葫芦巴碱调节CD47/SIRPα信号通路对胃癌细胞增殖、凋亡和免疫逃逸的影响

目的:研究葫芦巴碱调节分化簇47(CD47)/信号调节蛋白α(SIRPα)信号通路对胃癌MGC803细胞增殖、凋亡和免疫逃逸的影响。方法:以四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测0、20、40、80、160、320μmol/L的葫芦巴碱处理后的人胃癌细胞株MGC803存活率,筛选其最佳作用浓度。将体外培养的MGC803细胞随机分为对照组、葫芦巴碱组(160μmol/L的葫芦巴碱处理)、CD47敲低组[转染CD47小干扰RNA(siRNA)质粒]、空载组(转染CD47空载质粒)、葫芦巴碱+CD47过表达组(160μmol/L的葫芦巴碱干预处理+转染CD47过表达质粒),培养24 h后。采用实时荧光定量PCR和免疫印迹检测各组细胞CD47/SIRPα通路表达;EdU染色和MTT法检测各组细胞增殖;流式细胞术检测各组细胞凋亡;免疫荧光染色检测各组细胞凋亡[B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)]相关蛋白表达;以不同细胞比例共培养人外周血单个核细胞与各组MGC803细胞后以MTT法检测人外周血单个核细胞对各组MGC803细胞的杀伤率;裸鼠体内移植瘤实验验证葫芦巴碱对CD47/SIRPα通路的调控作用。结果:20、40、80、160、320μmol/L的葫芦巴碱均可降低MGC803细胞存活率(P<0.05),且其降低作用随着葫芦巴碱浓度升高而增强,选择接近半抑制浓度值(168.94μmol/L)的160μmol/L葫芦巴碱进行后续实验。与对照组比较,葫芦巴碱组、CD47敲低组细胞和移植瘤组织CD47、SIRPα mRNA及蛋白表达、EdU阳性率、存活率、Bcl-2相对荧光强度、移植瘤重量、移植瘤体积降低,凋亡率、Bax相对荧光强度、人外周血单个核细胞对MGC803细胞杀伤率升高(P<0.05)。与葫芦巴碱组比较,葫芦巴碱+CD47过表达组细胞和移植瘤组织CD47、SIRPα mRNA及蛋白表达、EdU阳性率、存活率、Bcl-2相对荧光强度、移植瘤重量、移植瘤体积升高,凋亡率、Bax相对荧光强度、人外周血单个核细胞对MGC803细胞杀伤率降低(P<0.05)。结论:葫芦巴碱可通过抑制CD47/SIRPα通路表达来抑制胃癌细胞增殖并诱导其凋亡,还可减轻其免疫逃逸。

靶向CD47抗体药物的研究进展

随着靶向细胞程序性死亡受体1(PD-1)/细胞程序性死亡配体1(PD-L1)、细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA-4)等免疫检查点类药物的开发及临床应用,免疫治疗逐渐成为强有效的临床治疗手段之一。分化簇47(CD47)作为天然免疫检查点分子,几乎在所有人类恶性肿瘤(实体瘤和血液系统肿瘤)中高表达,影响肿瘤进展和转移,并参与细胞凋亡、增殖、黏附和迁移等过程,因此,CD47成为研究人类肿瘤的重要靶标。目前,多个国家正在积极开展靶向CD47抗体及Fc融合蛋白药物的多项临床前研究和临床试验,本综述对CD47分子结构、功能和相关疾病进行简单介绍,重点总结CD47治疗性抗体类药物的开发及临床应用策略。

CD47基因对食道癌细胞增殖的影响

本研究将CD47-si RNA转染至食道癌细胞,采用蛋白免疫印迹检测食道癌细胞中CD47蛋白的表达,MTT法检测CD47-siRNA转染组和空质粒转染组(对照组)食道癌细胞增殖状态,蛋白免疫印迹检测CD47-siRNA转染组和空质粒转染组(对照组)食道癌细胞中PCNA蛋白表达,DCFDA染色流式细胞仪检测食道癌细胞CD47-siRNA转染组和空质粒转染组(对照组)中ROS水平,以探究CD47基因对食道癌发生发展的影响。研究结果表明,CD47-si RNA转染组食道癌细胞中CD47蛋白明显低于对照组;CD47-siRNA转染组食道癌细胞增殖率显著低于对照组(p<0.05);CD47-siRNA转染组细胞增殖相关蛋白PCNA低于对照组(p<0.01);CD47-siRNA转染组食道癌细胞中ROS水平明显高于对照组(p<0.05)。本研究初步认为:CD47-siRNA可降低食道癌细胞中CD47蛋白表达,抑制食道癌细胞的增殖并增加食道癌细胞中ROS水平。

