甘氨酸甜菜碱和分子伴侣dnaK在嗜盐四联球菌耐盐机制中的作用

能耐高盐的嗜盐四联球菌CICC 10469是从传统的酱料中分离得到。为研究耐盐特性与相容性溶质积累和分子伴侣dnaK特性的关系,使用核磁共振来检测其主要的相容性溶质。不同盐浓度对耐盐的嗜盐四联球菌和不耐盐的乳酸乳球菌MG1363的生长的影响通过测量OD600来获得。盐浓度对分子伴侣dnaK表达的影响通过实时荧光定量RT-PCR来检测。相容性溶质和可溶性蛋白随盐浓度的变化通过HPLC和酶标仪来检测。结果显示嗜盐四联球菌以甘氨酸甜菜碱作为主要的相容性溶质。适合的盐浓度能够促进菌体的生长,在一定盐浓度范围内,甘氨酸甜菜碱,可溶性蛋白和分子伴侣dnaK随盐浓度的增加而升高,然而超过一定盐浓度范围后,表达量将会减少。这表明细菌能够根据外部环境做出适当的调整以维持细胞的正常生理功能。而乳酸乳球菌MG1363很少有相容性溶质和分子伴侣dnaK以耐受外部盐浓度。这表明相容性溶质和分子伴侣dnak在嗜盐四联球菌生长中起重要的作用。总之,中度嗜盐菌的主要耐盐机制是通过快速合成和释放甘氨酸甜菜碱及分子伴侣dnaK高活性表达来完成。

鸭疫里默氏菌DnaK、OmpA和OmpA-DnaK蛋白的免疫原性

【背景】鸭疫里默氏菌(Riemerella anatipestifer,RA)可引起鸭等多种禽类败血症和浆膜炎,给禽养殖业造成严重经济损失。蛋白疫苗是预防RA感染的重要策略之一。目前,有关RA重组蛋白免疫原性报道较少,且其应用也受到单一蛋白抗原诱导的特异性免疫反应不足的限制。【目的】探究分子伴侣DnaK、外膜蛋白A(outer membrane protein A,OmpA)和OmpA-DnaK蛋白疫苗在鸭体内诱导的免疫应答,评估其免疫原性,为RA疫苗抗原研发提供依据。【方法】克隆DnaK和OmpA基因并分别与pET-32a(+)载体相连,利用限制性酶切位点Nco I和BamH I将OmpA连接至DnaK基因上游,经原核表达和纯化制得重组蛋白DnaK、OmpA和OmpA-DnaK。3种重组蛋白分别皮下免疫雏鸭2次,检测其血清抗体滴度、淋巴细胞增殖和细胞因子(IL-2和IL-4)水平;以RA-GH5肌肉注射攻毒,检查其组织病理学变化及免疫保护率。【结果】成功表达了DnaK、OmpA和OmpA-DnaK重组蛋白,分子量分别约为90、60和130 kDa。3种蛋白疫苗均能诱导宿主产生体液和细胞免疫应答,并且诱导的免疫保护反应减轻了RA引起的组织病理学损伤。与单独DnaK或OmpA免疫相比,OmpA-DnaK显著提高了血清抗体滴度、淋巴细胞增殖指数,以及IL-2和IL-4细胞因子水平。OmpA-DnaK对鸭的免疫保护率为50%,DnaK和OmpA均为30%。【结论】RA重组OmpA、DnaK和OmpA-DnaK蛋白疫苗均能诱导鸭免疫反应,并且DnaK与OmpA融合表达可引起更强的体液免疫和细胞免疫应答。