基于主成分与分子标记鉴定的樱桃番茄新组合综合评价

以28份樱桃番茄组合为试材,通过对15个果实数量性状的主成分分析及对其抗病性的分子标记鉴定进行综合评价,以期为樱桃番茄新品种的选育提供理论参考。结果表明,28份樱桃番茄杂交组合之间均存在明显的遗传差异;通过主成分分析,以方差贡献率大于79%为标准,提取5个主成分累计方差贡献率达79.64%,对主成分因子进行未旋转因子得分,计算各樱桃番茄的综合得分并对其进行排序,以综合得分大于0.9为标准,有A6、A1、A8、A28、A7综合得分位居前5,且通过抗病性分子标记鉴定表明这5个组合均含有10个抗病位点基因,因此这5个组合的综合品质和抗病性均表现较好,适合进一步试种推广。

新颖栽培丹参材料的rDNA内外转录间隔区(ITS和ETS)分子标记鉴定

本研究对前期发现的2个新颖多年生大紫花单株(V-HNYZ-bV-1和W-SXXA-bV-1)和1个二年生白花丹参(Salvia miltiorrhiza)栽培居群(W-SCHY-W-1)材料,进行了基于其rDNA内、外转录间隔区(ITS和ETS)的分子标记鉴定。结果表明:W-SXXA-bV-1和V-HNYZ-bV-1的ITS的GC含量均较高,W-SCHY-W-1的ITS和ETS的GC含量最低;新颖材料W-SXXA-bV-1和V-HNYZ-bV-1的ITS序列变异率较高,均高于W-SCHY-W-1,而对于ETS序列,W-SXXA-bV-1和V-HNYZ-bV-1接近(7.1%~6.5%),但低于W-SCHY-W-1(8.2%);W-SXXA-bV-1与V-HNYZ-bV-1亲缘关系较近,W-SXXA-bV-1、V-HNYZ-bV-1和W-SCHY-W-1均与Q-DZH-V-4亲缘关系较远,V-HNYZ-V-1与Q-DZH-V-4亲缘关系很近。上述结果与栽培形态观察结果都高度一致表明:W-SXXA-V-1和V-HNYZ-V-1是康定或甘西鼠尾草,新颖单株材料W-SXXA-bV-1可能为W-SXXA-V-1的突变体,V-HNYZ-V-1和Q-DZH-V-4同为荔枝草,V-HNYZ-bV-1可能为混杂在V-HNYZ-V-1中的康定或西藏鼠尾草,与W-SXXA-bV-1非常相似。W-SCHY-W-1为粘毛鼠尾草。

基于EST-SSR标记的金线莲叶色突变体分子身份分析

【目的】为金线莲(Anoectochilus roxburghii)从DNA分子水平上探索叶色突变体的遗传差异。【方法】采用EST-SSR分子标记技术对金线莲及其2个叶色突变体进行分子鉴定。【结果】20对SSR引物共扩增出78条谱带,其中3对引物(JXL-6、JXL-14和JXL-16)能稳定扩增出差异条带,多态性条带9条,多态性比率11.54%。【结论】获得的2个叶色突变体为金线莲突变体,叶色突变体与亲本在DNA分子水平差异较小。

皮球桃黄肉芽变的ISSR和SRAP分子标记鉴定

本研究采用ISSR和SRAP两种分子标记方法对皮球桃(Prunus persica)及其黄肉芽变进行分子鉴定,从DNA水平揭示两者的遗传差异。结果显示,39条ISSR引物共扩增出176个位点,多态性比率为9.7%,遗传系数为0.95;224对SRAP引物组合共扩增出444个位点,多态性比率为5.0%,遗传系数为0.97,表明两者的亲缘关系非常相近,遗传背景基本一致。经过反复筛选与多轮PCR鉴定,引物UBC827、UBC848、组合Me4-Em1在皮球桃与黄肉突变体的基因组中稳定扩增出差异条带,说明两者在DNA分子水平确实存在较小程度的差异,遗传物质发生了微小的变异,证明该黄肉突变体桃的确为皮球桃的芽变。

