分子线性探针技术在检测脊柱标本中结核分枝杆菌及其耐药性中的应用价值

目的 :评估分子线性探针技术(HAIN)应用于检测脊柱标本中的结核分枝杆菌(MTB)及其耐药性的临床价值。方法:回顾性分析首都医科大学附属北京胸科医院骨科2015年6月~2016年12月收治的脊柱感染的患者235例,其中男132例,女103例,年龄1~84岁,平均42.8±18.1岁,根据伽马干扰素释放试验、标本普通细菌培养和真菌培养结果进行分组,脊柱结核(结核组)219例,脊柱感染其他细菌或真菌(非结核组)16例,通过穿刺或手术获取脓液或组织标本(含肉芽组织、干酪样坏死物和骨质),然后在2h内采用HAIN技术和联合培养法对相同标本进行MTB检测,并进行抗结核药物的敏感性试验。比较两种方法检测MTB的敏感度和特异度,以及检测利福平耐药、异烟肼耐药和耐多药的敏感度和特异度。结果:HAIN和联合培养法检测MTB结果为阳性的分别有120例和104例。HAIN和联合培养法检测MTB的敏感度分别为54.8%和47.5%,特异度均为100%。HAIN在MTB培养阳性标本和培养阴性标本中的阳性率分别为63.5%、47.0%,两组的阳性率的差异有统计学意义(χ~2=6.006,P<0.05)。HAIN检测利福平耐药、异烟肼耐药和耐多药的敏感度分别为87.5%、66.7%和85.7%,特异度分别为94.8%、86.0%和93.2%,一致性检验Kappa值分别为0.743(P<0.001)、0.427(P<0.001)和0.664(P<0.001)。结论:HAIN在检测脊柱结核中的结核分枝杆菌及其利福平耐药和异烟肼耐药中展现出了高敏感度和特异度的技术特点,具有良好的临床应用前景。

分子线性探针杂交法在结核分枝杆菌耐药性快速检测中的应用价值

目的探讨分子线性探针杂交法在快速检测结核分枝杆菌耐药性中的效果。方法选择新乡医学院第一附属医院住院治疗的结核患者的临床标本750例,其中结核分枝杆菌临床分离株190例,痰涂片阳性标本560例。所有临床标本分别采用传统方法及分子线性探针杂交法进行检测,对2种方法检测的异烟肼(INH)和利福平(RFP)的耐药结果进行比较,采用分子线性探针杂交法对耐药菌株进行基因分型,分析INH及RFP耐药相关突变位点情况。结果传统方法检测中,560例痰涂片阳性标本中共检测出结核分枝杆菌454例,其对INH、RFP耐药率分别为15.0%(68/454)、17.8%(81/454),190例结核分枝杆菌临床分离株对INH、RFP的耐药率分别为26.8%(51/190)、18.4%(35/190);传统方法检测的结核分枝杆菌对INH、RFP的耐药率分别为18.5%(119/644)、18.0%(116/644)。分子线性探针杂交法检测454例结核分枝杆菌对INH、RFP的耐药率分别为14.1%(64/454)、17.6%(80/454),190例结核分枝杆菌临床分离株对INH、RFP的耐药率分别为23.2%(44/190)、16.3%(31/190);分子线性探针杂交法检测的对INH、RFP的总耐药率分别为16.8%(108/644)、17.2%(111/644)。2种方法检出的结核分枝杆菌对INH、RFP的耐药率比较差异无统计学意义(INH:χ~2=0.140、0.691、0.650;RFP:χ~2=0.011、0.293、0.131;P>0.05)。分子线性探针杂交法检测中,对INH和RFP的灵敏度、特异度分别为85.7%、98.9%和90.5%、98.9%,其中kat G-S315T1为INH耐药主要突变位点,约占88.9%,rpo B-S531L为RFP耐药主要突变位点,约占81.1%。结论分子线性探针杂交法能够快速检测出结核菌株和痰标本中结核分枝杆菌的耐药性,并能对耐药基因进行分型,减少药物敏感性试验的时间,并能根据药物敏感性结果尽快采取有效的治疗方案。

分子线性探针杂交方法用于耐多药结核病耐药性分析的应用研究

目的评价分子线性探针杂交方法(LPA)在快速检测耐多药结核病人耐药性的应用价值。方法利用分子线性探针杂交方法检测415例结核分枝杆菌临床分离株,同时使用常规药敏方法对样本进行抗结核药物敏感性测试。结果线性探针杂交法检测415例结核分枝杆菌临床分离株RFP和INH耐药性的灵敏度、特异性分别为91.43%、94.20%和75.68%、95.89%,两种检测方法的kappa值分别为0.830、0.731;线性探针杂交法检出MDR的敏感度和特异度分别为75.44%、95.25%,两种检测方法的kappa值为0.692。线性探针杂交法检测的耐药株中RFP常见的突变型主要分布在WT7、WT8和MUT3(S531L)。结论线性探针杂交法在结核病耐药分析中能够快速、准确的鉴定出RFP和INH的耐药性以及常见耐药基因型,能够大幅缩短药敏试验时间,便于及时用药治疗,对控制耐药结核病的传播有重要意义。

