荧光标记DNA分子量内标的设计与制备

目的:设计并制备65bp-500bp范围的荧光标记DNA分子量内标。方法:p MD18-T Vector连接任意一段割胶回收的DNA片段,克隆后提取重组质粒经双酶切后作为模板,在其上游设计一条固定引物并用荧光标记,在其下游设计一系列引物,经PCR扩增后在ABI 3100遗传分析仪上检测。结果:扩增产物DNA片段大小分别为65bp、105bp、149bp、200bp、241bp、269bp、311bp、345bp、400bp、450bp、500bp,与预期片段大小一致。结论:11个片段经混合调平后,峰型良好,出峰位置均匀,可用于毛细管电泳中DNA片段大小的确定。

利用定点突变及酶切方法制备分子量内标

分子量内标是STR分型时用来标定样品峰大小的重要内参,目前常用的内标如ABI公司LIZ500等都是采用PCR扩增的方法制备,这种方法制备的内标,由于引物二聚体的长度与内标中的小片段长度相近,不易于纯化,因此混有引物峰,容易在数据分析时产生误判,且不易于规模化生产。本实验采用定点突变技术结合酶切PCR产物的方法,制备了从50bp到500bp共14个片段的分子量内标,制备的产物没有引物峰等杂峰,且制备工艺适用于规模化生产,对获得的内标片段进行线性化分析,R值=0.9999,符合线性化要求,可以用作STR分型的分子量内标。

一种用于LIF&CE有效分离DNA片段的定量分析方法

为正确评估激光诱导荧光检测毛细管阵列凝胶电泳(LIF&CE)有效分离DNA片段及确保后续DNA鉴定的准确性,本文从实际电泳过程出发探索DNA片段长度与电泳迁移率的函数关系,研究解决因众多影响因素而造成的电泳迁移率实时变化问题,基于毛细管电泳迁移修正模型而设计了一种局部Southern方法。经理论分析和仿真实验结果证明,该方法非常适合于LIF&CE分离DNA片段的定量分析,可用于进行内标分子量定标与DNA片段大小识别,是一种稳定可靠、准确有效的定量分析方法。

环境温度对GA118-16A法医遗传分析仪检测性能影响

目的探讨＂GA118-16A型＂国产法医遗传分析仪受环境温度变化影响的情况。方法以分子量内标Gene Scan^TM-500LIZ为对象,通过分型情况、迁移速度和重现性,检测不同温度环境对该国产法医遗传分析仪运行的影响。数据经统计分析,评判仪器适温性能。结果实验表明,1随着环境温度的提高,内标片段中250bp的实际读值逐渐靠近设定值,迁移速度加快;213个实验室温度下,标准品均可获得完整、清晰、准确的分型图谱,RSD在0.1%左右,数据离散程度小,在20-26℃间仪器对DNA分离重现性最好;3能承受2-5℃的温度波动,在23-27℃检测稳定性最佳。结论该仪器能满足环境温度范围18-30℃间的检测需求,重现性好,片段分型准确,运行稳定。

法医STR分型电泳凝胶稳定参数的探讨

目的探讨对法医STR基因分型检测使用的毛细管电泳筛分介质进行评价的参数,为电泳凝胶验证评价提供参考指标。方法采用ABI 3130xl遗传分析仪,以3130 POP-4TM凝胶为筛分介质,以分子量内标GS500LIZ和Typer500为样本,多批次进行毛细管电泳;对原始数据进行分组统计,得到单碱基对相对迁移时间及其相对标准偏差(RSD)。结果分子量内标GS500LIZ和Typer500在POP-4TM凝胶中电泳,单碱基对相对迁移时间的统计结果表现趋势相似,即随着DNA片段增大,单碱基对相对迁移时间的均值减小,标准差及相对标准偏差增大。组间方差分析结果符合方差齐性,P<0.01,组间多重比较,P<0.000 28(Bonferron校正)。结论单碱基对相对迁移时间的相对标准偏差(RSD)是毛细管电泳重现性的重要参数,可为凝胶研发和验证提供参考性指标。