探究结核分枝杆菌耐药基因检测在耐药肺结核治疗中的价值

研究、分析结核分枝杆菌耐药基因检测在耐药肺结核治疗中的价值。方法 抽取2023年1月至2024年1月我院收治的耐药肺结核患者(40例),均分为对照组、研究组,各20例,分别实施常规药敏试验、结核分枝杆菌耐药基因检测。结果 研究组耐药检出准确率较高,反观对照组则相对较低,组间有统计学意义(P<0.05);研究组基因突变检出率高于对照组(P<0.05)。结论 在耐药肺结核的治疗中,结核分枝杆菌耐药基因检测的应用价值明显,可为治疗方案的制定或调整提供可靠依据,值得推广。

超敏结核分枝杆菌和利福平耐药基因检测技术在结核病诊断中的应用进展

1结核病现状结核病是严重危害人类健康的传染性疾病之一,是仅次于新型冠状病毒感染的第二大传染病杀手,是全球第13大死因[1]。2022年10月27日,世界卫生组织(World Health Organization,WHO)发布《2022全球结核病报告》[2](以下简称报告)指出,2021年全球新发结核病患者约1060万人,其中儿童约120万人。受新型冠状病毒的影响,全球结核病发病率与2020年相比上升了3.6%,打破了过去20年间每年约2%的下降趋势。2019年至2021年,全球因结核病死亡人数有所增加,2021年全球共有160万人死于结核病,相当于倒退到2017年的水平。2020年至2021年全球耐药结核病负担增加了3%,2021年报告了45万例利福平耐药结核病例,需要治疗的耐药结核患者中仅有36%的人接受了治疗,并且全球耐药结核的成功治疗率只有60%。2021年全球结核病基本医疗服务支出也从2019年的60亿美元下降至54亿美元,而2022年所需的费用为130亿美元[2],资金缺口巨大。

慢性阻塞性肺疾病合并初治菌阳肺结核患者结核分枝杆菌rpoB基因突变分析

目的研究慢性阻塞性肺疾病(COPD,简称慢阻肺)合并初治菌阳肺结核患者结核分枝杆菌rpoB基因和其突变。方法选择经结核分枝杆菌ropB基因检测阳性患者221例,其中慢阻肺合并初治菌阳肺结核患者94例,单纯初治菌阳肺结核患者127例,对两组患者结核分枝杆菌基因(利福平耐药)进行回顾性研究。结果慢阻肺合并初治菌阳肺结核患者结核分枝杆菌rpoB基因菌株(利福平耐药)21例,占比22.3%,利福平敏感73例,占比77.7%;单纯初治菌阳肺结核患者结核分枝杆菌rpoB基因菌株(利福平耐药)15例,占比11.8%,利福平敏感112例,占比88.2%;两组对比差异有统计学意义(P<0.05),慢阻肺合并初治菌阳肺结核患者结核分枝杆菌rpoB基因(利福平耐药)率高于单纯初治菌阳肺结核组;各组不同性别利福平耐药率比较差异无统计学意义(P>0.05);各组不同年龄段基因(利福平耐药)率比较差异无统计学意义(P>0.05),但慢阻肺合并初治菌阳肺结核组在50~59岁及年龄≥70岁年龄段基因(利福平耐药)率较高,分别为33.3%、28.9%。单纯初治菌阳肺结核组以年龄<20岁利福平耐药率较高,占比28.6%。结论肺结核患者结核分枝杆菌rpoB基因突变是导致利福平耐药的原因之一,慢阻肺合并初治菌阳肺结核患者结核分枝杆菌rpoB基因突变率(利福平耐药)高于单纯初治菌阳肺结核患者;各组患者基因突变率(利福平耐药)与性别无关,慢阻肺合并初治菌阳肺结核患者年龄越高,利福平耐药率越高。

