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EIAV标记感染性克隆分子的构建
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作者 温建新 童光志 +2 位作者 王金宝 仇华吉 涂亚斌 《莱阳农学院学报》 2005年第4期250-255,258,共7页
应用已构建好的EIAV驴白细胞弱毒疫苗株的感染性分子克隆载体(pOK8266)为模板,通过SOE PCR方法在感染性分子克隆载体的S2基因独特区内引入突变点,形成含有酶切位点(NspV)的突变体(P1P4)。将突变体(P1P4)亚克隆至pB luescript SK(M13-)质... 应用已构建好的EIAV驴白细胞弱毒疫苗株的感染性分子克隆载体(pOK8266)为模板,通过SOE PCR方法在感染性分子克隆载体的S2基因独特区内引入突变点,形成含有酶切位点(NspV)的突变体(P1P4)。将突变体(P1P4)亚克隆至pB luescript SK(M13-)质粒,形成pB-P1P4中间载体;人工合成两条6个组氨酸的引物,作为标签,将其插入pB-P1P4中间载体的NspV位点,形成带标签的中间载体;用ApaI酶切pOK8266和中间载体,连接转化,构建带标签的重组感染性分子病毒克隆载体(EIAV-p8.2-H IS),经PCR、酶切和测序表明,6个组氨酸已插入pOK8266的S2基因内。分别转染驴皮肤细胞(FDD)和驴白细胞,将转染驴皮肤细胞收获物传至第六代,电镜下未观察到EIAV病毒;而将转染驴白细胞收获物传代至第6代时,电镜下观察到了典型的病毒粒子。提取前病毒DNA,PCR扩增P1P4片段,亚克隆至pMD18-T载体,测序证明前病毒DNA含有6个组氨酸,从而在体外获得了感染性克隆病毒株。本研究通过SOE法巧妙地对S2基因引入突变,插入H IS标签,成功地获得了标记感染性分子克隆,证明S2基因缺失突变株在体外巨嗜细胞上培养不影响其复制力,为野毒株和疫苗毒的鉴别诊断打下基础。 展开更多
关键词 马传染性贫血病毒(EIAV) S2基因 标记感染性分子克隆
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小麦基因组AFLP反应体系的建立 被引量:11
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作者 贾璇 杨文香 刘大群 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期55-59,共5页
利用小麦抗叶锈近等基因系研究了小麦基因组AFLP反应体系,建立了适于小麦基因组的AFLP反应体系:40μL酶切体系中采用7.5UPstⅠ和5UMseⅠ37℃3h,65℃3h双酶切0.1~0.2μgDNA,然后加入10μL接头、T4连接酶混合液,16℃连接过夜;吸取未稀释... 利用小麦抗叶锈近等基因系研究了小麦基因组AFLP反应体系,建立了适于小麦基因组的AFLP反应体系:40μL酶切体系中采用7.5UPstⅠ和5UMseⅠ37℃3h,65℃3h双酶切0.1~0.2μgDNA,然后加入10μL接头、T4连接酶混合液,16℃连接过夜;吸取未稀释的酶切连接液4μL,加入75ng预扩增引物,10mmol/LdNTP,1.5UTaq酶,1×buffer,加PCR水至40μL进行预扩,将预扩产物稀释20倍,吸取5μL,加入40ng选择性引物,1.25UTaq酶,7.5mmol/LdNTP,2%去离子甲酰胺,1×buffer,加PCR水至25μL进行选择性扩增。本研究为小麦抗叶锈基因的分子标记克隆及抗病育种的辅助选择提供有力的工具。 展开更多
关键词 小麦 基因组 AFLP反应体系 抗叶锈近等基因系 分子标记克隆 抗病育种 辅助选择
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Screening and Cloning of RAPD Marker of Fluoride Tolerance Gene in Silkworm,Bombyx mori 被引量:4
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作者 徐庆刚 陈克平 +1 位作者 姚勤 刘晓勇 《Zoological Research》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期69-72,共4页
In this study,silkworm strain T6,tolerant to fluoride,and silkworm strain 733xin,highly sensitive to fluoride,were used to construct the near-isogenic lines.300 random primers were used in RAPD amplification to DNAs o... In this study,silkworm strain T6,tolerant to fluoride,and silkworm strain 733xin,highly sensitive to fluoride,were used to construct the near-isogenic lines.300 random primers were used in RAPD amplification to DNAs of these lines.A molecular marker named S207 was found linked to the fluoride tolerance gene.Examination to F 2 segregated individuals of the above lines verified that this molecular marker was reliable.Subsequently,the molecular marker was cloned into a T vector (pUCm-T) for sequencing.Comparing with sequences available in the GenBank showed that this molecular marker was novel.We plan to convert it into a SCAR marker to facilitate establishment of a molecular marker assisted breeding system. 展开更多
关键词 Bombyx mori Near-isogenic lines Fluoride tolerance RAPD marker
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Fine Mapping of AST Gene in Arabidopsis 被引量:1
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作者 毛爱军 王台 宋艳茹 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 2003年第1期88-92,共5页
The ast ( anthocyanin spotted testa) mutant, which was induced by carbon ion radiation, was a single recessive gene mutant of Arabidopsis thaliana (L.) Heynh. with spotted pigment in seed coats, and involved in the an... The ast ( anthocyanin spotted testa) mutant, which was induced by carbon ion radiation, was a single recessive gene mutant of Arabidopsis thaliana (L.) Heynh. with spotted pigment in seed coats, and involved in the anthocyanin biosynthesis. To clone the AST gene by map-based cloning strategy, a series of molecular markers were designed according to the SNPs (single nucleotide polymophisms) and insertion/deletion polymophisms in the Arabidopsis database. With these molecular markers, the fine-structure mapping of the AST gene was finished, the AST locus was located in BAC clone T13M11. It was suggested that the AST candidate gene was T13M11. 8 in the T13M11 This gene was 1432 bp long with 6 exons and 5 introns. The putative protein of T13M11. 8 gene was similar to dihydroflavonol 4-reductase (DFR), which was an important enzyme in the anthocyanin biosynthesis pathway. 展开更多
关键词 ast mutant AST gene molecular marker fine mapping map-based cloning ARABIDOPSIS
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甜瓜基因组学研究进展 被引量:9
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作者 苏芳 郭绍贵 +2 位作者 宫国义 张海英 许勇 《分子植物育种》 CAS CSCD 2007年第4期540-547,共8页
甜瓜是一种世界性的园艺作物。随着现代生物技术的迅速发展,甜瓜基因组学研究越来越深入,国际葫芦科基因组计划也已经筹备完成即将启动。目前已构建有14张甜瓜遗传图谱,多个重要性状的分子标记及数量性状位点已找到并定位在图中,并开始... 甜瓜是一种世界性的园艺作物。随着现代生物技术的迅速发展,甜瓜基因组学研究越来越深入,国际葫芦科基因组计划也已经筹备完成即将启动。目前已构建有14张甜瓜遗传图谱,多个重要性状的分子标记及数量性状位点已找到并定位在图中,并开始在葫芦科作物之间进行比较基因组图谱方面的研究。已克隆出枯萎病抗性基因Fom-2,其它农艺性状基因的克隆工作也在陆续开展。本文在甜瓜遗传连锁图谱的构建、重要性状分子标记及QTL定位、比较基因组学及基因克隆等方面分别对其研究进展进行了探讨,以期为我国的甜瓜基因组学研究提供有益的参考。 展开更多
关键词 甜瓜(Cucumis melo L.) 国际葫芦科基因组计划 遗传图谱 分子标记 QTL定位 基因克隆
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