测定克喘素免疫偶合物分子结合摩尔比的紫外-可见分光光度法

以牛血清白蛋白 (BSA)、卵清白蛋白 (OVA)为载体,采用重氮法,制出克喘素 (CL)的两种免疫偶合物免疫原CL-BSA和包被抗原CL -OVA ;通过紫外光谱定性证明偶合物偶联成功 ,通过可见光谱法定量测定偶合物的分子结合摩尔比 ,结果表明CL -BSA与CL-OVA的分子结合摩尔比分别为13.19∶1、7.53∶1,方法简便快捷 。

不同分子结合比克喘素免疫原制备Balb/c小鼠抗血清效果比较

用克喘素(CL)与牛血清白蛋白(BSA)偶合制备的3种克喘素免疫原CL6.l-BSA、CL13.2-BSA、CL18.9-BSA(分子结合比分别为6.1:1、13.2:1、18.9:1)免疫Balb/c小鼠,制备多抗血清,采用间接ELISA和间接竞争ELISA法检测,并进行多抗血清效果的比较,结果表明:克喘素免疫原CL13.2。-BSA制备的多抗血清效果明显优于另外两种克喘素免疫原,用其制备的多抗血清效价高、特异性好,线性检测范围为1～10μg/ml。

疾病相关的蛋白质与配体DNA分子结合区域的分析与预测

很多细胞的生命活动涉及到特定的DNA分子与蛋白质相互作用,而且这些相互作用与人类很多疾病的产生密切有关。为了了解蛋白质与DNA分子结合的分子机制,确定蛋白质序列中哪些残基与DNA分子结合是非常重要的。但是目前,精确识别蛋白与DNA分子结合残基还很困难。在这项研究中,我们将使用机器学习算法来预测疾病相关蛋白与DNA分子的结合区域,这为下一步精确识别结合位点奠定了基础。预测模型中使用的数据集来自于Uniprot和PDB数据库,我们提取位置特异性打分矩阵(PSSM)、氨基酸的理化指数为特征,利用随机森林算法、5折交叉检验结果得到:在使用103种理化指数作为特征时,预测总精度最高达到94%,精确率、召回率以及马氏相关系数分别为88%、75%和0.78。可见该模型对于疾病相关的蛋白与DNA分子的结合区域是有较好的识别能力。

藏药十八味诃子利尿丸对雄性糖尿病大鼠脑组织离子钙结合衔接分子1及突触可塑性相关蛋白的影响

目的探讨藏药十八味诃子利尿丸对雄性糖尿病(Diabetes mellitus,DM)大鼠脑组织中小胶质细胞标记物离子钙结合衔接分子1(Ionized calcium binding adaptor molecule 1,IBA1)及突触可塑性相关蛋白的影响。方法30只雄性SD大鼠适应性喂养72 h后,取10只大鼠为对照组;另取20只制备DM大鼠,以高糖高脂饲料喂养12 w后于尾静脉一次性注射STZ溶液,其中10只为模型组、10只为藏药组(藏药组用十八味诃子利尿丸连续灌胃2 w),实验结束后断头取脑组织。用Western Blot法检测IBA1、IL-6、syn-1、PSD95、HIF-1α,用IHC法检测IBA1、IL-6、HIF-1α。对实验结果进行相关统计学分析。结果与对照组比较,模型组大鼠脑组织中的IBA1、IL-6、HIF-1α蛋白表达升高(P<0.05),syn-1、PSD95蛋白表达降低(P<0.05);与模型组比较,藏药组大鼠脑组织中的IBA1、IL-6、HIF-1α蛋白表达降低(P<0.05),syn-1、PSD95蛋白表达量升高(P<0.05)。结论藏药十八味诃子利尿丸可能通过IBA1靶点降低DM大鼠脑组织中小胶质细胞的活化水平,并改善突触可塑性,从而对DM大鼠脑组织发挥保护作用。

