巨自噬和分子伴侣介导自噬在内皮细胞氧化应激损伤中的特点

目的 探究巨自噬和分子伴侣介导自噬(chaperone-mediated autophagy, CMA)这两种自噬途径在人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVECs)氧化应激损伤中特点。方法 通过不同浓度(0、20、50、100、200μg/mL)氧化低密度脂蛋白(oxidation low lipoprotein, OX-LDL)作用HUVECs后产生的活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平筛选诱导HUVECs氧化应激的适宜浓度。设立空白对照组(不做任何处理)、单纯抑制巨自噬组(10 mmol/L 3-MA)、氧化应激组(50μg/mL OX-LDL)和抑制巨自噬-氧化应激组(10 mmol/L 3-MA+50μg/mL OX-LDL),检测各组细胞增殖标志蛋白PCNA、凋亡标志蛋白Caspase-3、巨自噬标志蛋白Beclin-1、分子伴侣介导自噬两种标志蛋白Hsc70和Lamp-2蛋白表达,评估不同处理下HUVECs增殖、凋亡及两种自噬的变化。其中氧化应激组和抑制巨自噬-氧化应激组处理不同时间(1、3、6、12、48 h)后,采用CCK-8检测细胞增殖抑制率,Annexin-V/PI双染检测凋亡,Western blot检测两种自噬途径蛋白Beclin-1、Hsc70、Lamp-2表达,评估巨自噬抑制前后氧化应激下HUVECs的增殖、凋亡及两种自噬的时间调控特点。结果 OX-LDL诱导氧化应激下ROS浓度呈递增关系,选择50μg/mL为适宜浓度进行后续实验。与空白对照组比较,氧化应激组HUVECs Caspase-3、Beclin-1、Hsc70、Lamp-2上调,PCNA下调(P<0.05),同时随处理时间延长,48 h内细胞增殖抑制率、全期凋亡率及Lamp-2递增,Hsc70在6 h后递增,12 h内Beclin-1水平递增(P<0.05);与氧化应激组比较,抑制巨自噬-氧化应激组Caspase-3、Hsc70、Lamp-2上调,PCNA下调(P<0.05),随处理时间延长,同时段Hsc70、Lamp-2上调,且Hsc70在3 h后递增(P<0.05)。结论 巨自噬和分子伴侣介导自噬在内皮细胞氧化应激过程中先后激活,巨自噬抑制后提高分子伴侣介导自噬水平,并提前激活时间,减轻氧化应激对内皮细胞的损伤。

类风湿关节炎患者滑膜成纤维细胞分子伴侣介导自噬增强与病情的相关性

目的检测类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者滑膜成纤维细胞(rheumatoid arthritis fibroblast-like synoviocytes,RA-FLS)分子伴侣介导自噬(chaperone-mediated autophagy,CMA)水平,探究其与RA病情发生发展的关系。方法从手术室中收取8例RA患者膝关节滑膜组织,培养原代滑膜细胞;同期收取8例骨关节炎(osteoarthritis,OA)患者膝关节滑膜组织,培养骨关节炎滑膜成纤维细胞(osteoarthritis fibroblast-like synoviocytes,OA-FLS)作为对照。采用RT-qPCR检测RA-FLS与OA-FLS中CMA标志性因子Hsc70、LAMP2A mRNA水平;Western blot法检测两组细胞中Hsc70、LAMP2A蛋白水平。采用免疫荧光细胞化学染色检测RA-FLS中Hsc70、LAMP2A蛋白及共定位表达。采用Pearson法分析Hsc70、LAMP2A蛋白与RA患者临床指标DAS28、血沉(erythrocyte sedimentation rate,ESR)、C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、类风湿因子(rheumatoid factor,RF)的相关性。结果RA-FLS组Hsc70与LAMP2A mRNA(1.05±0.15和1.01±0.06)和蛋白水平(1.02±0.08和1.07±0.03)均明显高于OA-FLS(分别为0.51±0.10和0.63±0.08、0.78±0.06和0.61±0.08)对照组(P<0.05);免疫荧光结果显示,RA-FLS中代表Hsc70蛋白的红色荧光和代表LAMP2A蛋白的绿色荧光明显更强,红绿荧光融合后的黄色荧光斑点也显著高于对照组。Pearson相关性分析结果显示,Hsc70蛋白水平与RA患者DAS28得分呈正相关(r=0.7756),LAMP2A蛋白水平与RA患者DAS28得分、ESR呈正相关(分别r=0.7507、r=0.7790)。结论RA患者Hsc70、LAMP2A表达上调,CMA途径被激活,且与RA患者的病情活动度呈正相关。

