膀胱癌分子标志物基质金属蛋白酶1的可溶性表达和尿液中的活性分析

通过分离人胚胎肾细胞(HEK293)中基质金属蛋白酶1(MMP1)基因序列,利用基因工程技术在大肠杆菌中表达并纯化了包涵体复性的MMP1;采用融合表达硫氧还蛋白(Thioredoxin,Trx A)的方法获得了可溶性的MMP1-Trx A复合蛋白,在Trx A蛋白和MMP1活性中心之间引入了一个肠激酶切割位点,通过酶切作用获得可溶性MMP1。明胶酶谱分析法对体外表达的MMP1和体内(尿液中)MMP1进行了分析比较。结果表明,Trx A蛋白能够显著提高MMP1的可溶性,且可溶性MMP1的明胶降解活性是复性的MMP1降解活性的1.54倍,与尿液中的MMP1的明胶酶降解活性相当。因此,明胶酶谱法是一种有效的、高灵敏的MMP1检测方法,所表达的可溶性MMP1为小分子探针筛选提供了更可靠的分子靶点。