分子线性探针杂交法在结核分枝杆菌耐药性快速检测中的应用价值

目的探讨分子线性探针杂交法在快速检测结核分枝杆菌耐药性中的效果。方法选择新乡医学院第一附属医院住院治疗的结核患者的临床标本750例,其中结核分枝杆菌临床分离株190例,痰涂片阳性标本560例。所有临床标本分别采用传统方法及分子线性探针杂交法进行检测,对2种方法检测的异烟肼(INH)和利福平(RFP)的耐药结果进行比较,采用分子线性探针杂交法对耐药菌株进行基因分型,分析INH及RFP耐药相关突变位点情况。结果传统方法检测中,560例痰涂片阳性标本中共检测出结核分枝杆菌454例,其对INH、RFP耐药率分别为15.0%(68/454)、17.8%(81/454),190例结核分枝杆菌临床分离株对INH、RFP的耐药率分别为26.8%(51/190)、18.4%(35/190);传统方法检测的结核分枝杆菌对INH、RFP的耐药率分别为18.5%(119/644)、18.0%(116/644)。分子线性探针杂交法检测454例结核分枝杆菌对INH、RFP的耐药率分别为14.1%(64/454)、17.6%(80/454),190例结核分枝杆菌临床分离株对INH、RFP的耐药率分别为23.2%(44/190)、16.3%(31/190);分子线性探针杂交法检测的对INH、RFP的总耐药率分别为16.8%(108/644)、17.2%(111/644)。2种方法检出的结核分枝杆菌对INH、RFP的耐药率比较差异无统计学意义(INH:χ~2=0.140、0.691、0.650;RFP:χ~2=0.011、0.293、0.131;P>0.05)。分子线性探针杂交法检测中,对INH和RFP的灵敏度、特异度分别为85.7%、98.9%和90.5%、98.9%,其中kat G-S315T1为INH耐药主要突变位点,约占88.9%,rpo B-S531L为RFP耐药主要突变位点,约占81.1%。结论分子线性探针杂交法能够快速检测出结核菌株和痰标本中结核分枝杆菌的耐药性,并能对耐药基因进行分型,减少药物敏感性试验的时间,并能根据药物敏感性结果尽快采取有效的治疗方案。

分子线性探针杂交方法用于耐多药结核病耐药性分析的应用研究

目的评价分子线性探针杂交方法(LPA)在快速检测耐多药结核病人耐药性的应用价值。方法利用分子线性探针杂交方法检测415例结核分枝杆菌临床分离株,同时使用常规药敏方法对样本进行抗结核药物敏感性测试。结果线性探针杂交法检测415例结核分枝杆菌临床分离株RFP和INH耐药性的灵敏度、特异性分别为91.43%、94.20%和75.68%、95.89%,两种检测方法的kappa值分别为0.830、0.731;线性探针杂交法检出MDR的敏感度和特异度分别为75.44%、95.25%,两种检测方法的kappa值为0.692。线性探针杂交法检测的耐药株中RFP常见的突变型主要分布在WT7、WT8和MUT3(S531L)。结论线性探针杂交法在结核病耐药分析中能够快速、准确的鉴定出RFP和INH的耐药性以及常见耐药基因型,能够大幅缩短药敏试验时间,便于及时用药治疗,对控制耐药结核病的传播有重要意义。

MTBDRplus方法快速检测结核分枝杆菌耐药性的研究

目的评估聚合酶链反应（PCR）-分子线性探针杂交方法（MTBDRplus）检测结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药性的临床价值。方法利用线性探针杂交法检测120例结核分枝杆菌临床分离株和430例痰涂阳性标本，对耐药株进行基因分型；使用常规培养方法对痰样本进行分离培养和鉴定，并采用比例法对所有结核菌株进行抗结核药物敏感性测试。结果120例结核分离株比例法和线性探针杂交法检测利福平和异烟肼耐药率分别为18．3％（22／120）、25．0％（30／120）和16．7％（20／120）、23．3％（28／120），差异均无统计学意义（P〉0．05）；线性探针杂交法的敏感度和特异度分别为90．9％、100％和93．3％、100％。430例涂阳痰液标本中，经鉴定351例为结核分支杆菌，比例法和线性探针杂交法检测利福平和异烟肼耐药率分别为16．5％（58／351）、15．4％（54／351）和17．1％（60／351）、14．5％（51／351），差异均无统计学意义（P〉0．05）；线性探针杂交法的敏感度和特异度分别为89．7％、97．3％和83．33％、98．0％。合计471例结核菌株比例法和线性探针杂交法检测利福平和异烟肼耐药率分别为17．0％（80／471）、17．00％（80／471）和16．7％（84／471）、16．8％（79／471），差异均无统计学意义（P〉0．05）；线性探针杂交法的敏感度和特异度分别为90．0％、98．0％和86．9oA、98．5％。线性探针杂交法检测的耐药株中常见的突变型是katG-S315T1（15．3％）和rpoB-S531L（14．0％）。结论线性探针杂交法可快速、准确鉴定结核分枝杆菌并对常见耐药基因进行分型，适用于检测结核菌株和痰标本；可大幅缩短药物敏感试验周期，有利于临床及时用药治疗。