不同支气管镜介导标本的结核分枝杆菌基因检测对痰涂片阴性肺结核患者的诊断价值

目的:分析不同支气管镜介导标本结核分枝杆菌基因(TB-DNA)检测对痰涂片阴性肺结核患者的诊断价值。方法:选取2022年1—12月聊城市传染病医院痰涂片阴性肺结核患者178例为研究对象,采用奇偶数字法分为对照组和研究组,各89例。对照组采用肺泡灌洗液进行标本提取,研究组采用毛刷刷检进行痰液标本收集,两组均以荧光定量聚合酶链反应检测标本中的TB-DNA,比较两组肺结核诊断、耐药性检测效能以及不良反应。结果:研究组肺结核诊断灵敏度、特异度以及准确率均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);研究组耐药性检测灵敏度、特异度以及准确率均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);两组不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:在痰涂片阴性肺结核患者的疾病诊断中,以毛刷刷检介导标本的肺结核诊断、耐药性检测效能优于肺泡灌洗液介导标本,两种标本介导方式不良反应均比较少,安全性相当。

结核分枝杆菌耐药基因检测在耐药肺结核治疗中的效果分析

分析在耐药肺结核临床治疗中应用结核分枝杆菌耐药基因检测的效果。方法 进行回顾性研究,选303择我院2022年3月至2022年12月收治的88例肺结核患者,根据临床检测方式,对患者分组。对照组(44例)接受传统的药敏试验,观察组(44例)接受结核分枝杆菌耐药基因检测。对比分析2组检测效果。结果 两组检出的结核分枝杆菌耐药情况没有显著差异(P>0.05)。但两组在检验时间上存在着显著差异(P<0.05),此外,观察组还可以精确测定结核分枝杆菌突变株数。结论 结核分枝杆菌具有高度的变异性,该菌可通过变异产生明显的耐药性,导致肺结核患者的病情发展成为耐药性肺结核。但是,可以基于结核分枝杆菌高度变异性这一特点,对肺结核患者进行结核分枝杆菌耐药基因检测。通过结核分枝杆菌耐药基因检测,可以及早检出耐药性肺结核,并确定结核分枝杆菌突变株的具体类型,从而帮助医生更快地确定最佳的治疗方案,提高临床治疗效果。

结核分枝杆菌耐药基因检测应用于耐药肺结核治疗的价值探讨

剖析耐药肺结核患者在采取相应治疗措施时经结核分枝杆菌耐药基因检测取得的临床价值。方法 研究目标入院治疗时间范围于2020年1月—2023年1月,采取相关检查措施被确诊为耐药肺结核,筛选样本量共计200例,以随机数字表法为分组依据将其划分并命名为对照组(n=100)和观察组(n=100),对照组用药期间给予其常规药敏试验,观察组所用检验方式为结核分枝杆菌耐药基因检测,分析两组诊断方法应用期间的耐药肺结核阳性检出率、诊断效能。结果 耐药肺结核阳性检出率测定结果呈现为,观察组明显高于对照组(P值<0.05)。评估两组检测方式的诊断效能,特异度、敏感度、准确度、阳性预测值、阴性预测值经统计学分析,对比差异显著(P<0.05)。结论 耐药肺结核患者治疗期间应用结核分枝杆菌耐药基因检测有利于提高诊断效能,为合理制定治疗方案提供了参考依据,在临床上具有较高的借鉴价值。

葡萄分枝基因VvBRC3截短蛋白的原核表达条件优化

为优化葡萄分枝基因VvBRC3的原核表达条件,本研究分析了该蛋白的基本理化性质、二级结构、稀有密码子和蛋白质结构模型等生物信息学特性,将克隆得到的VvBRC3全长序列和含有TCP、R结构域的截短序列均连接至pET30a和pGEX4T-1载体,构建得到四种原核表达载体。从诱导剂浓度、诱导时间(终OD_(600)值)、初始菌体OD_(600)值、诱导温度4个方面对截短基因表达条件进行优化。结果表明:Vv BRC3蛋白含有376个氨基酸,理论等电点为6.51,属于不稳定蛋白,含有TCP结构域、R结构域,具有螺旋-环-螺旋的结构特征,且稀有密码子较多。但VvBRC3全长基因无法表达,截短基因可以表达且截短蛋白可溶。菌体密度OD_(600)为0.3时,加入0.1 mmol/L的IPTG,于16℃下诱导至终OD_(600)为1.2~1.4,是该截短基因的最佳表达条件。本研究成功构建了截短的VvBRC3原核表达载体,并优化其表达条件。

