分化转录因子与脂肪细胞分化调控

脂肪细胞的分化受到多种因素的调控 ,包括饮食、遗传和转录等。而CAAT增强子结合蛋白家族 (C/EBPs)和过氧化物酶体增殖物激活受体家族 (PPARs)则是转录调控中的两类主要的分化转录因子在转录调控中起主要作用 ,并且在这两个家族中的众多成员中 ,C/EBPα和PPARγ是最重要的两个分化转录因子。

T-bet:一种新的T细胞分化转录因子

T-bet是一种新发现的属于T-box家族的转录因子,在CD4^+ Th1型细胞的分化中起重要作用。除了CD4^+ Th1细胞,T-bet还可以在NK细胞、B细胞、单核细胞、巨噬细胞和树突状细胞中表达。IFNγ是T-bet表达的最有效的诱导物,T-bet能够反式激活IFNγ基因,抑制Th2细胞因子的合成,因此在细胞免疫介导的疾病中有重要的作用。

Th细胞分化特异性转录因子在低体质量先天性心脏病患儿肺血流异常发病机制中的作用

目的观察Th细胞分化特异性转录因子在低体质量先天性心脏病(CHD)患儿肺血流异常发病机制中的作用。方法回顾分析2016年4月—2018年10月河北省儿童医院心脏外科收治的低体质量先天性心脏病患儿100例的临床资料,根据患儿肺充血情况,分为肺充血组(n=62)和肺缺血组(n=38),另取同期在医院治疗的其他疾病低体质量患儿50例作为对照组。比较各组患儿外周血淋巴细胞转录因子T-bet和GATA-3 mRNA表达,血浆IL-4和IFN-γ水平及外周血淋巴细胞亚群Th1/Th2细胞百分率的变化,通过Pearson法分析T-bet、GATA-3 mRNA表达量与Th1/Th2、血浆IL-4、IFN-γ水平的相关性。结果与对照组比较,肺充血组和肺缺血组患儿T-bet、GATA-3 mRNA表达,血浆IFN-γ、Th1细胞百分率、Th1/Th2水平均明显降低,血浆IL-4、Th2细胞百分率水平明显升高,且肺充血组患儿上述指标变化较肺缺血组更为显著(F/P=6.547/<0.001,9.254/<0.001,2.196/<0.001,65.254/<0.001,39.875/<0.001,3.026/<0.001,26.598/<0.001)。CHD患儿T-bet mRNA表达与血浆IFN-γ水平、Th1百分率呈正相关,与血浆IL-4水平、Th2百分率呈负相关(r/P=0.513/0.005,0.685/0.027,-0.764/0.000,-0.985/0.002),GATA-3 mRNA表达与血浆IL-4水平、Th2百分率呈正相关,与血浆IFN-γ水平、Th1百分率呈负相关(r/P=0.784/0.015,0.793/0.011,-0.525/0.032,-0.652/0.025)。结论 GATA-3和T-bet表达的平衡失调对Th1/Th2细胞的平衡偏移具有重要的调控作用,从而影响血浆IFN-γ、IL-4水平,在CHD的发病机制中起着重要作用。

未分化胚胎细胞转录因子1与恶性肿瘤关系的研究现状

未分化胚胎细胞转录因子1(UTF1)是干细胞相关基因之一,是参与胚胎干细胞分化的重要转录因子,能促进干细胞的自我更新及分化,调控胚胎细胞和生殖细胞的增殖分化。目前,对UTF1的研究大多在干细胞和生殖细胞中,而关于UTF1与肿瘤关系的研究成果较少。越来越多的证据显示,干细胞相关基因的异常表达与肿瘤发生、转移、复发及耐药性等密切相关。其转录和表观遗传胚胎程序可以在癌细胞中重新激活,使癌细胞具有干细胞表型,并参与肿瘤的发生、发展。为获得更好的疗效,部分学者长期致力于寻找各种有效的肿瘤标志物,其中UTF1在恶性肿瘤的诊断、治疗及预后方面具有重要的潜在应用价值。

