重组人源化单克隆抗体rhumAb1分子大小变异体的研究

利用分子排阻高效液相色谱（SEC-HPLC）、非还原毛细管电泳（CE-SDS）并结合液质联用（LC-MS）、抗体依赖细胞介导的细胞毒活性检测（ADCC）等技术对重组人源化单克隆抗体（rhumAb1）在高温（40℃）条件下产生的分子大小变异体进行研究。本研究鉴定了rhumAb1在SEC-HPLC分析中的4个分子大小变异体（SEC-1-SEC-4）和非还原CE-SDS中的7个主要变异体（NR-1-NR-7）的组成和结构。发现主要的低分子量变异体（片段）是由于重链的铰链区断裂所致,断裂位于铰链的Ser221-Cys-Asp-Lys-Thr-His-Thr-Cys228区域,其中C222-D223和H226-T227为主要断裂位点。ADCC活性检测表明,rhumAb1分子大小变异体（二聚体和片段）显著降低了产品的活性。该研究为rhumAb1产品的质量标准和相应的质控策略的制定奠定了基础,也为其他抗体药物的质量控制提供了参考。