重症肌无力患者肌细胞分拣微管连接蛋白17的表达及作用

目的 比较分拣微管连接蛋白17（SNX17）在重症肌无力（MG）组和对照组肋间肌肌细胞中的表达,探讨其在乙酰胆碱受体（AChR）聚集中的作用.方法 取MG组和对照组肋间肌,分离出单根肌丝,用免疫荧光法观察肌丝AChR、SNX17分子形态及分布;实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）、Western blot法比较两组肌细胞SNX17含量.结果 AChR位于肌纤维纵轴的中部,呈连续光滑的红色椭圆形突起.对照组AChR呈曲奇饼干样,内部有精细分支的网络状结构;MG组仅可观察到呈不连续完整的红色外周轮廓线,内部网状结构破碎,呈空泡样,但可观察到SNX17呈同样形状蓝色椭圆形突起,两者位置、形态一致.MG组SNX17 mRNA和蛋白含量（n=10,0.85±0.08;0.83 ±0.08）均明显高于对照组（n=14,0.57±0.09;0.65±0.06）,差异有统计学意义（t=5.75 ,P ＜0.05;t=3.03 ,P ＜0.05）.结论 MG患者肋间肌肌细胞SNX17表达增高,与AChR在神经肌肉接头处共定位,可能是促进AChR聚集,维护神经肌肉接头信号通路完整的重要分子.

分拣微管连接蛋白9对常染色体显性多囊肾病初级纤毛结构和功能的影响

目的探讨分拣微管连接蛋白9(sorting nexin 9,SNX9)对常染色体显性多囊肾病(autosomal dominant polycystic kidney disease,ADPKD)初级纤毛的影响和作用机制,为ADPKD的治疗提供新的干预靶标。方法运用免疫荧光法观察人ADPKD囊肿衬里上皮细胞(WT9-12细胞)中SNX9的定位,采用免疫印迹法检测正常人肾小管上皮细胞(human renal tubular epithelial cells,RCTEC)和WT9-12细胞中SNX9的差异表达;在RCTEC细胞中分别下调和上调SNX9表达,采用免疫印迹法检测纤毛内运输蛋白88(intraflagellar transport proteins,IFT88)表达,并用免疫荧光法观察纤毛长度的变化。结果本研究发现SNX9位于WT9-12细胞的胞膜和胞质,并且表达低于其在RCTEC中的表达水平(P<0.05)。当SNX9表达下调后,IFT88表达减少,纤毛变短(P<0.05);而通过慢病毒SNX9上调SNX9表达后,IFT88表达增加,纤毛变长(P<0.01)。结论ADPKD时SNX9存在于囊肿上皮细胞的胞膜和胞质中,且表达低于正常肾小管上皮细胞,会引起初级纤毛形态和功能受损。而当SNX9表达增多时,对初级纤毛的结构功能具有保护作用,可能成为ADPKD治疗的新靶标。

重症肌无力患者肌细胞中LRP4胞内区与SNX17的相互作用

目的:探讨低密度脂蛋白受体相关蛋白4(LRP4)和分拣微管连接蛋白17(SNX17)在重症肌无力(MG)患者肌细胞中相互作用关系。方法:分别构建原核表达载体p ET30a-LRP4胞内区和真核表达载体p EASY-Blunt M2-SNX17,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达相对分子质量约为17 800的His-LRP4胞内区,在HEK293T细胞中诱导表达相对分子质量约为53 000的Myc-SNX17。利用抗Myc单克隆抗体磁珠与抗His单克隆抗体磁珠进行双向免疫共沉淀(Co-IP),以验证LRP4、SNX17两种蛋白分子是否存在相互作用。结果:成功构建了原核表达载体pE T30a-LRP4胞内区和真核表达载体pE ASY-Blunt M2-SNX17;抗Myc单克隆抗体磁珠与His-LRP4混合后不发生共沉淀,如再与Myc-SNX17混合则可发生共沉淀;抗His单克隆抗体磁珠与Myc-SNX17混合后不发生共沉淀,再与His-LRP4胞内区混合可发生共沉淀。结论:原核表达的LRP4胞内区蛋白与真核表达的SNX17体外可发生直接结合。