白细胞介素18经toll样受体4/髓样细胞分化因子88/核转录因子-κB通路促进支气管平滑肌细胞增殖与迁移

目的 探讨白细胞介素18 (IL-18)经toll样受体4 (TLR4)/髓样细胞分化因子88 (MyD88)/核转录因子-κB(NF-κB)通路促进支气管平滑肌细胞(BSMC)增殖与迁移。方法 采用不同浓度IL-18、不同时间处理BSMC,确定实验条件。细胞计数试剂盒(CCK-8)测定细胞活性,Transwell小室检测细胞迁移,Western blot法检测相关蛋白的表达。抑制剂Eritoran特异性阻断TLR4/MyD88/NF-κB通路,检测TLR4/MyD88/NF-κB通路阻断后对细胞周期、细胞增殖、细胞迁移及TLR4/MyD88/NF-κB通路相关蛋白的表达的影响。结果 IL-18可促进支气管平滑肌细胞细胞增殖,提高细胞迁移能力,上调TLR4、MyD88和NF-κB p65蛋白水平(P<0.05)。Eritoran可抑制IL-18引起的BSMC细胞增殖,上调G1期细胞百分比,下调S期、G2期细胞百分比,抑制细胞迁移,降低TLR4、MyD88和NF-κB p65蛋白水平(P<0.05)。结论 IL-18可能通过上调TLR4/MyD88/NF-κB通路中信号分子的表达,促进了平滑肌细胞增殖和迁移。

脂肪细胞分化与甲状腺相关眼病

脂肪细胞分化是一个复杂的过程,受PPARγ及C/EBP等多种分化转录因子的调控,其分化异常与甲状腺相关眼病的发生、发展有密切关系。深入研究眶脂肪细胞分化的分子机制将有助于进一步了解甲状腺相关眼病的发病机制,为寻求合理的治疗方案提供理论依据。

MAPK通过调控TLR4/Myd88/NF-κB通路对妊娠期肠梗阻胃肠功能的影响

目的 分析MAPK通过调控TLR4/MyD88/NF-κB通路对妊娠期肠梗阻胃肠功能的影响。方法 选取105只SPF级Wistar大鼠,雌性、雄性分别为70、35只,将所有大鼠同笼放置后,共有33只雌性大鼠妊娠成功,将妊娠成功的8只作为空白组,剩余25只雌性大鼠建立肠梗阻模型,最终建模成功24只,将其分为模型组、上调组、下调组各8只。结果 与模型组相比,上调组MAPK表达量、VIP、GAS、TNF-α、IL-6水平、TLR4、Myd88、NF-κB mRNA表达量及相对表达量上升,MOT、IL-4、IL-10水平下降,下调组MAPK表达量、VIP、GAS、TNF-α、IL-6水平、TLR4、Myd88、NF-κB mRNA表达量及相对表达量下降,MOT、IL-4、IL-10水平上升(P <0.05)。结论 妊娠期肠梗阻大鼠经下调MAPK干预后胃肠功能改善,炎性反应减轻,其机制可能与TLR4/Myd88/NF-κB通路得到抑制有关。

hhlim促进DMSO诱导的P19细胞向心肌分化

为了确定hhlim是否参与胚胎期的心肌分化和发育过程 ,用可表达hhlim蛋白和hhlim反义RNA的真核表达质粒转染P19胚胎干细胞 ,经G4 18筛选得到稳定表达hhlim和hhlim反义RNA的P19细胞克隆后 ,观察hhlim对P19细胞向心肌分化和发育的影响 .结果显示 ,Nkx2 5和GATA 4在未被外源性hhlim基因转染的P19细胞中不表达 .DMSO刺激细胞 2天后 ,GATA 4开始表达 ,3天后Nkx2 5的表达活性显著升高 .hhlim的过表达不但有利于P19细胞的存活和生长 ,而且还可以使Nkx2 5和GATA 4的表达比对照细胞提前 1天 .反义hhlim细胞株被DMSO诱导 5天后 ,细胞仍呈集落化生长 .同时 ,Nkx2 5和GATA 4开始表达的时间明显延滞 .结果表明 ,hhlim能促进P19细胞向心肌细胞分化 ,其作用是通过促进转录因子GATA 4和Nkx2