蛋白质高分子结合体

蛋白质高分子结合体是蛋白质与高分子化合物以特定位置或方式结合的产物。其中,蛋白质(包括酶和多肽)分子中氨基酸残基上的氨基、巯基和羧基是常用的结合位点。本文主要对蛋白质高分子结合体的制备方法进行了综述。聚乙二醇是合成高分子中能够有效改善蛋白质性能的修饰剂,而多糖则是用于制备蛋白质高分子结合体较成功的天然高分子化合物。"点击化学"、活性聚合技术等技术已经被成功应用于蛋白质高分子结合体的制备。某些具有特异结合功能基团的化合物(如金属卟啉、生物素等)与高分子共价结合后也可制备蛋白质高分子结合体。在研究蛋白质高分子结合体制备方法的基础上,近年来开始了这类大分子的自组装行为研究,尤其是对巨型双亲性分子自组装行为的研究,这为设计和构筑先进功能材料提供了新的思路。与高分子化合物的结合是改善蛋白质性能和拓宽蛋白质应用范围的重要技术之一。蛋白质高分子结合体不但可用于生物医药领域,而且在纳米技术和材料科学等领域具有潜在的优势。

苜蓿盲蝽气味分子结合蛋白AlinOBP2结合特性初步分析

昆虫具有灵敏的嗅觉系统,能够特异性地识别性信息素和寄主挥发物来进行寻找配偶、定位寄主植物和产卵位点.气味分子结合蛋白在昆虫嗅觉识别过程中发挥关键作用.本研究表达和纯化了一个新的苜蓿盲蝽气味分子结合蛋白AlinOBP2,采用qRT-PCR方法解析了AlinOBP2基因的表达谱,结果表明AlinOBP2绝大部分在触角中表达,且在雌雄触角中的表达量相当,在头部也有少量的表达.以N-phenyl-1-naphthylamine(1-NPN)为荧光探针,采用荧光竞争结合实验研究了5种性信息素类似物和13种棉花挥发物与AlinOBP2蛋白的结合能力.结果显示,5种性信息素类似物均不能和AlinOBP2有效结合,暗示AlinOBP2在苜蓿盲蝽寻找配偶过程中不发挥作用.在13种棉花挥发物中,庚酸乙酯和AlinOBP2的结合能力最强,结合常数为9.22μmol/L.二甲基萘、3-己酮、乙酸叶醇酯、乙酸壬酯、香芹醇5种化合物和AlinOBP2结合能力一般,结合常数分别为15.49,17.31,21.53,18.86和13.47μmol/L.据此推测,AlinOBP2可能为普通气味结合蛋白,能够选择性地结合某些棉花挥发物并参与苜蓿盲蝽识别普通气味过程.