实验性自身免疫性重症肌无力大鼠多肌群SNX17基因的表达

目的:探讨实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)大鼠多肌群分拣微管连接蛋白17(SNX17)的表达特点。方法:采用主动免疫法构建EAMG大鼠模型(EAMG组)并进行评估,以正常大鼠作对照(正常对照组),利用荧光定量PCR和Western blot检测2组大鼠胸锁乳突肌、膈肌、咬肌、心肌、肋间肌、前肢肌、腓肠肌和眼肌等8组肌群中SNX17、nAChR mRNA和蛋白含量变化。结果:成功构建了EAMG大鼠模型。与正常对照组相比,EAMG组大鼠心肌、肋间肌中SNX17 mRNA的表达升高(P <0. 05),膈肌中SNX17 mRNA的表达降低(P <0. 05);胸锁乳突肌、腓肠肌和眼肌中nAChR mRNA的表达降低(P <0. 05),心肌中n AChR mRNA的表达升高(P <0. 05);咬肌、心肌和腓肠肌中SNX17蛋白含量升高(P <0. 05),胸锁乳突肌、膈肌中降低(P <0. 05)。EAMG组腓肠肌中SNX17 mRNA与nAChR mRNA的表达呈负相关(r=-0. 773,P=0. 035),而在心肌中呈正相关(r=0. 947,P=0. 012)。结论:SNX17可能是神经肌肉接头处的关键蛋白。

肝细胞癌组织中PLAGL2和SNX5的表达及临床预后价值研究

目的探讨肝细胞癌(HCC)中多形性腺瘤基因样蛋白2(PLAGL2)和分拣微管连接蛋白5(SNX5)的表达及临床预后价值。方法回顾性选取2019年2月至2020年2月在山西医科大学附属忻州医院接受治疗的92例HCC患者为研究对象。采用免疫组化法检测HCC组织和癌旁组织中PLAGL2、SNX5表达情况。绘制Kaplan-Meier生存曲线,采用log-rank检验比较PLAGL2、SNX5阳性和阴性患者3年累积生存率。采用单因素和多因素Cox回归分析影响HCC预后的独立危险因素。结果HCC组织中PLAGL2和SNX5阳性率分别为78.26%(72/92)和76.09%(70/92),高于癌旁组织的6.52%(6/92)和4.35%(4/92),差异均有统计学意义(均P<0.01)。肿瘤最大径>5 cm、TNM分期Ⅲ期的患者PLAGL2和SNX5阳性率分别高于TNM分期Ⅰ~Ⅱ期、肿瘤最大径≤5 cm的患者,差异均有统计学意义(均P<0.05)。PPLAGL2阳性患者3年累积生存率为51.39%(37/72),低于PLAGL2阴性患者的80.00%(16/20),差异有统计学意义(P=0.037)。SNX5阳性患者3年累积生存率为50.00%(35/70),低于SNX5阴性患者的81.82%(18/22),差异有统计学意义(P=0.020)。肿瘤最大径>5 cm、TNM分期Ⅲ期、PLAGL2阳性及SNX5阳性均是影响HCC患者预后的独立危险因素(均P<0.01)。结论HCC组织中PLAGL2、SNX5阳性率升高,两者均参与促进HCC的发生、发展。PLAGL2阳性和SNX5阳性是影响HCC患者预后的独立危险因素,是HCC潜在的预后相关肿瘤标志物。

lncRNA-SNX17在妊娠糖尿病孕妇血清中的表达水平及临床意义

目的探究长链非编码RNA(lncRNA)分拣微管连接蛋白17(SNX17)在妊娠糖尿病(GDM)孕妇血清中的表达水平及临床意义。方法选取2019年3月至2021年3月本院收治的108例患者为观察组,另选取同期86例健康孕妇为对照组。血清中lncRNA-SNX17、miR-517a表达水平采用实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测。Pearson相关性分析lncRNA-SNX17和miR-517a的关系,以及二者与临床指标的关系。ROC曲线分析血清lncRNA-SNX17、miR-517a对GDM发生的诊断价值。多因素Logistic回归分析GDM发生的影响因素。结果与对照组相比,观察组患者血清lncRNA-SNX17水平明显上升,miR-517a水平明显下降(P<0.05)。GDM患者血清lncRNA-SNX17和miR-517a水平呈显著负相关(r=-0.544,P=0.000)。血清lncRNA-SNX17、miR-517a水平与GDM患者临床指标密切相关(P<0.05)。ROC曲线显示,血清lncRNA-SNX17、miR-517a二者联合诊断GDM发生的曲线下面积(AUC)为0.904,敏感度为93.50%,特异性为76.70%,二者联合对GDM发生的诊断价值显著高于单一指标检测(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示TG、FPG、2 h PG、FINS、HOMA-IR、lncRNA-SNX17高水平、miR-517a低水平为孕妇发生GDM的危险因素。结论lncRNA-SNX17和miR-517a在GDM孕妇血清中呈异常表达,二者联合评估GDM发生的诊断价值较高,有望成为GDM发生的早期诊断指标。