盐酸克伦特罗的酶联免疫分析试剂盒的研制——Ⅱ克伦特罗酶联免疫检测方法的研究

〔目的〕在成功制备关键试剂的基础上 ,建立克伦特罗酶联免疫检测方法 ,并研制其测试盒。〔方法〕应用ELISA法重复测定样品 ,变异系数为 6.9% ,方法的添加回收率尿样为 92 .5 % ,检测限可达 0 .1ng/ml ,克伦特罗抗体与沙丁胺醇、异丙肾上腺素交叉反应率分别为 1.2 5 %、0 .0 3 %。〔结果〕自制的试剂盒与英国Randox公司的 β -Agonist试剂盒对比试验结果 ,两组数据经极差t检验分析 ,|t| <t0 .975无显著差异。〔结论〕该试剂盒具有专一性、快速、灵敏、准确的特点。

盐酸克伦特罗的酶联免疫分析试剂盒的研制—Ⅰ克伦特罗人工抗原及抗体的制备

〔目的〕酶联免疫分析试剂盒中的关键试剂是制备CBL人工抗原和抗体。〔方法〕通过重氮偶联法制备克伦特罗人工抗原 ,不同摩尔比的克伦特罗 -牛血清白蛋白结合物免疫家兔。〔结果〕经SephadexG -75柱纯化 ,用薄层层析和紫外光谱确证 ,获克伦特罗 -牛血清白蛋白结合物 ,间接酶联免疫分析法测试其效价N P >1:40 960 0。〔结论〕重氮偶联法成功制备CBL -BSA ,并获得高效价的抗血清。

滤纸干血-新生儿促甲状腺素酶联免疫分析试剂盒的研制

以辣根过氧化物酶标记链亲合素(SA),两株识别人促甲状腺素(hTSH)高度特异的单克隆抗体分别用于包被微孔和生物素化,以四甲基联苯胺(TMB)为底物,建立了滤纸干血-新生儿促甲状腺素生物素-亲合素酶联免疫分析(NeonatalTSH-BA-ELISA)试剂盒的制备方法。本方法的灵敏度为0.5mIU/L,批内变异系数<15%,批间变异系数<20%,回收率为90.1%～103.3%。本方法所制备的试剂盒与NeonatalTSH-IR-MA(磁颗粒法)试剂盒具有良好的相关性,相关方程为y=1.01x+0.34,相关系数为r=0.873。本试剂盒无放射性,操作简便、快速,适用于临床检测和科研应用。

总IgE定量标记免疫分析试剂盒行业标准的验证

目的对总IgE定量标记免疫分析试剂盒行业标准可行性进行验证。方法按照拟定行业标准的要求,选择不同免疫分析方法的试剂盒,进行验证。结果外观、空白限、线性、准确度、精密度、稳定性等指标符合要求,特异性项目中有个别试剂盒对IgM、IgG的测定结果高于行业标准要求。结论总IgE定量标记免疫分析试剂盒行业标准制定合理,有助于规范此类试剂盒的技术要求和实验方法,从而提高此类试剂盒的产品质量,并为其监管提供依据。

绿色荧光蛋白放射免疫分析试剂盒的研制

绿色荧光蛋白（GFP）于1962年在一种学名为Aequorea Victoria的水母中发现,包含238个氨基酸残基（[1-2]）。其基因所产生的蛋白质,在蓝色波长范围的光线激发下,会吸收蓝光的部分能量,发出绿色荧光。

雅培化学发光肿瘤项目试剂盒分析性能验证

目的评估AFP、CEA、CA19—9、CA125、CA15-3、TotalPSA、β-HCG七个肿瘤项目使用雅培试剂盒在本实验室雅培i2000SR全自动免疫分析仪上检测分析性能是否能达到厂家声称的分析性能指标。方法：按照WS／T420—2013《临床实验室对商品定量试剂盒分析性能的验证》标准的要求进行精密度、正确度、生物参考区间、可报告范围验证。结果：20例参考个体AFP、CEA、CA19—9、CA125、CA15—3生物参考区间与《全国临床检验操作规程》第4版／雅培试剂说明书一致，TotalPSA、β-HCG生物参考区间与雅培试剂说明书一致。结论：本实验室肿瘤项目使用雅培试剂在雅培i2000SR全自动免疫分析仪上检测分析性能符合要求，厂家声称值可靠，可满足临床检测要求。

罗氏电化学发光项目试剂盒分析性能验证

目的建为通过ISO 15189医学实验室质量和能力认可,对11个电化学发光项目试剂盒分析性能进行验证。方法按照标准的要求对CNAS-CL38:2012《医学实验室质量和能力认可准则在临床化学检验领域的应用说明》附录B中3、4组合的11个内分泌项目进行精密度、正确度、生物参考区间、可报告范围验证。结果 11个项目在罗氏cobas e601电化学发光免疫分析仪上检测,精密度、正确度、生物参考区间、可报告范围均符合要求。结论罗氏cobas e601上检测的11个内分泌项目性能验证均通过,可满足临床检测要求。

