不同酶消化液对大鼠肺微血管内皮细胞分离培养的影响

【目的】筛选适用于大鼠肺组织消化分离的酶消化液,为改良大鼠肺微血管内皮细胞的体外分离培养方法提供依据。【方法】无菌取新生大乳鼠肺脏组织,剪碎后随机分为9组,加入相应的酶消化液后,于37℃水浴消化,15 min、30 min和60 min时分别吹打和观察、拍照,消化液过70μm细胞筛,滤液离心,沉淀用培养基重悬,接种孵育培养2 h,洗去未贴壁细胞后显微镜观察、拍照。【结果】消化60 min时,除木瓜蛋白酶组外,其他各组均已无明显的块状结构,其中,胰蛋白酶组、胰蛋白酶-弹性蛋白酶组和弹性蛋白酶-胶原酶Ⅱ组消化最为充分;接种孵育2 h后,分散酶Ⅱ-胶原酶Ⅱ组的贴壁细胞量最多,木瓜蛋白酶组无明显的贴壁细胞,其他各组居于二者之间。【结论】分离培养大乳鼠肺微血管内皮细胞时,0.1%分散酶Ⅱ-0.1%胶原酶Ⅱ溶液优于本试验所用其他8种酶消化液。