帕金森病细胞模型中分子伴侣介导自噬对α-突触核蛋白低聚体水平的影响

目的·探讨在泛素蛋白酶体系统(ubiquitin proteasome system,UPS)受损的帕金森病(Parkinson's disease,PD)细胞模型中分子伴侣介导自噬(chaperone-mediated autophagy,CMA)对α-突触核蛋白低聚体水平的影响。方法·培养稳转野生型α-突触核蛋白的人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞系,加入蛋白酶体抑制剂lactacystin构建PD细胞模型。通过Western blotting检测α-突触核蛋白低聚体、溶酶体相关膜蛋白2A型(lysosome-associated membrane protein type 2A,LAMP2A)和相对分子质量为70 000的热休克同源蛋白(heat-shock cognate protein of 70 kDa,HSC70)水平;使用LAMP2A siRNA抑制CMA功能,检测对α-突触核蛋白低聚体水平及细胞存活率的影响;通过免疫共沉淀观察LAMP2A与α-突触核蛋白低聚体的相互作用。结果·PD细胞模型中α-突触核蛋白低聚体表达水平升高,与CMA功能密切相关的蛋白LAMP2A和HSC70水平应激性增加;抑制LAMP2A表达,α-突触核蛋白低聚体水平进一步升高,细胞存活率降低,且通过免疫共沉淀检测到LAMP2A与α-突触核蛋白低聚体存在相互作用。结论·PD细胞模型中,CMA是调节α-突触核蛋白低聚体水平的途径之一,抑制其功能可进一步增加α-突触核蛋白低聚体水平及细胞毒性作用。

石菖蒲挥发油有效成分β-细辛醚联合左旋多巴对6-OHDA诱导帕金森模型大鼠的分子伴侣介导自噬的影响

目的:研究石菖蒲挥发油有效成分β-细辛醚联合左旋多巴(L-dopa)对6-羟基多巴(6-OHDA)诱导帕金森(PD)模型大鼠的分子伴侣介导自噬(CMA)的影响。方法:将SD大鼠通过脑立体定位仪于内侧前脑束(MFB)处注射6-OHDA制备PD模型大鼠。将60只PD大鼠随机分为5组,每组12只,即模型组、MEF2D抑制剂(SB203580,0.5 mg/kg)组、MEF2D激活剂(LiCl,100 mg/kg)组、β-细辛醚(15 mg/kg)组、联合用药组(L-dopa 60 mg/kg+β-细辛醚15 mg/kg)组。给药组按上述剂量灌胃给药,2次/d,持续30 d。而假手术组和模型组按0.5 mL/kg灌胃蒸馏水,2次/d。实验结束后ELISA法检测α-syn、TH、LAMP-2A、HSP70、MEF2D水平,RT-PCR法和Western blot法检测Beclin-1、HSP70、HSC70、MEF2D mRNA及蛋白表达。结果:与假手术组比较,模型组α-syn和Beclin-1显著升高,TH、LAMP-2A、HSP70、MEF2D、HSC70显著降低(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,MEF2D抑制剂组的α-syn显著升高,Beclin-1、TH、LAMP-2A水平及HSP70、MEF2D、HSC70 mRNA表达显著降低(P<0.05或P<0.01),而LiCl组、β-细辛醚组和联合用药组的α-syn、Beclin-1显著降低,TH、LAMP-2A水平及HSP70、MEF2D、HSC70 mRNA表达显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论:石菖蒲挥发油有效成分β-细辛醚与L-dopa联合用药通过调节HSP70/MEF2D/Beclin-1分子伴侣介导的自噬通路降低6-OHDA诱导PD大鼠中多巴胺能神经元的损伤。