制大黄-川芎药对通过TLR4/Myd88/NF-κB信号对造影剂诱导大鼠肾小管上皮细胞凋亡及肾组织炎症因子IL-6、IL-1β的影响

目的探讨制大黄-川芎药对对造影剂肾病(CIN)大鼠肾小管上皮细胞凋亡的影响及潜在作用机制,并检测其对肾组织炎症因子白细胞介素(IL)-6、IL-1β分泌的影响。方法 24只SD大鼠随机分为正常组(Control组)、模型组(CIN组)和制大黄-川芎药对组(Drug pair组),造模后处死,测量各组血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)及肾脏指数,原位末端标记(TUNEL)染色法测各组肾小管上皮细胞凋亡变化,Western印迹检测各组肾组织凋亡蛋白Bcl-2、Bax及Toll样受体(TLR4)/髓样分化因子(Myd88)/核转录因子(NF)-κB通路蛋白表达变化,酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组肾组织中炎性细胞因子IL-6、IL-1β分泌。结果与Con-trol组相比,CIN组Scr、BUN含量和肾指数均显著上高,肾小管上皮细胞凋亡率显著增加,Bcl-2表达显著降低,Bax表达显著升高,TLR4/Myd88/NF-κB通路活性和炎性细胞因子IL-6、IL-1β分泌显著增加(均P<0. 05); Drug pair组较CIN组Scr、BUN含量和肾指数均明显回落,肾小管上皮细胞凋亡率显著降低,Bcl-2表达显著增加,Bax表达显著降低,TLR4/Myd88/NF-κB通路活性和炎性细胞因子IL-6、IL-1β分泌显著降低。结论制大黄-川芎药对可能通过TLR4/Myd88/NF-κB信号通路减少造影剂诱导的炎性细胞因子IL-6、IL-1β分泌,进而抑制了CIN大鼠肾小管上皮细胞凋亡,发挥保护作用。

黄芩苷通过抑制TLR2/MyD88/NF-κB信号通路减轻带状疱疹后遗神经痛大鼠神经炎症

目的探讨黄芩苷通过抑制Toll样受体(TLR)2/髓样分化因子(MyD88)/核转录因子(NF)-κB信号通路减轻带状疱疹后遗神经痛(PHN)大鼠神经炎症的机制。方法SD大鼠随机分为对照组、模型组、黄芩苷低剂量(30 mg/kg)组、黄芩苷高剂量(60 mg/kg)组、黄芩苷高剂量+空载质粒组、黄芩苷高剂量+TLR2过表达组,每组10只,模型组和给药组通过腹腔注射树脂毒素(RTX)诱导建立PHN模型,对照组腹腔注射等剂量含10%Tween 80及10%乙醇的生理盐水,采用黄芩苷和质粒分组处理大鼠后,检测大鼠疼痛症状,比较自发缩足反射次数、缩爪阈值、热敏潜伏期;采用TUNEL法检测脊髓神经细胞凋亡率;采用免疫组织化学染色检测各组脊髓组织炎性细胞浸润,比较脊髓组织淋巴细胞功能相关抗原(LFA)-1阳性细胞比例;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测脊髓组织及血清炎症因子前列腺素(PGE)2、白细胞介素(IL)-18、环氧化酶(COX)-2水平;采用免疫印迹法检测各组脊髓组织TLR2/MyD88/NF-κB通路相关蛋白表达。结果与对照组比较,模型组缩爪阈值显著降低,热敏潜伏期、自发缩足反射次数、脊髓神经细胞凋亡率、LFA-1阳性细胞比例、脊髓组织及血清PGE2、IL-18、COX-2水平、脊髓组织TLR2、MyD88蛋白表达及p-NF-κB p65/NF-κB p65显著升高(均P<0.05)。与模型组比较,黄芩苷低剂量组、黄芩苷高剂量组、黄芩苷高剂量+空载质粒组缩爪阈值均显著升高,热敏潜伏期、自发缩足反射次数、脊髓神经细胞凋亡率、LFA-1阳性细胞比例、脊髓组织及血清PGE2、IL-18、COX-2水平、脊髓组织TLR2、MyD88蛋白表达及p-NF-κB p65/NF-κB p65均显著降低(均P<0.05);黄芩苷高剂量组缩爪阈值相比黄芩苷低剂量组显著升高,热敏潜伏期、自发缩足反射次数、脊髓神经细胞凋亡率、LFA-1阳性细胞比例、脊髓组织及血清PGE2、IL-18、COX-2水平、脊髓组织TLR2、MyD88蛋白表达及p-NF-κB p65/NF-κB p65显著降低(均P<0.05)。与黄芩苷高剂量组比较,黄芩苷高剂量+空载质粒组各指标无明显变化(P>0.05);黄芩苷高剂量+TLR2过表达组缩爪阈值显著降低,热敏潜伏期、自发缩足反射次数、脊髓神经细胞凋亡率、LFA-1阳性细胞比例、脊髓组织及血清PGE2、IL-18、COX-2水平、脊髓组织TLR2、MyD88蛋白表达及p-NF-κB p65/NF-κB p65显著升高(均P<0.05)。结论黄芩苷可通过抑制TLR2/MyD88/NF-κB信号通路从而降低炎症因子产生释放,进而阻止PHN大鼠神经炎症,抑制脊髓神经细胞凋亡及炎性细胞浸润,最终改善大鼠长时程自发痛、机械性痛觉超敏反应与热痛觉减退症状。

