^(123)I的制备及其标记新型小分子融合肽的初步研究

本工作利用天然锑靶,通过121Sb(α,2n)123I核反应,在控制锑靶厚度为62.2～64.3mg/cm2和α粒子能量为26.5MeV的情况下,可以得到11.1TBq/(A.h)以上且核纯度高达98.6%的123I。利用制备的123I进行了小分子融合肽拟似物VHCDR1-VHFR2-VLCDR3的123I标记,并对标记物的体外稳定性及在正常小鼠体内的分布进行了初步研究。结果表明,123I标记VHCDR1-VHFR2-VLCDR3的标记率可达90%以上,123I标记物在体内不易脱碘且具有较高的体外稳定性。

甲状旁腺激素和转铁蛋白N端半分子融合蛋白在毕赤酵母中的表达

利用重叠PCR技术将PTH(parathyroidhormone,甲状旁腺激素)基因与TFN(transferrinN_terminalhalf_molecule,转铁蛋白N端半分子)基因在体外融合,融合基因克隆至真核表达载体pPIC9中,转化毕赤酵母GS115。转化子经甲醇诱导后,融合蛋白得到了表达并分泌到发酵上清液中。经SPSepharoseFF阳离子交换层析、PhenylSepharoseFastFlow疏水层析纯化获得了纯度大于95%的PTH_TFN样品。Westernblot分析及腺苷酸环化酶实验证明融合蛋白中的PTH具有与抗PTH抗体结合能力及刺激腺苷酸环化酶的活性,铁饱和实验证明融合蛋白中的TFN和单独的TFN具有相同铁结合能力。因而TFN可望作为PTH的天然运输载体。

马铃薯三糖甘草次酸衍生物通过抑制SARS-CoV-2进入靶细胞作为潜在的小分子新冠病毒融合抑制剂

目的 研究马铃薯三糖甘草次酸衍生物能否通过抑制SARS-CoV-2进入靶细胞,作为潜在的小分子新冠病毒融合抑制剂。方法 以天然SARS-CoV-2进入抑制剂甘草酸为先导化合物,利用活性亚结构的拼合原理等设计并合成了系列马铃薯三糖甘草次酸衍生物。利用SARS-CoV-2假病毒体外细胞感染模型,检测该系列甘草次酸衍生物的体外抗SARS-CoV-2活性;利用表面等离子共振技术及假病毒模型寻找先导化合物1b的抗病毒作用靶点;利用SARS-CoV-2 S蛋白介导的细胞-细胞融合体系,检测先导化合物1b是否作用于SARS-CoV-2病毒入侵宿主的膜融合过程;基于分子对接与定点突变技术,确定先导化合物1b与S蛋白的作用模式等。结果 先导化合物1b对SARS-CoV-2奥密克戎假病毒有显著抑制作用,EC50值为3.28μmol/L(P<0.05),对其它SARS-CoV-2变异株假病毒有广谱抗病毒活性。细胞-细胞膜融合实验显示1b能够抑制合胞体的形成。分子对接预测先导化合物1b可与S1与S2亚基交界处的空腔中的Glu309、Ser305、Arg765、Lys964等多个保守氨基酸残基产生氢键作用,亲和力为-8.6 kcal/mol。化合物1b在10、5、2.5、1.25μmol/L时对Arg765、Lys964、Glu309和Leu303突变后的假病毒的抑制活性显著降低(P<0.01)。结论 马铃薯三糖甘草次酸衍生物能够靶向作用于S蛋白,特异性干扰病毒-细胞膜融合阶段,继而发挥抗SARS-CoV-2感染的作用,是一类结构新颖的小分子SARS-CoV-2融合抑制剂。