分子伴侣介导的自噬对胆红素诱导的小鼠小胶质细胞损伤的影响

目的探讨分子伴侣介导的自噬(chaperone-mediated autophagy,CMA)对未结合胆红素(unconjugated bilirubin,UCB)诱导的小鼠小胶质细胞BV2损伤的影响。方法BV2细胞实验分为两部分。(1)CMA激活实验分为:对照组(等体积二甲基亚砜处理)、QX77组(20μmol/L QX77处理24 h)、UCB组(40μmol/L UCB处理24 h)、UCB+QX77组(20μmol/L QX77和40μmol/L UCB共处理24 h)。(2)细胞转染实验分为:LAMP2A沉默对照组(等体积二甲基亚砜处理)、LAMP2A沉默对照+UCB组(40μmol/L UCB处理24 h)、LAMP2A沉默组(等体积二甲基亚砜处理)、LAMP2A沉默+UCB组(40μmol/L UCB处理24 h)。采用改良MTT法检测细胞存活率,蛋白免疫印迹法检测p65、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1(cysteinyl aspartate specific proteinase-1,caspase-1)蛋白表达水平,实时荧光定量聚合酶链反应法检测炎症因子白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)mRNA相对表达量,ELISA法检测细胞培养上清液中炎症因子IL-6和TNF-α水平,免疫荧光法检测细胞内p65、NLRP3与热休克同源蛋白70的荧光共定位。结果与UCB组相比,UCB+QX77组细胞存活率升高,炎症相关蛋白p65、NLRP3、caspase-1表达水平降低,炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA相对表达量降低以及IL-6、TNF-α水平降低(P<0.05)。与对照组相比,UCB组和UCB+QX77组热休克同源蛋白70与p65、NLRP3存在共定位。沉默LAMP2A基因后,与LAMP2A沉默对照+UCB组相比,LAMP2A沉默+UCB组炎症相关蛋白p65、NLRP3、caspase-1蛋白表达水平升高,炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA相对表达量升高以及IL-6、TNF-α水平升高(P<0.05)。结论CMA在UCB诱导的BV2细胞损伤中被抑制,激活CMA可能通过降低p65和NLRP3蛋白水平,抑制炎症反应,拮抗胆红素神经毒性。

抗坏血酸对癫痫大鼠海马分子伴侣介导的自噬激活的影响

目的:探讨癫痫大鼠海马氧化应激反应和分子伴侣介导的自噬(chaperone-mediated autophagy,CMA)活性的变化,以及抗氧化剂抗坏血酸(ascorbic acid,AA)神经保护作用的可能机制。方法:实验大鼠分为空白对照组、癫痫24 h组、AA预处理癫痫组和AA对照组。应用RT-PCR和免疫印迹法检测海马组织2a型溶酶体相关膜蛋白(lysosome-associated membrane protein type 2a,LAMP2a)mRNA和蛋白的变化,采用化学法检测海马组织丙二醛(malondialdehyde,MDA)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的水平。结果:癫痫组大鼠海马组织LAMP2a转录和合成明显高于空白对照组,MDA含量明显升高,而SOD的水平显著下降。AA预处理可显著减低癫痫大鼠海马LAMP2a的转录和合成,并明显降低MDA的含量,却显著提高SOD的水平。结论:癫痫发作导致的海马损伤时存在CMA激活现象和显著的氧化应激反应;抗氧化剂AA通过抑制CMA活性和降低氧化应激反应来减轻癫痫发作中的海马损伤,具有神经保护作用。