电针内关穴预处理对经皮冠状动脉介入治疗病人心肌保护作用的临床研究

目的:观察电针内关穴预处理对冠心病经皮冠状动脉介入治疗(PCI)术后病人血清肌钙蛋白I(cTnI)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶及外周血单核细胞Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)及核转录因子-κB(NF-κB)mRNA表达的影响,从临床角度探讨电针内关穴对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的预防作用和可能的作用机制。方法:纳入冠心病行PCI术病人57例,将其分为电针预处理组28例和对照组29例。电针预处理组在常规药物治疗基础上取内关穴和大陵穴,术前给予30 min电针干预,对照组仅给予常规药物治疗。通过酶联免疫吸附法(ELISA)检测两组治疗前后血清cTnI、CK和CK-MB变化;实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测两组外周血单核细胞中TLR4、MyD88和NF-κB mRNA相对表达量。结果:PCI术后病人血清cTnI、CK及外周血单核细胞TLR4、MyD88和NF-κB mRNA表达均有一定程度升高,与术前相比,除CK外,差异均有统计学意义(P<0.05);电针内关穴预处理能有效抑制PCI术后病人血清cTnI和CK含量(P<0.05);并且电针预处理能有效降低MyD88、NF-κBmRNA的表达(P<0.05),以及对TLR4 mRNA表达也有一定的抑制趋势(P>0.05)。结论:电针内关穴对MIRI起预防保护作用,机制可能与其调节TLR4/MyD88/NF-κB信号通路有关。

电针预处理对心肌缺血再灌注损伤大鼠“内关”穴区Toll样受体4、髓样分化因子88及核转录因子-κB基因表达的影响

目的:观察电针预处理对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠"内关"穴区Toll样受体4(TLR 4)、髓样分化因子88(MyD 88)以及核转录因子-κB(NF-κB)mRNA表达的影响,探讨"内关"抗心肌缺血再灌注的作用与TLR 4/MyD 88/NF-κB信号通路的关系。方法:Wistar大鼠随机分成正常组、正常电针组、假手术组、模型组、电针组和假电针组,每组8只。采用左冠状动脉前降支结扎法制备MIRI大鼠模型,造模前5d开始电针预处理,电针组、正常电针组、假电针组针刺"内关"穴,并给予相应的电针干预,每次30min,每日1次,连续5d。Real-time PCR法检测大鼠"内关"穴区TLR 4、MyD 88和NF-κB mRNA表达水平。结果:与正常组比较,模型组心电图(ECG)-J点显著升高(P<0.01),电针组与模型组和假电针组相比,ECG-J点高度降低(P<0.01)。与正常组相比,模型组大鼠"内关"穴区TLR 4、MyD 88和NF-κB mRNA表达水平显著升高(P<0.01);电针组与模型组、假电针组相比,"内关"穴区TLR 4、MyD 88和NF-κB mRNA的表达水平降低(P<0.05)。结论:电针预处理能降低MIRI大鼠"内关"穴区TLR 4、MyD 88和NF-κB mRNA的表达水平,因此针刺信号的启动-传递-放大可能与TLR 4/MyD 88/NF-κB信号通路有关。

基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路探讨积雪草酸对急性肺损伤大鼠氧化应激和NLRP3炎症小体的影响

目的 观察积雪草酸对脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤大鼠氧化应激和核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体相关蛋白的影响,并探讨其相关分子机制。方法 将60只SD雄性大鼠随机分为对照组、模型组、积雪草酸低剂量组、积雪草酸高剂量组和地塞米松组,每组12只。除对照组外,其余组大鼠均采用LPS气管滴注法建立急性肺损伤模型。模型建立成功后第2天,积雪草酸低、高剂量组大鼠分别腹腔注射25 mg/kg和75 mg/kg积雪草酸溶液,地塞米松组大鼠腹腔注射2 mg/kg地塞米松注射液,对照组和模型组大鼠腹腔注射等量生理盐水,均1次/d,连续注射8周。HE染色观察大鼠肺组织病理形态,称重法计算肺组织湿/干重比值,TUNEL染色检测大鼠肺组织细胞凋亡情况,试剂盒检测大鼠支气管肺泡灌洗液中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量,Western blot法检测肺组织中NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、Toll样受体4(TLR4)、髓样分化蛋白88(MyD88)、核转录因子-κB(NF-κB)和磷酸化NF-κB(p-NF-κB)表达情况。结果 与对照组比较,模型组大鼠肺组织可见明显病理损伤,肺组织湿/干重比值、细胞凋亡率、支气管肺泡灌洗液中MDA含量和肺组织中NLRP3、ASC、Caspase-1、TLR4、MyD88蛋白相对表达量及p-NF-κB/NF-κB比值均显著升高(P均<0.05),支气管肺泡灌洗液中SOD、GSH-Px含量均显著降低(P均<0.05)。与模型组比较,积雪草酸低、高剂量组和地塞米松组大鼠肺组织病理损伤显著改善,肺组织湿/干重比值、细胞凋亡率、支气管肺泡灌洗液中MDA含量和肺组织中NLRP3、ASC、Caspase-1、TLR4、MyD88蛋白相对表达量及p-NF-κB/NF-κB比值均显著降低(P均<0.05),支气管肺泡灌洗液中SOD、GSH-Px含量均显著升高(P均<0.05),且积雪草酸高剂量组和地塞米松组大鼠上述指标变化均显著优于积雪草酸低剂量组(P均<0.05)。结论 积雪草酸可通过抑制氧化应激和NLRP3炎症小体激活减轻LPS诱导的急性肺损伤,其作用机制可能与调控TLR4/MyD88/NF-κB信号通路有关。