大豆耐盐性种质的分子标记辅助鉴定及其利用研究

大豆耐盐种质的鉴定对于促进大豆耐盐育种具有重要作用。本文利用已获得的大豆耐盐性基因的共显性PCR标记 ,对选自于国家作物种质库的 5 9份耐盐和盐敏感种质加以鉴定 ,同时进行了田间耐盐性重复鉴定 ,并对种质库耐盐性记载结果、田间耐盐性重复鉴定结果与分子标记鉴定结果进行比较 ,从中选出田间耐盐性重复鉴定结果与分子标记鉴定结果一致的耐盐种质 4 2份 ,分析了这些种质间的遗传多样性 ,为大豆种质资源的改良及耐盐遗传育种中的亲本选配提供了理论依据 ,同时对分子标记应用于种质鉴定和育种实践进行了有益的尝试。

中华鳖与砂鳖线粒体DNA 12S rRNA基因序列的比较分析和分子鉴定标记

对中华鳖和砂鳖线粒体DNA12SrRNA基因进行了引物设计、PCR扩增、序列测定和PCRRFLP分析。研究结果表明:中华鳖、砂鳖线粒体DNA12SrRNA基因片段的碱基序列长度相同,均为562bp,其A、T、C、G含量相似,分别为209个(37.2%)、121个(21.5%)、145个(25.8%)、87个(15.5%)和207个(36.8%)、120个(21.4%)、145个(25.8%)、90个(16%)。两序列间共有13处碱基不同,序列差异率为2.31%,中华鳖与砂鳖各自个体间的平均核苷酸序列差异率分别为0.53%和0.36%,种间差异显著;用内切酶MspI酶切两种鳖的12SrRNA基因片段,在砂鳖中可得到大小为519bp和43bp两个片段,而中华鳖无此酶切位点,这可作为准确鉴别中华鳖和砂鳖的分子鉴定标记。从两种鳖线粒体DNA12SrRNA基因片段碱基的显著差异和MspI酶切位点的变化,可以进一步证明砂鳖是不同于中华鳖的鳖属一新种。

RAPD技术筛选麦冬分子鉴定标记的研究

应用RAPD技术筛选三种药用麦冬品种湖北麦冬,川麦冬和浙麦冬的分子鉴定标记,为构建麦冬特异性PCR鉴定方法奠定基础.对RAPD反应的关键影响因子进行优化,确立最佳反应条件.以麦冬嫩叶中提取的基因组DNA作为RAPD反应模板,逐一使用40条随机引物对三种麦冬基因组DNA进行RAPD分析,从引物S86,S65,S64,S22和S20结合下的RAPD图谱中找到了8条麦冬分子鉴定标记,其中湖北麦冬分子鉴定标记4条,川麦冬和浙麦冬各2条.这些分子鉴定标记在琼脂糖凝胶中的分子量介于500～2 000 bp之间,条带明亮清晰,可供回收进行序列分析,以便设计出特异性PCR引物,实现三种麦冬特异性PCR鉴定的目标。

中国大陆绒螯蟹线粒体16S rDNA序列变异与分子鉴定标记

选取了中国大陆东部6个水系合计110个绒螯蟹个体,通过DNA序列测定和PCR/RFLP分析,对线粒体16S rDNA部分片段的序列变异进行研究.结果表明,在401 bp的16S rDNA片段中,合浦绒螯蟹(Eriocheir japonica hepuensis)与中华绒螯蟹(E.j.sinensis)之间存在3～4个固定的碱基替代;合浦绒螯蟹的闽江、九龙江和南流江种群之间未发现碱基变异,表现为1种单元型(C型);中华绒螯蟹长江和辽河的种群中,有1个固定的碱基替代,表现为A,B两种单元型.单元型之间的碱基变异反映了绒螯蟹地理种群之间的遗传歧异.经DraⅠ酶切形成的16S rDNA酶切片段差异,为2个亚种的鉴定提供了一种准确、简捷的DNA分子标记.对长江水系部分水域绒螯蟹的分子鉴定提示,长江下游至长江口以中华绒螯蟹的2个单元型为主,但已混有合浦绒螯蟹的单元型.在江苏、安徽渔场中的饲养种群分别属于单元型A型和B型.16S rDNA的PCR/RFLP差异可作为正确鉴定中华绒螯蟹和合浦绒螯蟹的分子鉴定标记;16S rDNA片段中1个固定位点的碱基替代可作为区分中华绒螯蟹两种单元型的分子鉴定标记.