巨自噬与分子伴侣介导的自噬在饥饿诱导的Raji细胞中相继顺序被激活

目的 研究巨自噬与分子伴侣介导的自噬在饥饿诱导的Raji细胞中出现的先后顺序及其机制。方法用激光共聚焦显微镜和荧光显微镜观察MDC荧光染色后,Raji细胞内自噬体的形成情况;Western blot检测细胞LC3Ⅰ/Ⅱ、 Beclin-1、Hsc70及Lamp-2a等蛋白的表达水平。结果在饥饿诱导的Raji细胞中,巨自噬与分子伴侣介导的自噬是相继顺序,而非同步被激活,巨自噬活性在饥饿诱导的最初几小时快速升高并达到峰值,然后随着饥饿时间的延长逐渐下降,而与巨自噬活性下降相伴随的是分子伴侣介导的自噬活性逐渐增加。结论肿瘤细胞在饥饿诱导的不同阶段通过不同的自噬方式应对压力刺激,巨自噬与分子伴侣介导的自噬之间此消彼长、协调补充的关系更有助于肿瘤细胞适应内外环境的变化,维持自身的生长与增殖。

分子伴侣介导的自噬及其生理病理作用

分子伴侣介导的自噬(CMA)是首个被发现的具有严格选择性的自噬类型。某些蛋白质通过特定标签,被分子伴侣识别并运输到溶酶体膜,通过溶酶体膜受体/易位复合物易位到溶酶体腔中降解。CMA能够降解受损和变异的蛋白质,因此在维持细胞蛋白质稳态中起重要作用。另外,CMA还可通过降解机体某些关键过程的关键蛋白而发挥调节作用,如脂质和葡萄糖代谢、细胞周期、DNA修复和细胞重编程等。随着年龄的增长CMA的功能逐渐降低,这种现象也在越来越多的病理过程中被发现,如代谢紊乱、神经变性、免疫缺陷、糖尿病以及癌症等。近年来,CMA的功能作用逐渐被人们重视,针对CMA调节剂的研发将有助于进行疾病靶向治疗,最终使人类受益。

分子伴侣介导的自噬在阿尔茨海默病中作用的研究进展

阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是一种常见的神经系统退行性疾病,其主要病理变化是β淀粉样蛋白(amyloidβ-protein,Aβ)大量堆积形成的老年斑(senile plaque,SP)和细胞内Tau蛋白(Tau protein)过度磷酸化积聚形成的神经原纤维缠结(neurofibrillary tangles,NFTs)。分子伴侣介导的自噬(chaperone-mediated autophagy,CMA)是一种选择性地将带有CMA基序的蛋白传递到溶酶体进行降解的过程。当自噬过程受损时,Aβ与异常磷酸化的Tau蛋白会大量堆积于神经元内,从而破坏细胞的正常功能并加速其死亡。相关研究表明,CMA是早期AD中异常蛋白质降解的重要途径,且该途径的失活可能在AD进展中发挥了重要作用。该文从CMA的概念、生理作用,CMA与AD的病理联系等方面进行综述,并对CMA途径的失活在AD中的作用进行详细阐述,以期为AD发病机制的研究及治疗提供新的思路。

人类细胞自噬研究的起源及细胞自噬的分子机制

细胞自噬效应是机体自身生存、生长、发育、成熟、衰老等生物学过程中自然发生的一种主动消除多余、受损、衰老蛋白和细胞器的自身净化机制。其中,巨自噬或大自噬、微自噬或小自噬以及分子伴侣自噬是细胞自噬的3种机制。进一步了解自噬发生的分子机制,不仅有助于人类从分子或基因水平和亚细胞结构与代谢水平的层面了解和分析细胞复杂的生物学过程,也为当今或未来老年医学进一步阐明和揭示人体衰老和老年疾病的发生、发展、作用及临床早期干预与治疗等提供理论依据。