基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路探讨雷帕霉素对狼疮小鼠肾脏的保护作用

目的观察雷帕霉素(rapamycin,RAPA)对狼疮性肾炎(lupus nephritis,LN)模型小鼠Toll样受体4/髓系分化因子88/核转录因子κB(TLR4/MyD88/NF-κB)通路基因和蛋白表达水平的影响,探讨其治疗狼疮性肾炎的可能分子机制。方法20周龄C57BL/6小鼠和MRL/lpr小鼠40只,分为正常对照组(n=10)、治疗组(n=10)、狼疮组(n=10)、狼疮治疗组(n=10)。正常对照组和狼疮组给予相同体积的生理盐水,治疗组和狼疮治疗组给予RAPA 2.0 mg/kg腹腔注射,连续28天;于第28天收集24小时尿液,第29天处死小鼠。检测24小时尿蛋白水平和血清anti-dsDNA、ANA、anti-Sm水平;HE、Masson、PAS、PASM染色方法观察肾组织病理变化;qRT-PCR、免疫荧光检测肾组织中TLR4、MyD88和NF-κB-p65基因和蛋白表达水平;TUNEL染色观察肾组织细胞凋亡水平。结果(1)雷帕霉素治疗后,24小时尿蛋白和血清ANA、anti-dsDNA、anti-Sm明显改善(P<0.05),病理损伤明显改善。(2)雷帕霉素治疗后,肾组织TLR4、MyD88、NF-κB-p65的基因表达水平和蛋白表达水平均明显降低(P<0.05),肾组织细胞凋亡率降低(P<0.05)。结论雷帕霉素可改善狼疮性肾炎肾损伤,其机制可能是通过抑制LN肾组织TLR4/MyD88/NF-κB信号通路并减少LN肾组织中的细胞凋亡实现的。

基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路观察维生素D_(3)对大鼠炎症性肠病的改善作用

目的基于Toll样受体4/髓样分化因子88/核转录因子κB(TLR4/MyD88/NF-κB)信号通路观察维生素D3(VD_(3))对大鼠炎症性肠病(IBD)的改善作用。方法选取32只大鼠随机分为对照组(Control组)、模型组(Model组)、低浓度VD_(3)组(VD_(3)low组)、高浓度VD_(3)组(VD_(3)high组)。采用3%右旋葡聚糖硫酸钠(DSS)建立大鼠IBD模型,分别给予不同浓度VD_(3)干预。造模结束后计算大鼠疾病活动指数(DAI)得分并测量结肠长度;行HE染色及结肠组织病理学评分;qRT-PCR、Western blot及免疫组化检测TLR4、MyD88、NF-κB p65 mRNA和蛋白表达水平;ELISA检测血清促炎因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)、抗炎因子白介素10(IL-10)含量。结果与Control组相比,Model组DAI评分、TLR4、MyD88、NF-κB p65 mRNA及蛋白表达水平,TNF-α、IL-1β、IL-6表达水平均显著升高,IL-10表达水平显著降低(P<0.05)。HE染色可见结肠组织黏膜及黏膜下层糜烂,形成溃疡、出血、隐窝脓肿,有大量炎症细胞、中性粒细胞浸润,杯状细胞减少。VD_(3)干预后,与Model组相比,VD_(3)low组、VD_(3)high组DAI评分、TLR4、MyD88、NF-κB p65 mRNA及蛋白表达水平,TNF-α、IL-1β、IL-6表达水平均显著下降,IL-10表达水平显著升高,结肠组织损伤有所缓解(P<0.05)。结论VD_(3)通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路,降低下游促炎因子的表达,从而减轻IBD大鼠肠道损伤,改善结肠炎症反应,对IBD大鼠有很好的干预作用。

