分子伴侣CsaA过表达及wprA蛋白酶的缺失对枯草芽孢杆菌分泌表达外源蛋白的影响

在枯草芽孢杆菌B.subtilis168菌株,以及在其改造菌株B.subtilis168wprA-和B.subtilis168/wprA::csaA中表达来自碱性芽孢杆菌C-125的碱性果胶酶和来自巨大芽孢杆菌的青霉素酰化酶。碱性果胶酶在B.subtilis中分泌表达时,敲除了wprA蛋白酶基因的B.subtilis168wprA-菌株相对于其野生型菌株B.subtilis168分泌表达的总的酶活力下降了36%,再次整合csaA进wprA位点后的B.subtilis168/wprA::csaA菌株,其表达量又恢复到相当于野生型菌株的表达水平。青霉素酰化酶在B.subtilis168wprA-菌株中的表达与野生型相比没有明显差异;而整合csaA分子伴侣进wprA位点后的菌株(B.subtilis168/wprA::csaA),相对于野生型其总的酶活力高出66%,说明分子伴侣CsaA数量的增加可以明显提高酶的表达量,并显示出普遍提高蛋白总活力的作用,而蛋白酶wprA基因的敲除,对某些蛋白的表达量能够产生明显的影响,在提高表达的稳定性方面表现出普遍的促进作用。本实验表达的青霉素酰化酶酶活力(14.7 U/mL)比工业应用中的酶活力(10 U/mL)高出了47%。