移,并分化成形态上与其临近宿主细胞一致的神经元。提示宿主脑组织局部微环境在引导移植物分化成神经元中发挥了重要作用。

人胎脑神经干细胞在年幼大鼠脑内的成神经元分化

目的:脑组织中不同部位的的神经元因功能不同具有特定的细胞形态,移植的神经干细胞能不能在相应部位分化成其相应的神经元还不明确。实验拟观察人胎脑神经干细胞植入年幼大鼠脑后的成神经元分化的作用,探讨神经干细胞替代治疗小儿脑病的可行性。方法:实验于2007-04/07在海军总医院细胞实验室内完成。①实验材料:16周孕龄的人胎脑组织由海军医院妇产科提供,实验经孕妇及家属知情同意,并经医院伦理委员会批准。14只出生后10d的同窝年幼SD大鼠,雌雄不分,由北京大学医学部实验动物中心提供,为二级清洁动物,实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。②实验方法:自孕16周的人胎脑组织分离培养神经干细胞球,在脑脊液中培养诱导分化实验以证明其分化潜能。将培养14d的神经干细胞球移植于10d龄大鼠侧脑室内,于移植后第4,7,14天行人神经丝特异性标志的免疫荧光分析,显示神经元的分布和细胞形态。结果:①培养获得典型神经干细胞球,呈漂浮生长,在小儿脑脊液中能分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。②采用抗人神经丝混合单抗检测移植物的成神经元分化,移植后第4天,观察到阳性反应细胞在颗粒层表现为颗粒性细胞,锥体细胞层则出现长突起的锥体细胞,还有连接神经元样中间神经元,小脑内有单层排列的浦肯野细胞。对比各时间点的观察结果,阳性细胞分布位置未变,随着移植后天数的后延,阳性细胞数量呈减少趋势,但锥体细胞的突起明显加长。结论:体外培养获得的人神经干细胞经脑室途径移植于年幼大鼠,在脑内发生迁移,并分化成形态上与其所在位置的宿主细胞一致的神经元。提示宿主脑组织微环境在引导移植物分化成神经元中发挥了重要作用,该结果对细胞替代治疗小儿脑病有重要启示意义。