白藜芦醇促进分子伴侣介导的自噬减轻神经炎症改善脓毒症相关性脑病小鼠情感功能障碍

目的 明确分子伴侣介导的自噬(CMA)减轻脓毒症相关性脑病(SAE)小鼠情感功能障碍的作用。方法 通过盲肠结扎穿孔术(CLP)构建SAE小鼠模型,采用小鼠脓毒症严重程度评分(MSS)评估小鼠脓毒症的严重程度,并进行旷场和高架十字迷宫相关行为学实验检测SAE小鼠的情感功能。Western blot法检测热休克蛋白同源蛋白70(HSC70)、溶酶体相关膜蛋白2A(LAMP2A)和高迁移率族蛋白B1(HMGB1)蛋白表达水平,免疫荧光组织化学染色检测LAMP2A与神经元的共定位情况。ELISA检测炎症因子白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的释放水平。同时按30 mg/kg剂量每天连续给予白藜芦醇灌胃直至第14天。结果 CLP小鼠14 d死亡率为45.83%,而幸存小鼠均存在情感功能障碍。CLP术后24 h海马神经元HSC70和LAMP2A表达水平显著降低,HMGB1表达水平以及炎症因子IL-6和TNF-α释放增加,CMA活性受损,而在灌胃给予白藜芦醇后,HSC70和LAMP2A表达水平增加,HMGB1表达水平降低,炎症因子释放减少,提示CMA活性提高且神经炎症减轻,行为学测试结果表明在给予小鼠白藜芦醇灌胃后小鼠情感功能障碍得到改善。结论 SAE小鼠海马神经元CMA活性显著降低,导致情感功能障碍;白藜芦醇能够促进CMA,从而抑制HMGB1的表达和炎症因子的释放,减轻神经炎症,从而改善SAE小鼠的情感功能障碍。

分子伴侣介导的自噬与疾病的相关研究进展

分子伴侣介导的自噬(CMA)是一种特异性依赖于溶酶体的降解方式。通过靶向底物的KFERQ基序,CMA负责降解约30%的胞质蛋白,包括一系列与肿瘤发生、代谢、免疫和神经退行性疾病相关的蛋白。CMA的功能异常与恶性肿瘤、神经退行性疾病、代谢综合征及免疫功能紊乱等疾病有关。鉴于CMA功能障碍与肿瘤发生及神经退行性疾病的内在联系,CMA被认为是治疗恶性肿瘤和神经退行性疾病的重要靶标。

细胞自噬的形态学特征和功能意义

目的自噬是细胞受到刺激后吞噬自身的细胞质或细胞器,最终将吞噬物在溶酶体内降解的过程。按吞噬物进入溶酶体的途径,自噬可分为巨自噬、微自噬和分子伴侣介导的自噬3类。在巨自噬,自噬前体包裹细胞质或细胞器后形成自噬体,继而自噬体与溶酶体结合形成自噬溶酶体,自噬体内容物被降解。在微自噬,溶酶体膜凹陷,直接吞噬细胞质、细胞器或细胞核,形成自噬体,然后被溶酶体酶降解。分子伴侣介导的自噬是通过溶酶体膜的受体将细胞质内的蛋白质转运入溶酶体。自噬从酵母至哺乳动物细胞均很保守,对于耐受饥饿和缺血,清除衰老细胞器,清除细菌和异物,维持细胞活性和延长寿命等起着重要作用。自噬活动受自噬基因的调控,自噬基因缺失或功能障碍时可导致某些疾病的发生。深入认识自噬过程以及由此产生的自噬体等结构及其功能有助于探讨自噬对于人体生理和病理作用的机制。本文综述了自噬的形态学特征及其功能意义。

发育期大鼠反复惊厥持续状态后分子伴侣介导的自噬表达的变化

目的观察反复惊厥持续状态后海马神经元中分子伴侣介导的自噬分子的表达及其与惊厥后脑损伤的关系。方法取日龄7 d的SD大鼠,采用简单随机分组方法分为对照组(6只)及惊厥组(39只),惊厥组反复吸入三氟乙醚诱导大鼠的惊厥持续状态,1次/d,30 min/次,连续诱导7 d。成功建立惊厥模型共30只(弃去建模失败9只),采用简单随机分组方法分为末次惊厥后0 h、1.5 h、3 h、12 h、24 h组,每组6只。采用Western blot法及反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法观察海马神经元中分子伴侣介导的自噬标记分子[热应激同源蛋白70(Hsc70)、溶酶体相关膜蛋白2a(LAMP-2a)、热休克蛋白(HSP)40及HSP90]的表达,原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡。结果1.RT-PCR及Western blot显示:与对照组相比,分子伴侣Hsc70表达量在末次惊厥后1.5 h开始升高,持续至惊厥后24 h(P<0.05);HSP90在末次惊厥后立即升高,持续至惊厥后24 h(P<0.01);HSP40及LAMP-2a表达量在末次惊厥发作后也呈现高表达(P<0.05)。2.TUNEL法显示:与对照组(15.16±2.48)/40倍视野相比,惊厥组在末次惊厥后3 h(36.33±5.16)/40倍视野、12 h(44.83±4.83)/40倍视野、24 h(54.83±7.16)/40倍视野,大鼠海马CA1区凋亡细胞数明显增多(均P<0.01)。3.Pearson相关性分析显示发育期反复惊厥持续状态后大鼠海马CA1区的细胞凋亡与分子伴侣标记分子表达呈正相关(Hsc70:r=0.734,P=0.001;LAMP-2a:r=0.790,P<0.001)。结论发育期大鼠反复惊厥持续状态发作后,存在多个分子伴侣介导的自噬表达升高,并与细胞凋亡呈正相关,可能参与了发育期反复惊厥发作后脑损伤过程。