直肠癌患者的血清C型凝集素受体及其下游效应分子CARD9表达与临床病理特征和预后的关系

目的探究直肠癌患者的血清C型凝集素受体(CLR)及其下游效应分子胱天蛋白酶募集域蛋白9(CARD9)表达与临床病理特征和预后的关系。方法选择2018年3月至2020年3月国药同煤总医院收治的98例直肠癌患者作为研究对象(设为观察组),另选择45名同期在该院体检的健康志愿者设为对照组。采用ELISA法检测血清可溶性树突状细胞特异性细胞间黏附分子3结合非整合素(sDC-SIGN)和CARD9表达水平,并分析其与直肠癌患者临床病理特征的关系。采用Pearson相关性分析探讨血清sDC-SIGN与CARD9表达的关系。入组直肠癌患者术后均随访3年,计算3年总生存(OS)率。采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,分析血清sDC-SIGN和CARD9表达与直肠癌患者预后的关系。采用多因素Cox回归分析探讨直肠癌患者预后的影响因素。采用ROC曲线分析血清sDC-SIGN和CARD9对直肠癌患者术后生存情况的预测价值。结果与对照组相比,观察组的血清sDC-SIGN表达水平降低,血清CARD9表达水平升高,2组的差异均有统计学意义(P均<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,直肠癌患者的血清sDC-SIGN与CARD9表达呈显著负相关(r=-0.743,P<0.05)。与无淋巴结转移的直肠癌患者相比,有淋巴结转移的患者的血清sDC-SIGN表达水平显著降低,而血清CARD9表达水平显著升高,差异均有统计学意义(P均<0.05)。sDC-SIGN低表达组的3年OS率显著低于sDC-SIGN高表达组,CARD9高表达组的3年OS率显著低于CARD9低表达组,差异均有统计学意义(P均<0.05)。多因素Cox回归分析结果显示,分化程度、TNM分期、淋巴结转移、血清sDC-SIGN和CARD9均是影响直肠癌患者预后的独立危险因素(P均<0.05)。血清sDC-SIGN和CARD9联合预测直肠癌患者术后3年生存情况的ROC曲线下面积(AUC)为0.896,均大于两者单独预测的AUC(P均<0.05)。结论血清sDC-SIGN和CARD9表达水平均与直肠癌发生密切相关,且血清sDC-SIGN低表达及血清CARD9高表达均提示直肠癌患者术后预后较差,其可能成为直肠癌诊断和预后预测的新血清学标志物。

盐酸二氢埃托啡与生物大分子的结合物的合成与药理性质研究

目的 :从结构改造上尝试延长盐酸二氢埃托啡的作用时间。方法 :设计合成了盐酸二氢埃托啡与人血清白蛋白 (HSA)和聚赖氨酸 (PLL)的结合物 (HSA与DHE·HCl的比例为 1∶5 ,1∶8,1∶16,1∶17,PLL与DHE·HCl的比例为 1∶3 ) ,并用体外透析实验测定了它们的体外水解情况 ,用药理实验测定了它们在小鼠身上的效价和作用时间。结果 :合成了各种比例的盐酸二氢埃托啡与HSA和PLL的结合物 ,体外透析实验和药理实验表明这类大分子结合物的作用时间与盐酸二氢埃托啡相近 ,而降低了效价。结论 :我们认为效价降低、作用时间相当是由于与生物大分子结合后的结合物比原药分子大得多 ,不利于在体内转运和穿过血脑屏障 。

噬菌体展示免疫球蛋白结合分子单结构域随机组合文库的构建

目的:构建由免疫球蛋白结合分子单结构域随机组合的噬菌体展示文库,为应用各种类型免疫球蛋白对该文库进行体外分子进化筛选研究打下基础。方法:PCR扩增制备分别编码Protein A 的A、D结构域、Protein G的B2 结构域和Pro tein L的B3结构域的序列片段,片段两端引入XbaⅠ酶切位点,3′端引入分别编码0、1、2、3个氨基酸大小随机连接肽的序列,并克隆于pMD 18T载体构建重组质粒。以上述16种重组质粒为模板,PCR扩增分别制备各种单结构域片段及两端部分T载体序列,XbaⅠ酶切,各种酶切片段混合后连接,并克隆于噬菌体展示载体pCANTAB5S,构建噬菌体展示免疫球蛋白结合分子单结构域随机组合文库,挑取单克隆进行序列测定,评价文库的随机性。结果:噬菌体展示免疫球蛋白结合分子单结构域随机组合文库库容量为2×107,滴度为1.3×1011;文库中含77%以上的阳性克隆,其中由2个以上单结构域组成的阳性克隆占24%;序列分析显示组合文库包含上述4种单结构域序列,连接方式符合随机连接的特点,随机连接肽的编码核酸也呈随机分布。结论:成功构建了免疫球蛋白结合分子单结构域随机组合文库,该文库库容、多样性和随机性完全可满足进行体外分子进化研究的要求。