5种神经元特异性烯醇化酶检测试剂盒准确性分析

目的:对国内已上市的5种神经元特异性烯醇化酶检测试剂盒(NSE试剂盒)检测样本的准确性进行评价。方法:分别制备20 ng·mL-1和100 ng·mL-12个浓度的NSE样品,选择方法原理为时间分辨免疫荧光法(TRFIA)、电化学发光免疫法(ECLI)、化学发光免疫法(CLIA)、酶联免疫法(ELISA)等5种NSE试剂盒分别对上述样品进行测定,并对线性、最低检出限、批内精密度、批间精密度和准确性进行分析。结果:5种试剂盒剂量曲线线性、最低检出限和精密度均能满足检测要求,但是准确性指标偏差较大,尤其是低浓度样品的准确性,不同试剂盒对同一样本的检测结果有显著性差异(P<0.01)。结论:行业标准和标准品的缺失给体外诊断试剂产品的市场监管带来困难,应建立NSE国家标准品,并制定产品的质量标准,从而较好的控制试剂盒的准确性,使不同试剂盒的检测结果具有较好的可比性。

血清α-L岩藻糖苷酶对原发性肝癌的诊断价值

目的探讨α－L岩藻糖苷酶对原发性肝癌的诊断价值．方法采用中外合资蓝波公司生物技术研究所生产的肝癌检测试剂盒（血清α－L岩藻糖苷酶法）和中国原子能科学研究院生产的甲胎蛋白放射免疫测定盒，检测原发性肝癌43例，判断标准根据1977年全国肝癌防治研究协作会议制定的标准判定，其中男36例，女7例，年龄23岁～75岁，平均51．6岁．对照组：肝硬变46例，男38例，女8例，年龄19岁～72岁，平均45．1岁；良性胃疾病（经内镜证实胃溃疡36例，慢性胃炎21例）57例，男41例，女16例，年龄17岁～76岁，平均45．3岁．统计学处理．X2检验结果测定值根据试剂盒的推荐值确立．血清α－L岩藻糖苷酶以＞200nkat／L为阳性，≤200nkat／L为阴性；甲胎蛋白以＞400ng／mL为阳性，＜400ng／mL为阴性，结果阳性检出率，原发性肝癌组：血清α－L岩藻糖苷酶65．1％，甲胎蛋白62．6％；肝硬变组：血清α－L岩藻糖苷酶15．2％，甲胎蛋白全部阴性；良性胃疾病级：血清α－L岩藻糖苷酶3．5％，甲胎蛋白阴性．原发性肝癌组与对照组比较，有显著性差异（P＜0．01）．而血清α－L岩藻糖苷酶与甲胎蛋白的阳性检出率比较，无显著性差异（P＞0．05）．在原发性肝癌中，甲胎蛋白≥400ng／mL组的α－L岩藻糖苷酶阳性率为55.6％（15／27）

Cloning and Sequence Analysis on cDNA of Growth Hormone Releasing Hormone Receptor Gene from Wuzhishan Miniature Pig

[Objective] cDNA of growth hormone releasing hormone （GHRH） receptor gene from Wuzhishan miniature pig was cloned and its sequence was also analyzed. [Method] Using genomic DNA extracted from porcine ear tissues of Wuzhishan miniature pig as the template, three pairs of primers were designed by the reported cDNA sequence of porcine GHRH, and cDNA was also amplified by RT-PCR. After being recovered and purified, PCR products were ligated to pMD18-T and then transformed into Escherichia coli DH5a. The transformation products were analyzed by PCR and double enzyme digestion to screen positive clones, and the positive clones were sequenced after identification in LB liquid medium. [ Result] cDNA of Wuzhishan miniature pig GHRH receptor gene was obtained successfully, and its length was 1 577 bp coding 423 amino acids. BLAST analysis showed that there were only 23 nuoleotides in difference between this fragment and pomine GHRH receptor gene, and its homology was 98%. However, both GHRH receptor genes were constituted by 423 amino acids with the sequence homology of 96%. [ Conclusion] This study provides theoretical basis for further studies on the dwarf mechanism of Wuzhishan miniature pig.

放射免疫分析标准化的研究

1 前言 放射免疫分析是一种体外超微量分析方法,它是高度灵敏的放射性核素示踪技术与高度特异的免疫化学技术巧妙地结合的产物,具有灵敏度高、特异性强、精密度好等优点。灵敏度一般为10-9～10-12g/ml的水平,随着新技术、新方法、新材料的出现与应用,放射免疫分析的检测灵敏度有可能提高到10-14g/ml,甚至10-17g/ml的水平。所以,放射免疫分析及其相关技术已成为生物学、核医学、基础医学以及临床诊断中不可缺少的检测手段,在药理学、免疫学、法医学、病毒学、核农学、生态学和环境科学等多种学科领域也得到广泛应用,被测物质由激素扩展到几乎一切具有生物活性的物质。 随着放射免疫分析的广泛应用,生产厂家把放射免疫分析中所使用的放射性标记物、标准品、结合试剂、分离剂和缓冲溶液等有关材料组装在一个盒内,只要按照操作说明进行操作,就能在体外定量测定人。