LSD1与细胞自噬的研究进展

细胞自噬即细胞的自我吞噬,广泛存在于真核细胞中,细胞通过对受损细胞器及衰老蛋白质等细胞成分进行降解再循环利用来维持细胞自身稳态的过程[1]。处于细胞基础水平的自噬具有保护功能,可维持细胞的稳态,而细胞在氧化应激、缺氧、DNA损伤或者饥饿等环境下可诱导细胞产生自噬。鉴于其在维持细胞稳态、应激反应和功能的作用,因此,自噬需要严格调控就显得不足为奇了[2]。通常,细胞自噬主要有以下3种形式:微自噬、巨自噬和分子伴侣介导的自噬(CMA)。

帕金森病相关蛋白LRRK2对细胞自噬的调节和机制

细胞自噬在帕金森病(PD)发病过程中起重要作用,但PD中细胞自噬的调节机制仍不明确。富含亮氨酸重复序列激酶2(LRRK2)广泛表达于中枢神经系统,研究发现在神经元的自噬泡中有LRRK2的分布,在病理情况下LRRK2通过作用于自噬过程中的多个蛋白导致细胞自噬,包括巨自噬和分子伴侣介导的自噬过程的异常。LRRK2对细胞自噬的调节可能参与PD的发病过程,因而理解LRRK2对于细胞自噬的调节功能及相关机制可以为选择治疗PD的新靶点提供指导。

rhG-CSF对缺氧SH-SY5Y细胞及大鼠缺血脑组织中LAMP-2a和HSC-70蛋白表达的影响

目的:观察重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)对缺氧人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞及大鼠缺血脑组织中分子伴侣介导自噬(CMA)的标志性蛋白LAMP-2a及HSC-70表达的影响,探讨rhG-CSF抑制缺血缺氧后神经元损伤的机制。方法:制备SH-SY5Y细胞缺氧模型,分别给予0、100、200μg/L的rhG-CSF孵育48h,Westernblot检测各组细胞LAMP-2a及HSC-70的表达。将54只SD大鼠随机分为3组,每组18只;假手术组仅行颈部手术不栓塞大脑中动脉,模型组及实验组制备大脑中动脉栓塞模型,实验组给予rhG-CSF(50μg·kg-1·d-1)注射5d,假手术组及模型组给予等量生理盐水。Westernblot检测脑缺血周边区组织LAMP-2a及HSC-70的表达。参照改良神经功能缺损评分对3组大鼠进行神经功能评价。结果:随rhG-CSF浓度的增加,缺氧SH-SY5Y细胞HSC-70及LAMP-2a的表达逐渐升高(F=31.574、3.943,P<0.001)。3组大鼠HSC-70及LAMP-2a的表达水平差异有统计学意义(F=503.658、859.985,P<0.001),且实验组及模型组大鼠HSC-70、LAMP-2a的表达水平高于假手术组,实验组高于模型组(P<0.05)。实验组大鼠神经功能改善程度优于模型组(t=6.322,P<0.001)。结论:脑缺血中rhG-CSF可能通过上调CMA发挥神经元保护作用。