CO_2二聚体分子弱结合作用的DFT计算

用密度泛函理论 (DFT)的 Becke 3LYP方法 ,在不同基集合（ 6- 31G和 6- 311G系列）下对平行结构（ C 2h）和 T形结构 (C2v)的 CO_2二聚体进行 ab initio计算 .通过计算 ,得到了 CO_2二聚体 C2h和 C2v两种构型的结构参数和离解能 ,并给出了 CO_2二聚体相对稳定构型 C2h的 12个正则振动分析图 .结果表明 ,CO_2二聚体的离解能为 2 kJ· mol－ 1,CO_2分子之间振动频率很小 ,从而说明 CO_2二聚体是弱结合分子 .

调节小分子GTP结合蛋白Rab27表达对人膀胱癌细胞Cyclin、p-FAK、p-IκB表达的影响

目的观察调节小分子GTP结合蛋白Rab27表达对人膀胱癌细胞中细胞周期蛋白(Cyclin)、磷酸化黏着斑激酶抗体(p-FAK)、核因子κB抑制蛋白(p-IκB)表达的影响。方法取对数生长期人膀胱癌细胞系BIU-87(Rab27低表达细胞系)用Rab27质粒转染,人膀胱癌细胞系5637(Rab27高表达细胞系)用Rab27干扰质粒转染。采用Western blotting法检测转染前后BIU-87及5637细胞Rab27、Cyclin D1、Cyclin E、p-FAK(Tyr925)、p-FAK(Tyr576/577)及p-IκB。结果与Rab27质粒转染前比较,转染后BIU-87细胞Rab27的相对表达量升高,细胞Cyclin D1、Cyclin E、p-FAK(Tyr925)、p-FAK(Tyr576/577)及p-IκB相对表达量均升高(P均<0.05)。与Rab27干扰质粒转染前比较,5637细胞Rab27的相对表达量降低(P均<0.05),细胞Cyclin D1、Cyclin E、p-FAK(Tyr925)、p-FAK(Tyr576/577)及p-IκB相对表达量均降低(P均<0.05)。结论转染Rab27质粒的BIU-87细胞Cyclin D1、Cyclin E、p-FAK(Tyr925)、p-FAK(Tyr576/577)及p-IκB的表达升高。转染Rab27干扰质粒的5637细胞Cyclin D1、Cyclin E、p-FAK(Tyr925)、p-FAK(Tyr576/577)及p-IκB的表达降低。Rab27可能通过调节NF-κB、FAK信号通路的相关蛋白表达来影响膀胱癌细胞周期。

白纹伊蚊C6/36细胞登革Ⅱ型病毒结合分子的筛选

目的筛选白纹伊蚊C6／36细胞表达连接登革Ⅱ型病毒分子。方法提取C6／36细胞的总蛋白和膜蛋白，收集和纯化登革Ⅱ型病毒，用12％SDS．PAGE分析C6／36细胞的总蛋白和膜蛋白，转于硝纤膜上，用病毒覆盖蛋白结合实验（VOPBA）筛选C6／36细胞表达连接登革Ⅱ型病毒分子。结果C6／36细胞的总蛋白和膜蛋白经12％SDS．PAGE分离后转膜，分别与纯化的病毒液和阴性对照液孵育，用抗登革病毒I～Ⅳ单克隆抗体检测，结果显示病毒孵育组在67000和30000的位置有特异性的条带出现，而阴性对照组无此条带。结论用VOPBA法初步从白纹伊蚊C6／36细胞中筛选67000和30000等登革Ⅱ型病毒结合分子，其功能的鉴定正在进行。