应用分子线性探针技术快速筛查耐多药结核病的研究

目的应用分子线性探针(Geno Type MTBDRplus·GTplus)技术检测绵阳地区结核分枝杆菌的耐药性,了解耐多药结核病的状况,为制定地区结核病的预防控制策略提供科学依据。方法应用病例对照研究方法,对绵阳市9个县(市、区)送检的235株结核分枝杆菌同时运用GTplus和国际标准法-比例法检测利福平(RFP)和异烟肼(INH)的耐药性,分析GTplus诊断耐多药结核病的敏感性和特异性。结果 228株样本的结果有效,GTplus检测绵阳地区结核病耐多药率为14.04%(32/228),与比例法14.47%(33/228)相比,诊断耐多药结核病的结果差异无统计学意义(P>0.05),敏感性和特异性分别为81.82%(27/33)和97.44%(190/195);结果报告时间1 d,明显快于比例法的42 d。结论 GTplus诊断耐多药结核菌特异、敏感、快速、方便,对控制结核病的传播具有重要意义。

分子线性探针法诊断耐多药结核病准确性的Meta分析

目的应用Meta分析方法评价分子线性探针法诊断耐多药结核病的准确性。方法应用MetaDiSc1.4软件分析纳入的11个独立研究。结果纳入的11个研究间存在非阈值效应引起的异质性,拟合sROC曲线,AUC=0.9820,Q指数=0.9410,合并诊断比数比=366.71(Cochran-Q=22.04,P=0.0241);经亚组分析,分离菌株组的准确性高于痰标本组,差异有统计学意义(P=0.000)。结论分子线性探针法诊断耐多药结核病具有较高的准确性。

MTBDRplus方法快速检测结核分枝杆菌耐药性的研究

目的评估聚合酶链反应（PCR）-分子线性探针杂交方法（MTBDRplus）检测结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药性的临床价值。方法利用线性探针杂交法检测120例结核分枝杆菌临床分离株和430例痰涂阳性标本，对耐药株进行基因分型；使用常规培养方法对痰样本进行分离培养和鉴定，并采用比例法对所有结核菌株进行抗结核药物敏感性测试。结果120例结核分离株比例法和线性探针杂交法检测利福平和异烟肼耐药率分别为18．3％（22／120）、25．0％（30／120）和16．7％（20／120）、23．3％（28／120），差异均无统计学意义（P〉0．05）；线性探针杂交法的敏感度和特异度分别为90．9％、100％和93．3％、100％。430例涂阳痰液标本中，经鉴定351例为结核分支杆菌，比例法和线性探针杂交法检测利福平和异烟肼耐药率分别为16．5％（58／351）、15．4％（54／351）和17．1％（60／351）、14．5％（51／351），差异均无统计学意义（P〉0．05）；线性探针杂交法的敏感度和特异度分别为89．7％、97．3％和83．33％、98．0％。合计471例结核菌株比例法和线性探针杂交法检测利福平和异烟肼耐药率分别为17．0％（80／471）、17．00％（80／471）和16．7％（84／471）、16．8％（79／471），差异均无统计学意义（P〉0．05）；线性探针杂交法的敏感度和特异度分别为90．0％、98．0％和86．9oA、98．5％。线性探针杂交法检测的耐药株中常见的突变型是katG-S315T1（15．3％）和rpoB-S531L（14．0％）。结论线性探针杂交法可快速、准确鉴定结核分枝杆菌并对常见耐药基因进行分型，适用于检测结核菌株和痰标本；可大幅缩短药物敏感试验周期，有利于临床及时用药治疗。

结核病实验室诊断中常见干扰型非结核分枝杆菌的监测分析

目的掌握常见干扰结核病(TB)实验室诊断的非结核分枝杆菌(NTM)菌种组成及生长特性,以提高TB实验室诊断水平。方法采用分子线性探针(LPA)法对139株经实验室初步鉴定为NTM进行快速分型检测,回顾性对照分析其传统细菌学生长特性。结果脓肿、戈登、偶发、胞内、堪萨斯、鸟、瘰疠和外来分枝杆菌分别占41.01%、20.14%、13.67%、12.95%、5.76%、4.32%、1.44%和0.72%。2例NTM与结核分枝杆菌(MTB)混合培养阳性菌分别为戈登与脓肿分枝杆菌。脓肿分枝杆菌为TB复诊样本中常见干扰型NTM。结论综合分析常见干扰TB诊断的NTM的分子分型与细菌学生长特性,可提高TB实验室鉴别诊断准确率。