海洋亚历山大藻属种间界定的分子标准

通过计算机联网从Ｇｅｎｂａｎｋ中及实验分析获取亚历山大藻属Ａｌｅｘａｎｄｒｉｕｍ共５种１２个株系的ｒＤＮＡＩＴＳ序列，并采用计算机分析软件包对其进行分析及构建树图结果表明，亚历山大藻属不同种，种间序列有显著差异（核苷酸差异大于０２０），而种内个体间ＩＴＳ区序列则非常相似（仅００１差异），表明了ＩＴＳ区用于该属的分类鉴定是一个较稳定的指标．根据序列比较结果，得出：①形态非常相似的Ａｃａｔｅｎｅｌａ，Ａｔａｍａｒｅｎｓｅ有毒种类，分子水平有明显差异，不同意将这两个种称为“ｔａｍａｒｅｎｓｅｃｏｍｐｌｅｘ”；②根据种间序列核苷酸的差异系数，提出了该属种间界定的分子标准，同时对形态学鉴定的某些株系，如ＡｔａｍａｒｅｎｓｅＣＵ１５等提出了异议．可以看出，ＩＴＳ区的研究从一个新的角度为海洋微藻种的界定提供了很好的依据．

检验检疫生物安全分子标准样品的研制与应用

伴随着国际贸易的迅猛发展,传染性和检疫性有害生物给世界各国的生物安全带来极大威胁。本文从检验检疫生物安全分子标准样品的主要类别和种类,生物安全管理要求与工作需求,分子标准样品的关键制备技术问题,我国分子标准样品研发状况,以及应用领域和应用前景等几个方面进行综述。

转基因油菜T45质粒分子标准物质协同实验研究

对转基因油菜T45荧光定量PCR方法的关键参数进行了方法验证，结果表明该方法适合于标准物质协同实验。选择6家实验室采用经过验证的方法对转基因油菜T45质粒分子标准物质进行了协同实验研究。通过比较分析转基因油菜T45基因DNA与质粒分子DNA两者产生的标准曲线的斜率（扩增效率）、线性拟合度和截距，发现转基因油菜T45基因组DNA与质粒分子DNA具有相似的扩增效率和线性相关系数。经统计学分析各参与实验室的数据等精度，转基因油菜T45质粒分子标准物质的标准值和扩展不确定度为0．98±0．02（％=2）。

谈系统发生树建立的分子标准

随着进化生物学以及生物信息学的发展 ,研究不同物种间进化关系的方法也有了新的进展。其中分子进化方法使得系统发生树的建立更加简便和精确。几种系统发生树的建树方法及相关分子标准目前比较流行。。

论中医证的化学本质是蛋白质和肽及证本质的分子标准

用现代医学理论阐明中医证的本质是实现中西医两种医学理论结合的基础,是实现中医药现代化的关键。为阐明证的本质,40年来我国对各种可能是证本质的物质进行了较为全面的探索,如激素、酶、环-磷酸腺苷(ｃＡＭＰ)、环-磷酸鸟苷(ｃＧＭＰ)、三磷酸腺苷(ＡＴＰ)、微量元素和?..

转基因番木瓜pUC57-Papaya质粒标准分子的构建与适用性研究

构建了含番木瓜2个内标准基因、4个筛选靶标及3个转化体特异性片段的质粒分子pUC57-Papaya,进行了适用性验证实验。应用普通PCR和实时荧光定量PCR对其进行互换性评估;使用质粒分子对2个样品进行转基因含量测定。结果显示:质粒分子全部9个目的片段按照设计排列,序列完全一致;全部9个基因片段普通PCR和实时荧光PCR方法均能正确扩增得到预期结果,特异性、灵敏度与基因组DNA一致;全部9个基因构建标准曲线做定量测试时,与基因组DNA标准曲线斜率无显著差异,线性相关系数均大于0.99,其中内标准基因Papain、NOS终止子、YK1601与55-1事件特异性片段的截距无差异;利用质粒分子测量2个样品的Papain、NOS终止子、YK1601与55-1事件特异性片段拷贝数,计算转基因含量,结果与基因组DNA一致;测序结果显示各片段拷贝数比值为1,质粒DNA拷贝数浓度为(2.54±0.10)×10^(6)copies/μL。构建的标准质粒分子可代替基因组DNA用于定量检测,也可作为转基因番木瓜定性和定量检测用标准物质。

