量子点标记分子探针成像技术对乳腺癌CC类趋化因子5和基质金属蛋白酶-9的定量检测及临床意义

目的 探讨CC类趋化因子5（CCL5）和基质金属蛋白酶（MMP）-9量子点定量信息对预测乳腺癌预后的价值.方法 利用量子点标记分子探针成像技术检测214例浸润性乳腺癌患者CCL5和MMP-9的表达,获得量子点评分（QDS）,分析定量参数与3年预后的关系.结果 淋巴结阴性、阳性组CCL5 QDS为36.952±3.070、74.822±3.582,Lunminal A、Lunminal B、人类表皮生长因子受体（HER）-2阳性、三阴性组CCL5 QDS为39.134±3.709、70.911±4.984、59.260±5.785、61.316±9.212,CCL5表达差异有统计学意义（P＜0.01）;淋巴结阴性、阳性组MMP-9 QDS为18.912±1.356、39.459±2.083,MMP-9表达差异有统计学意义（P＜0.01）;CCL5 QDS与3年无病生存（3-DFS）呈负相关（r=-0.329,P＜0.01）,MMP-9 QDS与3-DFS呈负相关（r=-0.346,P＜0.01）;MMP-9是乳腺癌的独立预后因素[P＜0.01,曲线下面积（AUC） [95％可信区间（CI）：3.489（1.736 ～7.011）].结论 量子点标记分子探针技术能简便准确地获取乳腺癌中CCL5和MMP-9定量信息,提示乳腺癌在CCL5和MMP-9表达上的异质性.

临床高毒力致泻性沙门氏菌快速检测方法的初步建立

目的沙门氏菌是一种常见的食源性致病菌,对公众的生命健康和财产安全造成重大危害。基于此,我们拟建立并验证一种基于多重PCR结合分子标记探针的检测方法用于快速筛查临床高毒力致泻性沙门氏菌,旨在指导临床快速甄别由高毒力沙门氏菌引起的感染,及时采取治疗措施,降低患者负担。方法对沙门氏菌基因组生物信息学分析后选择沙门氏菌中高保守的invA、常见毒力因子pagC基因及肠毒素编码基因stn作为检测靶点,每个靶点分别设计3套备选引物和探针,进行梯度PCR筛选得到扩增效率最佳的引物对和探针(invAF、invAR、invAP,pagCF、pagCR、pagCP,stnF、stnR、stnP)。收集40株分离自临床患者标本的沙门氏菌进行灵敏度分析,选择沙门氏菌、大肠埃希菌、阴沟肠杆菌、铜绿假单胞菌、产期肠杆菌、无乳链球菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、变形杆菌、鲍曼不动杆菌、粘质沙雷菌、嗜麦芽窄食单胞菌共12种临床常见细菌用于特异性验证。采用磁珠法抽提基因组DNA,将浓度稀释至10-2μg/ml用于特异性验证,将沙门氏菌基因组DNA进行倍比稀释,用于灵敏度验证。结果经验证,invA、pagC、stn作为多重PCR的3个检测靶标具有良好的检测性能,其中以invA为沙门氏菌菌种鉴定靶标其检测限可达为1×10^(-6)μg/ml(目标DNA浓度),特异性100%,以pagC、stn为区分高毒力沙门氏菌鉴定靶标其检测限分别可达为1×10^(-7)μg/ml、1×10^(-8)μg/ml(目标DNA浓度)。三个检测靶标分别标记不同检测波长的激发荧光基团,相互间无明显干扰。结论本研究建立的一种新的沙门氏菌检测方法具有较高灵敏度和特异性,能够快速准确鉴定患者是否存在致泻性沙门氏菌感染,为临床快速诊断沙门氏菌感染提供一种更加高效便捷的手段,该方法也可以对所感染沙门氏菌的毒力大小进行判断评估,为临床治疗方案的制定提供新的支撑。

无标记小分子探针技术与中药靶点发现

靶点的确定是阐明中药作用机制的核心,是构建化学成分与药效作用相关性的关键。鉴于中药的多样性、化学成分的复杂性,传统的靶点筛选方法有所局限,靶点发现已成为中药机制研究的瓶颈。无标记小分子探针技术是化学蛋白组学领域的新兴技术,其突出特点为无需对小分子成分进行结构修饰与改造,普适于复杂的中药化学成分,同时该方法基于蛋白质组进行靶点筛选,利于发现中药作用的新靶点、新途径。鉴于该方法在中药研究中的应用潜力,该文综述了其分析原理与应用现状,总结了其一般性分析步骤,以促进该方法在中药化学成分靶点阐明中的应用。

放射性药物FAK抑制剂靶向肿瘤侵袭力的作用研究

[目的]化学合成、放射性核素标记局部黏着斑激酶(FAK)抑制剂,评价新型放射性药物FAK抑制剂对恶性肿瘤组织侵袭力靶向示踪及治疗的潜在应用价值。[方法]以恶性肿瘤组织高表达FAK为靶点,利用计算机辅助药物设计方法的优势,经计算机模拟设计、化学合成新型FAK小分子抑制剂化合物,通过药物有效性筛选后,选择与FAK受体特异性结合,明显抑制肿瘤细胞增殖、侵袭能力的FAK抑制剂化合物,研究放射性核素碘标记方法,评价核素标记FAK小分子抑制剂的理化性质及体内外稳定性。[结果]对97个FAK抑制剂分子进行了3D-QSAR计算,得到FAK抑制剂的有效骨架结构,在此基础上进行不同结构修饰,设计并合成17个新型FAK小分子化合物。细胞活力实验检测发现FAK小分子抑制剂及其稳定碘标志物对恶性肿瘤细胞的毒性作用存在明显的差异。其中,对与恶性肿瘤细胞特异性结合的化合物3进行放射性核素125I标记,标记率达49%以上。应用HPLC对放射性核素标记化合物进行放化纯分析及稳定性研究发现125I标记化合物3在体外能够稳定存在。[结论 ]新型放射性药物FAK抑制剂靶向结合FAK位点,对多种恶性度较高,侵袭、转移能力较强的肿瘤靶向示踪和放射性核素靶向治疗具有潜在应用价值。