松材线虫RAPD-PCR反应体系的优化与分子鉴定标记的筛选

应用随机引物S344、S356和S360比较分析了PCR热循环复性温度、Mg^2＋浓度和模板浓度对松材线虫基因组DNA的RAPD扩增结果的影响，旨在建立松材线虫的最佳反应体系，并以此进行松材线虫的分子鉴定标记筛选。结果表明：37℃的复性温度、3．0mmol·L^-1Mg^2＋、10μL反应体系中松材线虫基因组DNA模板1～25ng是研究松材线虫RAPD特征的最佳反应体系。利用此反应体系，通过对100个随机引物的分析，获得了3条松材线虫区别于拟松材线虫的分子鉴定标记。

中药白芍亲缘性分析及分子鉴定标记的筛选

提取4种白芍的DNA基因组,筛选26条随机引物对浙白芍、亳白芍、山白芍和川白芍进行PCR扩增,共扩增出385条带,多态百分率为89%.聚类分析得到山白芍与亳白芍遗传相似性系数最高(为0.723 7),而与浙白芍的遗传相似性系数最低(为0.520 2).其中引物S17,S7,S61,S98筛选到浙江白芍、安徽白芍和山东白芍的分子鉴定标记.实验筛选获得的分子鉴定标记经克隆和测序后,可为白芍的特异性PCR鉴定的引物设计打下基础,也为其他中药材品种的分子水平的鉴定研究提供参考.

一个灵芝新品种的选育与分子鉴定

以国家认定品种“泰山赤灵芝1号(TL-1)”和野生灵芝菌株“4895”为亲本,通过原生质体单核化杂交育种技术选育出集亲本优势于一体的灵芝新品种“TL-3”,与TL-1相比,其在子实体形态特征、产量、生物学效率、子实体有效成分含量方面具有更大的优势。TL-3菌丝洁白浓密,子实体肾圆形,菌盖中等偏大,菌盖厚度显著高于TL-1(P<0.01),平均单产和生物学效率比TL-1分别提高12.23%和12.37%,子实体多糖和三萜含量比TL-1分别提高1.87%和37.5%,具有较高的应用推广价值。

用SSR标记鉴定大豆杂交组合F_1的方法研究

为建立鉴定大豆杂种的方法,采用亲本间有多态性的3对SSR引物,对148个耐盐与盐敏感大豆品种正反交F1植株进行分子鉴定,结果表明,有81.8%的F1为真杂种,且3对多态性SSR引物检测结果一致;在亲本基因型纯合的情况下,采用1对在亲本间有多态性的SSR引物即可对F1真伪进行准确判断;亲本间分子量差异大的SSR位点可用高浓度琼脂糖电泳进行快速鉴定。利用该方法对2007年参加国家大豆区试的大豆杂交种品系H02-286的50粒种子进行纯度鉴定,进一步验证了SSR标记检测杂种真伪的可行性。

工业大麻种子及苗期性别鉴定方法的研究

【目的】探究工业大麻在生产实践中减少雄株比例,提高雌株比例的方法。【方法】通过形态学观察法、生理代谢差异比较、化学物质鉴定法及DNA分子标记鉴定法对工业大麻的种子及未进行性别分化的苗期叶片进行性别鉴定。【结果】通过测定雌雄工业大麻叶片中的NADH和TTCH含量发现,雌雄性工业大麻叶片的NADH和TTCH含量差异明显。通过显色反应发现,甲基红染色20 h后,雄麻变为紫红色,雌麻变为黄褐色。溴麝香草酚蓝染色12 h后,雌麻变为草绿色,雄麻变为天蓝色。快蓝B盐染色20 h后,雌叶表层纤毛变成淡红色,雄叶纤毛仍为无色透明态。通过特异性序列OPV-08和SCAR1可鉴定工业大麻种子及苗期的雌雄性。【结论】形态学观察法、生理代谢差异比较、化学物质鉴定法及DNA分子标记鉴定法(特异性序列OPV-08和SCAR1)可用于工业大麻的性别鉴定。