结节病患者皮肤及淋巴结组织中分枝杆菌基因的检测和鉴定

目的探讨分枝杆菌在结节病发病中的作用。方法采用巢式聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性和PCR产物测序的方法,对31例福尔马林固定-石蜡包埋的结节病组织标本(皮肤19例,淋巴结12例)、14例正常皮肤石蜡标本和3例皮肤结核石蜡标本进行检测。结果19例结节病皮肤标本中,有4例(21.1%)扩增出相对分子质量为65 000的分枝杆菌热休克蛋白基因,其中1例为结核分枝杆菌,2例为龟分枝杆菌,1例为戈登分枝杆菌。12例结节病淋巴结组织和14例正常皮肤组织标本中均未检测到分枝杆菌基因。3例皮肤结核标本中检测出结核分枝杆菌基因。结论分枝杆菌可能与皮肤结节病发病有关。

佳木斯地区某院Xpert MTB/RIF检测结核分枝杆菌基因及利福平耐药基因阳性率情况分析

目的:分析佳木斯大学附属第一医院Xpert MTB/RIF检测结核分枝杆菌基因检出率及利福平耐药率,为结核分枝杆菌的诊断和治疗方案的选择提供依据。方法:选取2018-08~2019-08佳木斯大学附属第一医院送检的标本237例,进行Xpert MTB/RIF检测,对其结核分枝杆菌基因检出率和利福平耐药率进行统计,并进行数据分析。结果:本次研究共检测标本237例,其中男123例,女114例,检出结核分枝杆菌阳性标本共34例,男15例,女19例,阳性率为14.35%;利福平耐药基因检测阳性标本共6例,男3例,女3例,利福平耐药率为17.65%。结核分枝杆菌检出率最高的前两个科室分别为呼吸科(16例,占47.05%),胸外科(9例,占26.47%)。结核分枝杆菌检出率最高的标本种类为痰液(18例,占52.94%),其次为肺泡灌洗液(10例,占29.41%)。结论:本院结核分枝杆菌检出率处于正常水平,利福平耐药率低于全国平均耐药率,应继续做好耐药检测和监测工作,以及耐药防控措施。

结核分枝杆菌喹诺酮类药物耐药与基因突变关系的研究

目的:探讨喹诺酮类药物的耐药性与结核分枝杆菌gyrA基因突变的关系。方法:采用比例法检测结核分枝杆菌中氧氟沙星耐药的菌株,并对氧氟沙星耐药菌株的gyrA基因的耐药决定区域进行序列测定。结果:175株结核分枝杆菌中,耐氧氟沙星菌株为30.9%(54/175),其中81.5%(44/54)的菌株gyrA基因的喹诺酮耐药决定区发生突变。结论:在结核病人中存在着较严重的耐喹诺酮药物情况,因此对结核病人选择喹诺酮药物治疗时,最好先进行喹诺酮药物的耐药检测,gyrA基因突变的检测可预测菌株对喹诺酮类药物的耐药表型。