桦木酸磺酰胺衍生物类小分子Omicron融合抑制剂的综合性实验设计

新冠病毒刺突蛋白的S2介导了病毒与宿主细胞的膜融合过程,其氨基酸酸序列在Omicron等变异株中均高度保守,可作为开发新型抗新冠病毒药物的重要靶点。基于此前沿热点课题,该文设计了一类以桦木酸磺酰胺皂苷衍生物为结构骨架的新型小分子Omicron融合抑制剂的综合性实验。以马铃薯三糖桦木酸皂苷1为苗头化合物,利用生物电子等排体原理及基于结构的药物设计方法(SBDD)设计并合成了三个马铃薯三糖桦木酸磺酰胺衍生物T-1、T-2、T-3,利用NMR及HRESIMs对其进行结构表征,并基于S/HIV模型测试了其在细胞水平对Omicron等多种新冠病毒变异株的抑制活性。在此基础上,综合利用表面等离子共振SPR、免疫共沉淀(Co-PI)、细胞-细胞融合实验、分子对接等实验得出该类皂苷分子能够嵌入S1/S2亚基交界处空腔、稳定S蛋白融合前的构象从而抑制病毒入胞,进而表现出广谱抗新冠病毒活性的结论。

多视角多注意力融合分子特征的药物-靶标亲和力预测

近期深度学习在药物-靶标亲和力(DTA)任务上受到极大关注,然而现有工作多将分子单一结构嵌入为向量,忽略了多视角融合分子特征对最终特征表示提供的信息增益。针对单一结构分子存在特征不完备性的问题,提出了一种基于注意力融合多视角分子特征的预测DTA的端到端深度学习方法,其核心模块为多视角分子结构嵌入(Mas)和多注意力特征融合(Mat)。首先,使用Mas模块将多视角分子结构嵌入到特征向量空间;然后,通过Mat模块融入分子特征层级的注意力机制,从而对不同视角的分子特征进行加权融合;其次,根据药物-靶标相互作用(DTI)执行两者特征级联;最后,利用全连接神经网络回归预测亲和力。在Davis和KIBA数据集上的实验验证了训练比率、多视角特征融入、多注意力融合、以及相关参数对亲和力预测性能的影响。与GraphDTA方法相比,所提方法的均方误差(MSE)在Davis和KIBA两个数据集上分别降低了4.8%和6%。实验结果表明,注意力融合多视角分子特征能够捕获对蛋白质靶位上链接的相关性更高的分子特征。

破骨细胞融合相关分子的研究进展

多核破骨细胞具有骨吸收功能,其过度活化会导致骨破坏。在多种刺激诱导下,破骨前体细胞在其表达的融合相关分子(如树突状细胞特异性跨膜蛋白、破骨细胞多次跨膜蛋白、白细胞分化抗原、ATP6vOd2、E-钙黏蛋白、轻链钙调蛋白结合蛋白等)作用下,融合形成多核破骨细胞。由于破骨细胞融合过程对破骨细胞成熟及发挥骨吸收功能至关重要,因此,基于调节破骨细胞融合相关分子的研究可为骨质疏松、类风湿性关节炎、肿瘤等诱导的骨破坏提供新的治疗思路和方法。本文对破骨细胞融合相关分子的研究进展进行综述,旨在为骨破坏相关疾病的预防和治疗提供新方向。

采用激基缔合物荧光寿命探究水性分散体成膜过程中粒子间分子链相互融合

为探究水性分散体成膜过程中粒子间分子链相互融合的过程,采用合成的芘丁酸二羟基丙酯作为荧光扩链剂,合成荧光标记型水性聚氨酯以及结构相近的未标记型水性聚氨酯,将荧光标记水性聚氨酯分散体与过量的非标记水性聚氨酯混合成膜,采用稳态瞬态荧光光谱仪测量纯标记分散体与其混合膜的激基缔合物的荧光寿命,通过建立激基缔合物荧光寿命和荧光物质浓度之间的线性方程,计算得出颗粒融合深度来表征融合过程。结果表明:在成膜粒子分子链相互融合阶段,荧光标记分子链扩散进入非标记区域使得荧光标记浓度降低。对研究水性聚氨酯颗粒粒子融合深度与成膜温度、粒径、软段含量、交联度的关系有一定的意义。