CD47-siRNA通过调控ROS诱导食管癌细胞SEG-1凋亡

目的:探讨CD47-siRNA对食管癌细胞SEG-1凋亡的影响及其机制研究。方法:Western blot法检测食管癌细胞SEG-1中CD47蛋白、促凋亡蛋白Bax和抗凋亡蛋白Bcl-2的表达;CCK-8法检测食管癌细胞SEG-1细胞活力;DCFDA细胞ROS检测试剂盒检测食管癌细胞SEG-1中ROS水平。结果:CD47-siRNA转染组食管癌细胞SEG-1中CD47蛋白明显低于空载对照组(P<0.05);CD47-siRNA转染组食管癌细胞SEG-1细胞活力显著低于空载对照组(P<0.05);CD47-siRNA转染组食管癌细胞SEG-1中促凋亡蛋白Bax表达显著高于空载对照组(P<0.05),抗凋亡蛋白Bcl-2表达低于空载对照组(P<0.05);CD47-siRNA转染食管癌细胞SEG-1组ROS水平明显高于空载对照组(P<0.05);与CD47-siRNA转染组比较,CAT (ROS抑制剂,5 m M/L, 6 h)预处理增加了细胞活力;与CD47-siRNA转染组比较,CAT (ROS抑制剂,5 m M/L, 6 h)预处理显著降低食管癌细胞SEG-1中Bax蛋白表达以及增加抗凋亡蛋白Bcl-2表达。结论:CD47-siRNA转染通过上调食管癌细胞SEG-1内ROS水平促进食管癌细胞SEG-1凋亡。

三叶青多糖增强Lewis肺癌小鼠抗肿瘤免疫反应

背景与目的肺癌具有高致病率和高致死率,但肺癌治疗仍缺乏低毒高效的抗肿瘤药物。三叶青多糖在抗肿瘤治疗方面具有开发价值。本文旨在观察三叶青多糖对Lewis肺癌小鼠免疫反应的影响,并探讨其分子机制。方法建立Lewis肺癌小鼠模型并采用随机数字表法进行分组。脾多肽组灌胃50 mg/kg脾多肽,三叶青多糖低、中、高剂量组分别灌胃62.5、125、250 mg/kg三叶青多糖,模型组和对照组灌胃等容积生理盐水。比较肿瘤形成、转移情况;苏木素-伊红(haematoxylin-eosin,HE)染色观察肿瘤细胞病理学变化;流式细胞术检测巨噬细胞吞噬能力、凋亡水平、M1/M2型极化水平及外周血T细胞亚群和细胞因子水平;噻唑蓝溴化四唑(methyl thiazolyldiphenyl tetrazolium,MTT)法检测巨噬细胞增殖活性;β-D-吡喃半乳糖苷氯酚红(chlorophenol red-β-D-galactopyranoside,CPRG)法检测树突状细胞(dendritic cell,DC)抗原提呈功能;实时荧光定量聚合酶链反应(real time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)和蛋白质免疫印迹法(Western blot,WB)检测肿瘤组织分化抗原簇47(cluster of differentiation 47,CD47)信使核糖核酸(messenger ribonucleic acid,mRNA)和蛋白表达及巨噬细胞中信号调节蛋白α(signal regulatory proteinα,SIRPα)表达。结果三叶青多糖3个剂量组和脾多肽组抑瘤率和抗转移率高于模型组,肿瘤组织病理损伤严重,巨噬细胞吞噬墨汁阳性率和吞噬肿瘤细胞效率升高,巨噬细胞凋亡率下降,巨噬细胞增殖活性、巨噬细胞向M1型极化比例、DC抗原提呈能力、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)升高,血清肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)、白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤组织CD47、巨噬细胞蛋白酪氨酸磷酸酶1(SH2-containing protein tyrosine phosphatase 1,SHP-1)、蛋白酪氨酸磷酸酶2(SH2-containing protein tyrosine phosphatase 2,SHP-2)及磷酸化信号调节蛋白α(phosphorylation signal regulatory proteinα,p-SIRPα)表达下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。上述指标三叶青多糖低剂量组与脾多肽组的差异均无统计学意义(P>0.05),且三叶青多糖的作用均呈剂量依赖性。结论三叶青多糖有抗Lewis肺癌小鼠肿瘤生长和转移及免疫反应的作用,其机制可能与抑制SIRP/CD47信号通路有关。