壮骨止痛胶囊对去卵巢大鼠股骨组织Runx2、Osx及DKK1蛋白表达的影响

目的观察壮骨止痛胶囊(Zhuang Gu Zhi Tong Capsule,ZGZTC)对去卵巢大鼠股骨组织Runx2(成骨细胞分化和软骨细胞成熟所必需的转录因子之一)、Ostrix(Osx或Sp7,成骨细胞分化所需的转录因子,能与基因启动子上的Sp结合位点结合并调节其表达)、Dickkopf-1(DKK1,一种分泌型Wnt拮抗剂)表达的影响,探讨其治疗绝经后骨质疏松的机制。方法按体质量将60只3月龄SPF级雌性大鼠随机分为6组:空白组(BlankGroup,B)、模型组(ModelGroup,M)、骨松宝组(Gusong bao Group,GSB)、壮骨止痛胶囊高剂量(ZGZTC-HD)、壮骨止痛胶囊中剂量(ZGZTC-MD)、壮骨止痛胶囊低剂量(ZGZTC-LD)组,每组10只。除空白组外,其余5组均采用双侧去卵巢法制备绝经后骨质疏松模型。术后1周开始药物干预,连续13周。取股骨,观察其病理形态及Runx2、Osx、DKK1蛋白的表达。结果与M相比较,GSB、ZGZTC-HD、ZGZTC-MDD骨小梁面积基本恢复,骨髓腔面积无明显扩大,梁髓比升高明显;与M相比,GSB、ZGZTC-HD、ZGZTC-MD、ZGZTC-LD四组大鼠股骨组织的Runx2蛋白和Osx蛋白表达率上升(P<0.05)、DKK1蛋白表达率下降(P<0.05)。结论ZGZTC可以调节Osx、Runx2及DKK1蛋白表达,Osx和Runx2蛋白在股骨组织中起正向调节作用,DKK1蛋白起负向调节作用,这可能是ZGZTC防治PMOP的作用机制之一。

西红花苷对缺血性脑卒中后抑郁大鼠炎症反应及TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的影响

目的:探讨西红花苷对脑卒中后抑郁大鼠炎症反应及Toll样受体4/髓样分化蛋白88/核转录因子-κB(TLR4/MyD88/NF-κB)信号通路的影响,阐明西红花苷对脑卒中后抑郁的可能作用机制。方法:将72只大鼠根据随机数字法分为对照组(C组)、模型组(M组)、西红花苷组(CR组),每组24只。采用KoiZumi法建立脑卒中大鼠模型。采用慢性不可预见的温和性应激建立脑卒中后抑郁模型。糖水适应实验测定糖水偏嗜比(SP)。旷场试验测定5 min内各大鼠水平运动次数和垂直运动次数。ELISA测定海马组织IL-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。免疫组化测定海马组织TLR4、MyD88、NF-κB表达。Western blot测定各组大鼠海马组织P65、磷酸化P-65(p-P65)、I-κBα、p-I-κBα蛋白水平。结果:应激前,3组大鼠体重、SP、水平运动次数、垂直运动次数差异无统计学意义(P>0.05);应激后,3组大鼠体重、SP、水平运动次数、垂直运动次数差异有统计学意义(P<0.05),M组大鼠体重、SP、水平运动次数、垂直运动次数低于C组,CR组大鼠体重、SP、水平运动次数、垂直运动次数高于M组。3组大鼠海马组织IL-1β、IL-6、TNF-α水平,海马组织TLR4、MyD88、NF-κB阳性细胞数及p-P65、p-I-κBα蛋白水平差异有统计学意义(P<0.05),M组大鼠海马组织IL-1β、IL-6、TNF-α水平,海马组织TLR4、MyD88、NF-κB阳性细胞数以及p-P65、p-I-κBα蛋白水平高于C组,CR组大鼠海马组织IL-1β、IL-6、TNF-α水平,海马组织TLR4、MyD88、NF-κB阳性细胞数以及p-P65、p-I-κBα蛋白水平低于M组。结论:西红花苷可缓解脑卒中后抑郁大鼠的抑郁症状,抑制脑组织炎症反应,抑制脑组织TLR4/MyD88/NF-κB信号通路激活。