亲本未知的棉花F_1杂种及其F_2单株的SSR分子鉴定

在棉花品种区域试验中,杂交种纯度的分子检测一直是比较困难的课题,尤其是在亲本未知的情况下,杂交种的纯度的分子检测研究尚未见报导。本研究利用17对SSR核心引物对参试品种邯6402的F1进行纯度检测,SSR标记纯度达100%,17对引物中有12对呈现共显性,5对引物为非共显性。同时,构建了F1的SSR指纹图谱,以此可以鉴定邯6402的真实性。继续用这些引物对F2的44株棉苗进行检测,F2群体棉苗均有不同程度的分离,绝大部分基因型为杂合体,许多位点显示共显性,且共显性位点互不相同,在分子水平上验证了F2群体的杂合状态。应用这一套SSR核心引物,能够在室内鉴定棉花杂交种的真实性和纯度,还能够鉴别是F1杂交种还是F2分离群体,比对杂交种的指纹图谱能检测出F1中掺杂成分。

苗药头花蓼生药的综合鉴定

目的探讨苗药头花蓼生药综合鉴定的方法。方法选取黔产苗药头花蓼药材10批次,制作头花蓼药材植物标本,对其根、茎、叶、花、果等形态特征进行性状鉴别;制作头花蓼药材粉末,分别采用氯化铁(FeCl_(3))显色反应、盐酸-镁粉反应、氯化铝(AlCl 3)显色反应及薄层色谱法进行理化鉴别;采用显微镜对其药材粉末进行显微鉴别;采用植物基因组DNA提取试剂盒进行DNA分子标记鉴定。结果头花蓼茎丛生,叶椭圆形、长2~5 cm、宽1~2 cm、叶先端急尖基部楔形,花序头状、单生或顶生、成对,总状花序直立、近球形,花被淡红色;苗药头花蓼醇提液在FeCl_(3)显色反应中显蓝色、久置变深蓝色,在盐酸-镁粉反应中显深红色,在AlCl 3显色反应中于360 nm紫外灯下显黄色荧光;头花蓼粉末显微鉴别具有花粉粒、晶鞘纤维、纤维素、导管、淀粉粒、木栓细胞等特征碎片;头花蓼药材在500 bp附近显示清晰明亮的单一条带,测序显示序列差异主要集中在ITS1和ITS2区。结论由性状鉴别、理化鉴别、粉末显微鉴别及DNA分子标记鉴定结果,阐明了原鉴定药材为蓼科蓼属植物头花蓼Polygonum capitatum Buch.-Ham.ex D.Don。

花生属野生种质的RAPD鉴定

利用RAPD技术 ,对栽培种与花生属野生种的杂交后代进行了分子标记鉴定 ,结果表明 :从 60个随机寡核苷酸引物中筛选出具多态性的引物 2 7个 ,其中一个引物能检测到来自野生种的DNA特异片段。

大白菜品种资源抗根肿病鉴定

为了解大白菜抗根肿病品种的抗性表现及为育种利用提供依据,本研究对国内外抗根肿病大白菜品种资源进行根肿病人工接种鉴定和分子标记鉴定。结果表明:94份接种青岛根肿病菌的鉴定品种中有74.46%为抗病品种,其中表现免疫或高抗的占鉴定品种的65.95%;65份接种2012年双龙根肿病菌的品种中12份表现抗病,占18.46%,其中表现高抗的有5份,占鉴定品种的7.69%;50份接种2013年双龙根肿菌的品种中表现抗病的仅有2份,占鉴定品种的4%;KBrH129J18R分子标记鉴定的86份品种中有56份出现抗病特征条带,占鉴定品种的65.12%,抗青岛根肿病菌的品种分子标记中大都有抗病条带出现。

17个粗山羊草品种(系)抗叶锈基因的鉴定

为鉴定17个粗山羊草品种(系)中可能含有的抗叶锈病基因,用10株具有不同毒力的小麦叶锈菌混合菌对17个粗山羊草品种进行成株期抗叶锈性鉴定,筛选出7个在田间对叶锈菌有抗性的材料。用抗叶锈基因Lr1、Lr9、Lr19、Lr21、Lr24、Lr28、Lr29和Lr34的STS、SCAR或CAPS标记对这些品种进行分子辅助鉴定。初步明确粗山羊草CN40033和CN30823中可能含有Lr1基因;CN42471中可能含有Lr9基因;CN30942中可能含有Lr21;供试的17个粗山羊草品种中都不含有Lr19、Lr24、Lr28、Lr29和Lr34。