转基因抗虫作物鉴定质粒标准分子的构建与应用

苏云金芽胞杆菌基因是转基因抗虫作物中通用的外源功能基因,在绝大多数抗虫转基因作物中均有存在,然而Bt基因检测标准样品的缺乏却限制了我国转Bt基因抗虫作物检测工作的发展。为了弥补传统基体标准样品的缺失,首先将Cry1Ab、Cry1Ac、Cry3A 3种常用Bt外源基因克隆到pUC57质粒上,通过测序、酶切和qPCR等技术对质粒的序列和扩增功能进行了验证,然后对扩增效率和实际应用情况加以测试,评价其转基因检测的适用性,构建了质粒标准分子。结果显示,制备的质粒标准分子测序结果与靶标序列完全符合,酶切结果、qPCR扩增结果和扩增效率等均符合预期,在Cry1Ab、Cry1Ac、Cry3A基因特异性检测中的应用符合阳性对照要求,表明制备的阳性质粒标准分子能够作为转Cry1Ab、Cry1Ac、Cry3A基因qPCR基因特异性检测的阳性标准样品。

中国特有植物大血藤的RAPD分析──植物地带性分化的分子差异标准初探

采用随机扩增多态性ＤＮＡ技术对中国特有科特有属植物大血藤（Ｓａｒｇｅｎｔｏｄｏｘａｃｕｎｅａｔａ）进行分析，探讨植物地带性分化的分子差异．从１００个随机引物中筛选出１１个有效的１０碱基对寡聚核糖核苷酸作引物，用于对取自５省区的大血藤植物基因组ＤＮＡ进行ＰＣＲ扩增；用ＵＰＧＭＡ法对各居群间的Ｊａｃａｒｄ相似性系数和遗传距离进行聚类分析．ＲＡＰＤ分析结果表明：分布于各省区（地区）的大血藤居群，尽管其形态特征的变异尺度较为一致，但在分子水平上存在明显差异，这种差异与地理范围的变化相关，表现出一定的地带性分化规律．

应用于FTIR气体监测的HITRAN数据库分子标准吸收截面计算方法研究

根据HITRAN数据库中分子吸收谱线的积分线强和一些谱线相关参数(中心位置、压力展宽半宽度、温度依赖系数等),研究了应用于FTIR气体监测的HITRAN数据库分子标准吸收截面计算方法.主要包括线强温度修正.谱线展宽,谱线卷积。逐线积分和数值算法。以甲烷为例给出采用矩形(Boxcar)和三角(Triangular)两种截断函数得到的1cm^(-1)分辨率下甲烷分子标准吸收截面数据。

一种新型可用于DNA分子量标准的质粒构建

将首尾带有EcoRI酶切位点的 2 .0kb、1.5kb、1.0kb、0 .75kb、0 .5kb、0 .2 5kb六个长度的片段逐步连接到pGEM - 3zf(+)质粒上的BamHI位点中 ,构建的质粒用EcoRI进行单酶切 ,经电泳可以获得七条DNA带与设计结果完全一致 ,可用于DNA电泳试验中分子量标准。

利用PCR技术快速制备DNA分子量标准物

目的:制备一套DNA分子量标准物。方法:利用多聚酶链式反应技术(PCR),以连接有9个不同大小DNA片段的pMD18-T载体为模板,M13引物为通用引物,进行大规模扩增,并进行2%琼脂糖凝胶电泳分析和利用TanonGIS凝胶图像处理系统对凝胶扫描及拍照。结果:DNA分子量条带大小依次为1653bp、1173bp、691bp、606bp、496bp、401bp、326bp、238bp、155bp,条带分布适度、亮度清晰。结论:制备了能满足研究和实验室的要求DNA分子量标准物,和市售的相比,成本大大降低。

四种转基因玉米新型质粒标准分子协同实验验证

构建了分别适于转基因玉米GA21、TC1507、T25和Bt11品系特异性双重PCR检测标准分子,并对其在定性PCR检测体系中的适用性进行了实验室间协同实验验证。对7家实验室返回结果的统计分析表明,标准分子pBt11、pTC、pT25和pGA分别对转基因玉米Bt11、TC1507、T25和GA21品系具有高特异性。4个标准分子在zSSⅡb和对应品系特异性序列单一PCR检测体系中检测下限均为50拷贝。因此,4个标准分子均可作为新型标准物质用于相应转基因玉米品系特异性定性检测。

转基因大豆、玉米和水稻外源基因检测通用标准分子的构建

将转基因大豆、玉米和水稻的主要外源Cry1A(B)基因、BAR基因、CP4-EPSPS基因、PAT基因和内参RBCL基因目标片段分别克隆到克隆载体pMD18-T中,构建获得的质粒可作为定性检测3种转基因粮食作物的上述外源基因的通用标准分子质粒pMD18-T-PAT-CP4-EPSPS-Cry1 A(B)-BAR-RBCL,长约4.7 kb。经过双酶切、测序及PCR扩增,获得与预期片断大小及序列一致的目的基因片段,证明所构建的标准分子质粒是正确的,可以用来作为不同品种转基因粮食作物定性检测CP4-EPSPS基因、Cry1 A(B)基因、BAR基因和PAT基因的通用阳性标准分子。