木犀草素对心力衰竭大鼠心肌炎症反应和TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的影响

目的观察木犀草素对心力衰竭大鼠心肌炎症反应和Toll样受体4/髓样分化因子88/核转录因子-κB(TLR4/MyD88/NF-κB)信号通路的影响,阐明木犀草素对心力衰竭的可能作用机制。方法将51只雄性SD大鼠采用随机数字表法分为假手术组(S组)、心力衰竭组(H组)和木犀草素治疗组(L组),各17只大鼠。采用开胸手术建立心力衰竭动物模型,L组大鼠给予50 mg/(kg·d)木犀草素(体积3 mL)灌胃。心脏超声测定左室射血分数(LVEF)、短轴缩短率(FS)、左室舒张末期内径(LVEDD)、左室收缩末期内径(LVESD)、左室舒张末期容积(LVEDV)、左室收缩末期容积(LVESV)。苏木精-伊红(HE)染色观察心脏组织形态学变化;Masson染色观察心肌组织胶原形成情况。采用双抗夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清脑钠肽(BNP)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。采用蛋白免疫印迹法测定心肌组织IL-1β、IL-6、TNF-α、TLR4、MyD88、NF-κB p65蛋白表达水平。结果与S组比较,H组LVEF、FS降低(P<0.05),LVEDD、LVESD、LVEDV、LVESV增加(P<0.05);与H组比较,L组LVEF、FS升高(P<0.05),LVEDD、LVESD、LVEDV、LVESV降低(P<0.05)。HE染色:S组大鼠心肌组织正常;H组大鼠心肌坏死和炎症浸润严重;L组大鼠心肌坏死和炎症浸润明显减轻。Masson染色:与S组比较,H组胶原面积比增加(P<0.05);与H组比较,L组胶原面积比降低(P<0.05)。与S组比较,H组血清BNP、IL-1β、IL-6、TNF-α水平及心肌组织IL-1β、IL-6、TNF-α、TLR4、MyD88、NF-κB p65蛋白水平升高(P<0.05);与H组比较,L组血清BNP、IL-1β、IL-6、TNF-α水平及心肌组织IL-1β、IL-6、TNF-α、TLR4、MyD88、NF-κB p65蛋白水平降低(P<0.05)。结论木犀草素可抑制心力衰竭大鼠心肌炎症反应和TLR4/MyD88/NF-κB信号通路,发挥对心力衰竭的保护作用。

食源性晚期糖基化终末产物上调TLR4/MyD88/NF-κB信号通路对小鼠非酒精性脂肪肝炎症反应的影响

目的观察食源性晚期糖基化终末产物(AGEs)对Toll样受体(TLR)4/髓样分化因子(MyD88)/核转录因子(NF)-κB信号通路及肝脏炎症的影响,探讨其致非酒精性脂肪肝(NAFL)的作用机制。方法选取60只小鼠随机分为空白对照组、外源性晚期糖基化终末产物(AGEs)组、食源性AGEs组和阳性对照组,每组15只。空白对照组喂养普通饲料,外源性AGEs组喂养外源性AGEs饲料,食源性AGEs组喂养食源性AGEs饲料,阳性对照组喂养高脂饲料,连续喂养12 w。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测4组饲料AGEs含量,用全自动生化分析仪检测小鼠血脂及肝功能指标表达水平,用苏木素-伊红(HE)染色和油红染色观察各组肝脏病理形态,ELISA检测血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-2、IL-6含量,Western印迹检测肝脏组织TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达水平,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测肝脏组织TLR4、MyD88、NF-κB mRNA表达水平。结果与空白对照组和阳性对照组比较,外源性AGEs组和食源性AGEs组饲料AGEs含量均升高,且外源性AGEs组高于食源性AGEs组,差异具有统计学意义(均P<0.05)。HE染色显示,空白对照组肝小叶结构完整,肝细胞排列整齐,未见脂肪变性,食源性AGEs组可见少量细小的脂肪滴空泡,外源性AGEs组和阳性对照组可见脂肪滴空泡,阳性对照组更为明显。油红染色显示,与空白对照组比较,外源性AGEs组、食源性AGEs组和阳性对照组脂滴显著增加,阳性对照组更明显。血清三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、谷草转氨酶(AST)及丙氨酸氨基转移酶(ALT)表达水平在空白对照组、食源性AGEs组、外源性AGEs组和阳性对照组中均依次升高,差异具有统计学意义(均P<0.05)。与空白对照组比较,食源性AGEs组、外源性AGEs组和阳性对照组血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)表达水平降低,外源性AGEs组和阳性对照组低于食源性AGEs组,差异具有统计学意义(均P<0.05)。与空白对照组比较,外源性AGES组、食源性AGES组和阳性对照组血清TNF-α、IL-2及IL-6表达水平均升高,外源性AGEs组和阳性对照组高于食源性AGEs组,阳性对照组高于外源性AGEs组,差异具有统计学意义(均P<0.05)。Western印迹检测肝组织TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达水平显示,食源性AGEs组、外源性AGEs组和阳性对照组较空白对照组显著,且阳性对照组高于食源性AGEs组和外源性AGEs组,差异有统计学意义(P<0.05)。qRT-PCR检测肝组织TLR4、MyD88、NF-κB mRNA表达水平显示,食源性AGEs组、外源性AGEs组和阳性对照组较空白对照组升高,差异具有统计学意义(均P<0.05),阳性对照组MyD88 mRNA表达水平高于食源性AGEs组和外源性AGEs组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论食源性AGEs促进小鼠炎症反应,加重小鼠肝脏脂肪变性,其可能作用机制与上调TLR4/MyD88/NF-κB信号通路表达相关。