进化免疫球蛋白结合分子LD5的原核表达、纯化及结合活性

目的对新型进化免疫球蛋白(Ig)结合分子LD5进行原核表达和纯化,并鉴定其结合活性。方法将LD5基因片段克隆入原核表达载体pET32a(+),转化大肠杆菌后,IPTG诱导表达。以8mol/L尿素裂解菌体后,上清经Ni2+-NTA柱纯化,并对纯化蛋白进行SDS-PAGE及Western blot分析。以ELISA和Dot blot对LD5蛋白结合IgG、IgM活性进行鉴定。结果LD5分子在大肠杆菌中获得成功表达,表达的融合蛋白相对分子质量为59000。Western blot表明纯化的LD5蛋白能特异结合IgG。ELISA结果显示,LD5在结合IgM上较SpA具有明显的优势。结论LD5分子在大肠杆菌中已成功表达,纯化的LD5蛋白保留了天然Ig结合分子的结合活性。

尿视黄醇结合蛋白、肾损伤分子-1及血胱抑素C在早期糖尿病肾病中的变化及其诊断价值

目的观察尿液中视黄醇结合蛋白(RBP)、尿肾损伤分子-1(KIM-1)及血胱抑素C(CysC)在糖尿病肾病(DN)中的变化及诊断价值。方法选取2014年6月—2016年6月沈阳军区总医院内分泌科收治的DM患者124例作为研究对象,根据24 h尿微量白蛋白排泄率(UAER)分为正常白蛋白尿(NA)组35例,微量白蛋白尿(MA)组45例和临床白蛋白尿(CP)组44例,另选取35例健康体检者为健康对照组(CON组),记录各组临床资料,测定各组生化指标,应用ELISA法测定各组尿液RBP、KIM-1及血CysC水平。结果 NA组、MA组、CP组BMI、腰围(WC)、空腹血糖(FPG)、餐后2 h血糖(2 hPG)、空腹胰岛素(FINS)、胰岛抵抗指数(HOMA-IR)、血肌酐(SCr)、尿蛋白排泄率(UAER)、尿素氮(BUN)、RBP、KIM-1、CysC水平显著高于CON组(F=17.669、15.734、18.639、19.835、17.885、25.693、129.72、444.15、128.20、168.90、75.382、47.856,P均<0.01)。与NA组比,MA组、CP组BMI、WC、FPG、2hPG、HOMA-IR、SCr、UAER、Cys C、BUN、RBP、KIM-1水平较高(P均<0.01),而CP组血清SCr、CysC及尿UAER、BUN、RBP、KIM-1水平高于MA组(P<0.01)。受试者特异性曲线(ROC)分析,经ROC分析可知,尿RBP诊断DN的ROC曲线下面积(AUC)为0.712,95%CI(0.612~0.845);尿KIM-1诊断DN的AUC为0.682,95%CI(0.608~0.782);血CysC诊断DN的AUC为0.652,95%CI(0.526~0.712)。结论尿RBP、KIM-1及血CysC水平与早期DN发生有密切的关系,可作为DN早期诊断指标。

应用噬菌体展示技术筛选人树突状细胞的特异结合分子

目的:从人肝癌T7 cDNA噬菌体展示肽库中筛选出能与人未成熟树突状细胞(iDC)特异结合的蛋白分子。方法:以人iDC为固相筛选目标,对人肝癌T7 cDNA噬菌体肽库进行4轮生物淘选,ELISA鉴定噬菌体单克隆。阳性克隆经PCR扩增并测序后行同源性比对分析。结果:4轮筛选富集现象不显著,获得80个只与人iDC特异性结合的阳性克隆。测序显示部分克隆序列相同,生物信息学比对发现与人iDC特异结合的阳性噬菌体克隆的同源蛋白中,可能与肝癌发生相关的分子有:人铁蛋白轻链、甲胎蛋白、α1微球蛋白前体、G蛋白偶联受体116和跨膜蛋白49等。结论:从人肝癌T7 cDNA噬菌体肽库中筛选获得了能与人iDC特异结合的分子,为阐明人肝癌发生发展过程中肿瘤免疫逃逸相关机制奠定了基础。

食品单分子层结合水及其测定

０前言大多数食品都含有一定量的水分，水与食品中其它组分结合的性质与强度直接影响到食品的外观、结构、味道以及稳定性。水是食品腐败变质的重要原因之一，含水量越多的新鲜食品，腐败变质的可能性越大。食品速冻法保存新鲜食品的原理就是通过低温快速冷冻使食品迅速降...