自噬的分子标志物

自噬(autophagy)是真核细胞所特有的通过溶酶体降解细胞内物质成分的过程。自噬主要包括大自噬(macroautophagy)、小自噬(microautophagy)和分子伴侣介导的自噬(chaperon-mediated autophagy,CMA),此外还包括线粒体自噬(mitophagy)、聚集体自噬(aggrephagy)等选择性自噬。根据最新的研究进展,本文总结了大自噬、分子伴侣介导的自噬以及线粒体自噬中的一些重要的分子标志物。

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞中微管相关蛋白轻链3和溶酶体相关膜蛋白2基因表达及其临床意义

目的检测系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中巨自噬标志性分子微管相关蛋白轻链3 (LC3)和分子伴侣介导的自噬(CMA)标志性分子溶酶体相关膜蛋白2(LAMP-2)基因表达,探讨其与SLE发病的关系。方法纳入2017年11月至2018年3月在川北医学院附属医院风湿免疫科诊治的88例SLE患者(SLE),采用密度梯度离心法分离外周血单个核白细胞(PBMCs);采用实时荧光定量PCR法测定患者PBMCs中LC3和LAMP-2在mRNA水平的表达量;采用SLE疾病活动指数(SLEDAI)评分判断疾病活动度,分析LC3和LAMP-2表达与SLE患者临床特点及病情活动度的相关性。同期纳入年龄匹配的40例健康体检者作为正常对照组。结果正常对照组受检者PBMCs中LC3 mRNA和LAMP-2 mRNA相对表达量分别为1. 021±0. 551和1. 015±0. 667,SLE组患者分别为0. 783±0. 435和2. 402±2. 233,组间比较差异均有统计学意义(P=0. 020、0. 000)。SLE患者PBMCs中LAMP-2 mRNA表达水平与SLEDAI呈明显正相关(rs=0. 312,P=0. 003),LC3mRNA表达水平与SLEDAI无明显相关性(rs=-0. 175,P=0. 103)。LAMP-2 mRNA表达量升高患者肾脏损害发生率明显高于非升高患者(40. 7%vs. 16. 3%),LC3 mRNA表达量降低患者的血液系统受累率明显高于无LC3 mRNA表达降低患者(65. 2%vs. 32. 3%),差异均有统计学意义(P=0. 013、0. 006)。不同LC3 mRNA和LAMP-2 mRNA表达水平组实验室检查指标和治疗效果的患者分布差异均无统计学意义(均P>0. 05)。结论 SLE患者LC3 mRNA表达水平下调,LAMP-2 mRNA表达水平上调,提示SLE患者存在巨自噬功能不足。SLE患者CMA功能增强,并且与肾脏和血液系统受累有关。

电针对帕金森病模型大鼠脑黑质内Lamp2a、Hsc70、α-syn表达的影响

目的：观察电针对鱼藤酮诱导的帕金森病（Parkinson’s disease,PD）模型大鼠脑黑质内Lamp2a、Hsc70、α-syn表达的影响,探讨电针治疗帕金森病的可能作用机制。方法：雄性SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、电针治疗组,每组15只。采取颈背部皮下注射鱼藤酮法制备帕金森病模型,假手术组只注射不含鱼藤酮的等量葵花油乳化液。正常组、假手术组、模型组不进行任何治疗;电针治疗组在造模完成后取穴＂风府＂、＂太冲＂,连续波,频率120次/min,每次治疗20 min,每天1次,疗程为28 d。免疫组化法检测模型大鼠黑质内TH、α-syn的阳性表达,并用Western blot法检测模型大鼠黑质内Lamp2a、Hsc70、α-syn的表达。结果：模型组大鼠表现出明显的PD症候群特征,电针干预后模型大鼠行为学评分明显降低（P〈0.01）;免疫组化法及Westernblot检测显示电针治疗通过上调Lamp2A、Hsc70水平能抑制错误折叠蛋白α-syn的表达,提高TH的阳性表达。结论：电针可以抑制具有细胞毒性作用的α-syn的集聚,保护多巴胺能神经元,抑制帕金森病的发展,其机制可能与干预分子伴侣介导的自噬有关。