精准的恶性肿瘤根治性切除即将实现——PET-荧光术中双模融合分子影像系统

2015年2月CA期刊发布《2012年全球癌症统计》显示，全球约有1400,000新发肿瘤病例，八百二十万患者死于癌症，每年癌症带来的经济损失超过一万亿美元，是世界上造成经济损失最大的一种疾病。目前，手术治疗仍旧是大部分肿瘤的主要治疗手段，大约90%的肿瘤使用手术作为诊断和分期的工具，病人的术后生存期和生存质量与手术切除彻底程度密切相关。

离子束介导植物分子超远缘杂交研究

研究了离子束介导的植物分子超远缘杂交.结果表明,离子束介导实现了银杏供体DNA与西瓜受体DNA的超远缘分子杂交,杂交后银杏内酯在西瓜品种3-16和SR2-14-2中的最高表达量分别为17.0756和45.9998 μg/g,其杂交的亲和率为25%.测定了有银杏内酯表达的2个月龄西瓜叶片超氧化物歧化酶活性,它们分别比对照提高了近一倍,说明离子束介导能实现超远缘的植物供体多基因在受体中的表达.还分析了其超远缘杂交的分子作用机理.

GFP与GnRH/TRS融合基因表达载体的构建及表达

应用基因工程技术构建GnRH/TRS与绿色荧光蛋白的融合基因,核酸序列测定和Western boltting印迹分析基因表达;激光共聚焦荧光显微镜观察活细胞内荧光布局。结果融合基因获得了正确表达,GnRH/TRS-GFP融合基因的瞬间和稳定表达均获得了相同结果。GnRH/TRS-GFP融合蛋白具有绿色荧光蛋白的自发荧光特性,且不影响Gn-RH/TRS分子在细胞内的正确表达,为低促性腺激素性功能减退综合征治疗的进一步研究奠定了基础。

STAT3入核分子机制的初步研究

为了研究Stat3入核的分子机制 ,将SV40大T抗原的经典核定位序列NLS(nuclearlocalizationsequence)分别融合在Stat3 GFP分子和缺失突变体Dstat3 GFP的分子之间 ,构建Stat3 NLS GFP和Dstat3 NLS GFP融合分子。转染2 93T细胞 ,以NLS GFP为阳性对照 ,通过激光共聚焦显微镜的观察融合分子的亚细胞位置 ,未经白介素 6刺激的Stat3 NLS GFP和经白介素 6刺激的Stat3 GFP呈胞核分布 ,未经白介素 6刺激的Stat3 GFP和Dstat3 NLS GFP呈胞浆分布 .

利用ABEEM/MM模型对气态丝氨酸和苏氨酸残基二肽分子构象的研究

应用ABEEM/MM浮动电荷模型(原子-键电负性均衡方法融合进分子力场)对气态丝氨酸和苏氨酸残基二肽分子构象进行了初步的研究,与经典的力场模型相比,该方法中的静电势包含了分子内和分子间的静电极化作用,以及分子内电荷转移影响,同时加入了化学键等非原子中心电荷位点,合理的体现了分子中的电荷分布。相对其他极化力场模型,该模型具有计算量较小的特点。结果表明:我们模型计算的两种二肽分子的构象能和关键二面角结构与从头计算结果符合得很好,优于其他力场模型。