噬菌体展示免疫球蛋白结合分子定点随机突变组合文库的构建

目的构建噬菌体展示免疫球蛋白结合分子定点随机突变组合文库,为应用各种类型免疫球蛋白对该文库进行体外分子进化筛选及结构和功能的研究打下基础。方法应用overlapping PCR制备Protein A的Z结构域。用含随机核苷酸序列的引物,制备对Z结构域的第10、13、27、28、31和32位氨基酸进行随机突变的定点随机突变体库。并在突变体片段两端引入KpnⅠ位点,3′端引入3个氨基酸大小随机连接肽的序列。经KpnⅠ酶切后随机连接,克隆于噬菌粒展示载体pCANTAB5S。克隆产物转化大肠杆菌TG1,辅助噬菌体M13K07拯救,构建噬菌体展示定点随机突变组合文库。结果该定点随机突变组合文库的转化子数目为6.4×106个,滴度为1.4×1015TU/L;文库中含0.72以上的阳性克隆,其中有2个单结构域的阳性克隆占0.15;15个样品的序列分析显示各突变位点和随机连接肽的氨基酸序列呈随机性分布。结论成功构建了噬菌体展示免疫球蛋白结合分子定点随机突变组合文库,该库库容量在一级结构上具有良好的随机性和多样性,可满足体外分子进化研究的要求。

煤层气中CH_4分子间弱结合作用的研究

本文针对煤层气中甲烷分子间作用是否影响煤层气吸附的问题,采用量子化学方法,在MP2/6-311G++(3df,3pd)电子相关校正水平上,对CH4二聚体可能存在的十二种几何构型进行全自由度能量梯度优化和频率验证,对两种较稳定构型进行了基组叠加误差校正,并对这两种构型进行了振动频率和电荷分析,求得甲烷二聚体的离解能为1.81kJ·mol-1,从而说明甲烷二聚体是弱结合分子,由此本文为煤层气吸附理论的完善提供了一定的理论依据。

gp130结合分子融合蛋白的表达、纯化及其mAb的制备

ｇｐ１３０结合分子（ＧＡＭ）是一种新发现的可与ｇｐ１３０胞浆内近膜区结合的蛋白质，其在ｇｐ１３０信号传导中的作用尚待深入研究。我们在原核表达ＧＡＭｔｈｉｏｒｅｄｏｘｉｎ（Ｔｈｉｏ）融合蛋白的基础上，制备并纯化了抗Ｔｈｉｏ的多克隆抗体，将其与Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ偶联，经亲和层析提纯该融合蛋白，以此为免疫原，通过杂交瘤技术获得了３株抗ＧＡＭｍＡｂ。其中两株为ＩｇＧ１，１株为ＩｇＧ２ａ，与Ｔｈｉｏ及空载体转染的工程菌裂解液均无交叉反应。３株ｍＡｂ腹水抗体效价为（１．２４．８）×１０－７，同变性与非变性、单体与聚合体形式的ＧＡＭＴｈｉｏ融合蛋白都能起反应，用于Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ的效果满意，为ＧＡＭ的功能研究提供了重要的手段。

抗战时期毛泽东的知识分子与工农兵相结合思想及其当代价值

抗日战争时期,针对当时知识分子的特点,毛泽东提出知识分子与工农兵相结合教育思想,其主要内容包括:进行系统马列主义教育,注重知识分子世界观的改造;号召向工农兵学习,注重在劳动生产实践中进行思想教育;注重知识分子与工农群众阶级感情培养。这一思想对当前大学生的"三观"教育和社会实践具有重要的借鉴价值。