北京和非北京基因型结核分枝杆菌生长曲线及mazEF系统的研究

目的研究北京与非北京基因型结核分枝杆菌的生长曲线、mazEF3,6,9系统表达有无差异。方法测绘上述菌株及其mazEF3,6,9基因缺失和过表达菌株在标准、低氧和营养饥饿培养条件下的生长曲线。使用qRT-PCR技术检测各菌株的mazEF3, 6, 9、mazF3, 6,9和mazE3, 6,9基因mRNA表达水平;利用Western Blot技术检测MazF9蛋白表达水平。结果在标准和低氧条件下培养的第4、6、8、10 d,营养饥饿条件下培养的第2、4、6、8 d,北京基因型菌株的OD值(细菌数量)均高于非北京基因型菌株,差异有统计学意义(P<0.05);在上述3种培养条件下,北京和非北京基因型mazEF3,6,9缺失突变株和过表达株菌数均低于其亲本株。在mRNA、蛋白水平上,与非北京基因型菌株相比,北京基因型菌株mazEF3高表达9.55倍、mazF3高表达4.86倍、mazF6高表达2.64倍、mazF9高表达5.27倍和mazE9低表达0.16倍;mazF9蛋白高表达1.62倍,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论北京与非北京基因型结核分枝杆菌的生长曲线、mazEF3,6,9系统表达存在差异,mazEF系统与北京基因型菌株流行相关。

不同支气管镜介导标本的结核分枝杆菌基因检测对痰涂片阴性肺结核患者的诊断价值

目的:不同支气管镜介导标本的TB-DNA检测痰涂片阴性肺结核价值分析。方法:以随机样本抽样法于痰涂片阴性肺结核患者中抽取60例,对其分别采用肺泡灌洗液提取标本、毛刷刷检收集痰液标本,之后采用荧光定量PCR法对其TB-DNA进行检测,对比两种介导标本的检测结果及不良事件发生率。结果:肺泡灌洗液提取标本阳性41例,阳性率68.33%;黏膜毛刷刷检提取标本阳性55例,阳性率91.67%,两种提取标本方法检测阳性率对比,差异有统计学意义(P<0.05)。两种介导标本方法不良事件发生率对比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:与肺泡灌洗液提取标本相比,毛刷刷检收集标本TB-DNA诊断痰涂片阴性肺结核效能更显著。

mazEF系统及生物膜对北京基因型结核分枝杆菌生存能力的影响

目的探索生物膜形成能力、mazEF3,6,9系统的表达与北京基因型结核分枝杆菌生存力的相关性。方法检测北京、非北京基因型菌株与标准毒力株H37Rv在不同培养条件下的生存力、生物膜形成能力。采用PCR技术扩增上述菌株的mazE3,6,9系统,并进行基因测序;使用荧光定量PCR检测所有菌株的mazEF3,6,9基因、mazF3,6,9毒素基因和mazEF3,6,9抗毒素基因的mRNA表达水平;利用WesternBlot技术检测MazF9蛋白表达水平。结果北京基因型菌株在不同培养条件下的生存力、生物膜形成能力高于非北京基因型菌株。北京、非北京基因型菌株mazF3基因193bp处发生碱基突变,由C突变为T。在mRNA表达水平上,与H37Rv相比,北京、非北京基因型菌株中mazE3低表达;非北京菌株中mazE6低表达,mazE9高表达(P<0.05)。与非北京基因型菌株相比,北京基因型菌株中mazEF3高表达、mazE9低表达、mazF3、mazF6、mazF9高表达,mazF9蛋白高表达(P<0.05)。结论北京基因型菌株具有较强的生存力和生物膜形成能力。mazEF系统的差异表达、生物膜成膜能力强可能与北京基因型菌株生存能力强相关。

结核分枝杆菌RegX3基因表达情况及其蛋白的生物信息学分析

目的探讨结核分枝杆菌(MTB)菌株RegX3基因表达情况,并通过生物信息学技术分析预测其编码蛋白的结构和功能。方法从感染患者体内分离MTB,PCR方法扩增RegX3基因并测序,分析RegX3基因表达情况及其多态性,并采用生物信息学技术对RegX3蛋白的结构和功能进行预测分析。结果临床分离MTB菌株RegX3基因表达率为65.9%(27/41)。测序结果表明,11.1%(3/27)的RegX3基因发生碱基插入、缺失和替换;生物信息学分析表明RegX3蛋白属于稳定蛋白,亲水性强于疏水性。RegX3蛋白二级结构以α螺旋和无规则卷曲为主,有8个磷酸化位点。结论临床分离菌株RegX3基因阳性率为65.9%,具有高度保守性;RegX3蛋白的生物信息学预测分析为后续研究其蛋白功能奠定了基础。