基于髓样分化蛋白-2靶点探讨熊果酸抗脓毒症的作用机制

目的以髓样分化蛋白-2(MD-2)为研究载体,探讨熊果酸抗脓毒症的作用机制。方法应用生物膜干涉技术测定熊果酸与MD-2的亲和力,基于分子对接技术测定熊果酸与MD-2的键合方式。RPMI 1640培养基培养巨噬细胞Raw 264.7,细胞密度达到80%~90%时进行传代培养,取第2代细胞进行实验,通过四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测8、40和100 mg/L熊果酸对细胞活性的影响。将细胞分为空白组、内毒素组(LPS 100μg/L)和熊果酸组(加入8、40或100 mg/L熊果酸后给予100μg/L LPS处理)。用酶联免疫吸附试验(ELISA)评价熊果酸对一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL-6、IL-1β)等细胞因子释放的影响;反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)评价熊果酸对TNF-α、IL-6、IL-1β、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、环氧合酶2(COX-2)mRNA表达的影响;蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)检测熊果酸对内毒素-Toll样受体4/MD-2-核转录因子-κB(LPS-TLR4/MD-2-NF-κB)通路中蛋白表达的影响。结果熊果酸可能进入MD-2的疏水性空腔,通过疏水键与MD-2的氨基酸残基结合表现出与蛋白的较高亲和力〔解离常数(KD)=1.43×10^(-4)〕。随着熊果酸浓度升高,细胞活性略有降低,8、40和100 mg/L熊果酸处理的细胞活性分别为96.01%、94.32%和92.12%,与空白组(100%)比较差异均无统计学意义。与空白组比较,LPS组细胞因子水平明显升高;而8、40和100 mg/L熊果酸处理可使细胞因子水平显著下降,且浓度越高作用越明显〔100 mg/L熊果酸与LPS组比较:IL-1β(μmol/L):38.018±0.675比111.324±1.262,IL-6(μmol/L):35.052±1.664比115.255±5.392,TNF-α(μmol/L):39.078±2.741比119.035±4.269,NO(μmol/L):40.885±2.372比123.405±1.291,均P<0.01〕。与空白组比较,LPS组TNF-α、IL-6、IL-1β、iNOS、COX-2的mRNA表达均明显升高,LPS-TLR4/MD-2-NF-κB通路中MD-2、髓样分化因子88(MyD88)、磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)和iNOS的蛋白表达明显上调。与LPS组比较,100 mg/L熊果酸与MD-2蛋白作用,可使TNF-α、IL-6、IL-1β、iNOS、COX-2的mRNA表达明显下降〔TNF-α(2^(-ΔΔCt)):4.659±0.821比8.652±0.787,IL-6(2^(-ΔΔCt)):4.296±0.802比11.132±1.615,IL-1β(2^(-ΔΔCt)):4.482±1.224比11.758±1.324,iNOS(2^(-ΔΔCt)):1.785±0.529比4.249±0.811,COX-2(2^(-ΔΔCt)):5.591±1.586比16.953±1.651,均P<0.01〕,并显著下调LPS-TLR4/MD-2-NF-κB通路中MD-2、MyD88、p-NF-κB p65和iNOS的蛋白表达(MD-2/β-actin:0.191±0.038比0.704±0.049,MyD88/β-actin:0.470±0.042比0.875±0.058,p-NF-κB p65/β-actin:0.178±0.012比0.571±0.012,iNOS/β-actin:0.247±0.035比0.549±0.033,均P<0.01)。但3组间NF-κB p65的蛋白表达差异无统计学意义。结论熊果酸抑制细胞因子和介质的释放及表达,通过阻断MD-2蛋白调控LPS-TLR4/MD-2-NF-κB信号通路,从而起到抗脓毒症的作用。