信号肽序列对禽流感病毒H5N1HA蛋白GFP融合分子在真核细胞中表达的影响

【目的】构建绿色荧光蛋白(GFP)与禽流感病毒(AIV)HA基因的融合表达载体,观察信号肽序列的有无及位置对HA-GFP在293T细胞中的表达影响。【方法】应用PCR方法从H5N1亚型AIV质粒DNA中扩增出完整的或除去信号肽序列的HA基因片段,PCR产物经XhoⅠ和SmaⅠ双酶切后定向插入绿色荧光蛋白真核表达载体pEGFP-C1的不同位点,将得到的重组体M1,M2和M3分别转化宿主菌DH5α,经双酶切及DNA测序鉴定分析后,采用脂质体转染法将pEGFP-C1,M1,M2和M3转染人胚肾细胞系293T细胞,荧光显微镜下观察HA-GFP的表达,流式细胞仪检测表达HA蛋白的细胞百分数。【结果】经酶切及测序鉴定成功构建了HA-GFP重组表达载体M1,M2和M3,荧光显微镜及流式细胞仪检测到重组质粒转染的293T细胞表达强的荧光蛋白,信号肽的有无对HA-GFP融合蛋白在293T细胞中的表达有显著影响,信号肽序列使HA-GFP融合蛋白在293T细胞中的表达减少,而信号肽的位置对融合蛋白表达量的影响不显著。【结论】信号肽的有无对HA-GFP融合蛋白在细胞中的表达有显著影响。

胃肠道肿瘤靶向抗癌胚抗原单链抗体与T细胞表面受体基因的融合分子构建

目的 将胃肠道癌胚抗原 (CEA)特异性单链抗体基因与人T细胞CD3ζ胞内区、跨膜区基因克隆入真核表达载体 ,表达相应的融合分子 ,以期制备消化道肿瘤靶向性杀伤T细胞。方法 应用PCR法扩增抗CEA特异性单链抗体 (scFv)基因 ;用RT PCR法从正常人外周血T细胞扩增出CD3ζ胞内区、跨膜区基因 ;将单链抗体插入CD3ζ基因序列的上游 ,构建重组真核表达载体scFv CD3ζ pcDNA3.0并测序。结果 抗CEAscFvcDNA片段为 810bp ,与已知的序列相符 ;CD3ζ胞内区、跨膜区的cD NA片段为 4 38bp ,与基因库公布的序列一致。重组的表达载体经酶切琼脂糖电泳及测序加以证实。 结论 成功制备了具有抗肿瘤相关抗原CEA靶向性及CD3ζ胞内区、跨膜区信号转导功能的重组分子 。

CD8α和CD3ε的融合分子介导T淋巴细胞凋亡

T淋巴细胞抗原受体(TCR)的α/β或γ/δ异二聚体与CD3形成抗原受体复合物(TCR/CD3),才能识别抗原刺激并传递抗原刺激信号.CD3一般由4种亚基组成,即CD3γ,δ,ε和ζ.在8条多肽链组成的TCR/CD3复合物中,CD3ε是TCR/CD3复合物装配的起始者和抗原刺激信号的传递者.以抗CD3ε的单克隆抗体模拟抗原刺激,可引起胸腺细胞凋亡(apopto-sis),而在成熟的T细胞中,一般会引起细胞激活、增殖或免疫不应性,CD3ε的激活信号是通过CD3ε的胞内功能区 ITAM(immune receptor tyrosine-based activation motif)而传递的.最近的研究表明,抗CD3ε单克隆抗体也可诱导某些肿瘤细胞的凋亡,这种细胞死亡形式称为激活诱导的细胞死亡(activation-induced cell death).但是,到目前为止,对于CD3ε传递凋亡信号的分子机制尚未见报道.

HIV-1融合抑制剂研究现状及发展趋势

HIV-1融合抑制剂是继逆转录酶和蛋白酶抑制剂后的新一类抗HIV感染药物,通过阻断病毒与靶细胞膜的融合从而抑制病毒进入靶细胞,在感染的初始环节切断HIV-1的传播,其中多肽类融合抑制剂T-20已于2003年上市。HIV-1融合抑制剂以HIV-1跨膜糖蛋白gp41为作用靶标,它们是一些天然或合成的多肽以及小分子化合物,通过与gp41功能区结合从而抑制其促融合功能的发挥。近年来,随着对膜融合过程分子机制以及gp41功能研究的不断深入,新的以gp41不同功能区为靶点的融合抑制剂分子不断被发现,成为倍受关注的研究热点之一。本文着重对近年来HIV-1融合抑制剂的研究现状及发展趋势进行综述。