葡聚糖分子量标准物质的研制

葡聚糖分子量标准物质广泛用于医药、食品、食品添加剂等领域。在建立了激光光散射定值分析方法基础上,研制了3种葡聚糖分子量标准物质。采用激光光散射法定值得到3种葡聚糖分子量标准物质的重均分子量分别为4.32×103、1.26×104、6.06×104,它们定值结果的不确定度均小于8%;用凝胶色谱法和激光光散射法检测的结果表明,其均匀性、稳定性良好。

转基因大豆、玉米、油菜和水稻品系特异性检测质粒标准分子的快速构建及应用

本文采用重叠延伸PCR技术快速构建了转基因大豆GTS40-3-2、玉米NK603、油菜RT73和水稻TT51-1的4种品系作物的质粒标准分子.经快速PCR鉴定及测序分析验证后,将构建的阳性质粒标准分子应用于实时荧光定量PCR标准曲线的构建,并建立其相应的荧光定量PCR检测体系,同时对该体系的扩增效率、精确度、灵敏度等指标进行了评估.结果显示,建立的实时荧光定量PCR检测体系中,目标序列的扩增效率均在97.434%～101.479%正常范围内(R2≥0.995),定量极限为20 copies,表明我们已成功构建了这4种转基因作物的品系质粒标准分子,并能有效应用于实时荧光定量PCR标准曲线的构建.

转基因玉米pUC57-BT11质粒标准分子的构建与适用性研究

构建了含有转化体特异性片段（BT11-93bp）和玉米的内标准基因片段（zSSIIb-151bp）的质粒分子pUC57-BT11，经酶切和测序验证后，对其特异性进行检查。采用测序和荧光定量PCR法对该质粒分子进行定值，结果为1．01±0．叭（k=2）。通过质粒分子和基因组DNA产生的内源和外源基因比较，发现两者标准曲线斜率无显著差异，线性相关系数均〉10．99。利用pUC57-BT11质粒分子对已知含量的转基因基体标准物质进行转基因含量测定，结果发现采用pUC57．BT11质粒分子对标准物质的测定结果与其标准值-致，表明pUC57-BT11质粒分子可作为转基因玉米BT11转化体特异性的定性和定量检测用标准物质。

转基因大豆MON89788检测质粒标准分子的构建与应用

[目的]构建适用于转基因大豆MON89788检测的质粒标准分子。[方法]利用定性PCR和连接、转化等分子克隆技术,将大豆内标准基因lectin、MON89788的3′端特异性序列和5′端特异性序列依次克隆到pMD18-T载体上,获得质粒标准分子pMD-LM3M5,并进行适用性验证。[结果]获得了3700bp的质粒标准分子,其中重组DNA片段1029bp。该质粒标准分子的定性PCR检测灵敏度达到10copy。[结论]该研究构建的质粒标准分子pMD-LM3M5能替代MON89788基体标准品,用于MON89788大豆及其产品的定性PCR检测。

标准分子构建及其在转基因玉米59122定量检测中的应用

根据转基因作物59122的外源基因与玉米基因组之间的左侧侧翼序列设计具品系特异性的荧光探针及引物,以实时荧光PCR技术建立59122的品系特定量检测方法,以重组PCR技术成功获得了标准分子（整合了内标基因序列与左侧翼序列）梯度范围为10^1～10^5,定量范围为0.01%～100%;建立了玉米内源基因与侧翼序列的标准曲线,变异系数CV值、标准偏差SD以及相关系数R2均可接受;检测5个已知转基因含量（0.1%、0.5%、1%、2%、5%）的混合样品中的转基因含量,结果分别为0.12%、0.56%、1.04%、1.61%、4.66%,实验误差小于25%,结果可信。

用于检测转基因作物中调控元件的质粒标准分子的构建

为解决转基因农产品检测中阳性标准物质匮乏的问题,利用重叠PCR技术将检测过程中常用的调控元件Ca MV35S启动子、FMV35S启动子、PAT29启动子、Ubiquitin启动子、NOS启动子、35S终止子、NOS终止子和E9终止子依次连接获得融合片段,再利用分子克隆技术将融合片段转化到载体p MD-19T中,获得含有调控元件的标准质粒p MD-RG。PCR和测序结果验证了标准分子构建的正确性,并且标准质粒的均匀性和稳定性比较好,符合标准物质候选物的要求,可代替阳性标准物质用于转基因成分的检测和研究。该质粒可用于大多数已经批准的转基因作物的检测和监管工作中。

转基因水稻华恢1号检测用质粒标准分子研制

质粒标准分子作为阳性标准品已广泛用于转基因作物及产品的核酸定量检测。但是目前多数质粒标准分子只用于研究,未能成为国家级标准物质。因此,按照国家一级标准物质技术规范,研制了用于检测转基因水稻华恢1号的质粒标准分子,内容包括质粒分子的构建、纯度分析、特异性检测、可替代性研究、均匀性检验、稳定性考察、定值与不确定度评估。结果表明,该质粒分子标准物质半年内稳定,可替代基因组作为华恢1号定量的阳性标准。