经皮肺穿刺组织行结核分枝杆菌/利福平耐药基因快速检测对涂阴肺结核的诊断价值

据WHO估算,2017年全球新发结核病患者约1 000万,结核病发病率为133/10万,其中中国的估算结核病新发患者数为88.9万,估算结核病发病率为63/10万^([1])。结核病的有效控制依赖于准确而快速的诊断及治疗。涂阴肺结核因其诊断较涂阳肺结核困难,尤其当肺部影像学特征不典型时,往往易造成漏诊、误治。临床工作中涂阴肺结核占活动性肺结核的比例超过60%^([2]),涂阴肺结核已成为我国结核病患病率下降的主要障碍。

新疆阿克苏地区维吾尔族结核分枝杆菌（MTB）耐药突变基因检测的耐药性研究

目的了解新疆阿克苏地区维吾尔族结核患者对四种一线抗结核药利福平、异烟肼、链霉素、乙胺丁醇的耐药情况。方法参照结核痛诊断细菌学检验规程，用亚能生物的基因芯片检测技术对不同来源的结核茵阳性标本经处理后，进行耐药突变基因检测，来判断结核分枝杆菌的耐药情况。结果通过对100例10至70岁的维吾尔族结核患者的耐药突变基因检测，共59株耐药，利福平的耐药率为47．5％，异烟肼为37％，链霉素为8．4％，乙胺丁醇为6．7％。结论阿克苏地区维吾尔族人群的结核病人耐药率高于全国水平。初发的结核藕人对四种一线抗结核药（利福平、异熘料、链霉素、乙胺丁醇）的耐药率较低，而复发的结核病人对四种一线抗结核药的耐药率较高.

结核分枝杆菌耐药基因芯片检测在结核性脑膜炎中的应用

目的分析结核分枝杆菌耐药基因芯片检测在结核性脑膜炎应用中的价值。方法选取我院2015年9月—2017年9月诊治的结核性脑膜炎疑似病例136例为研究对象。采用随机数字表将其分为观察组和对照组,分别采用结核分枝杆菌耐药基因芯片法和酶联免疫吸附(ELISA)法对脑脊液进行检测,并根据检测结果进行诊断。并对诊断的准确率、检查时间等数据进行组间比较。结果观察组阳性率为18.6%,对照组阳性率为17.4%,观察组高于对照组(P>0.05);两组准确率分别为95.7%和85.5%,观察组高于对照组(P<0.05)。结论结核分枝杆菌耐药基因芯片检测在结核性脑膜炎应用中具有阳性率高,准确性高等优势。

4种检测方法对骨结核的诊断价值比较

目的探讨涂片抗酸染色、TB-DNA、Xpert MTB/RIF、结核菌培养等4种检测方法对骨结核诊断的价值对比。方法对骨外科1 a内住院骨质破坏患者的病灶周围脓液,用4种检测方法进行检测,并对结果进行统计分析,指标包括:灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值。结果研究对象中以临床诊断为金标准,脓液涂片查抗酸杆菌灵敏度为31.75%,特异度为100.00%,阳性预测值100.00%,阴性预测值53.74%,约登指数为0.32;TB-DNA灵敏度为88.89%,特异度为98.00%,阳性预测值98.25%,阴性预测值87.50%,约登指数为0.87;Xpert MTB/RIF灵敏度为95.23%,特异度为68.00%,阳性预测值78.95%,阴性预测值91.90%,约登指数为0.63;脓液结核菌培养灵敏度为41.27%,特异度为100.00%,阳性预测值100.00%,阴性预测值57.47%,约登指数为0.41,(χ^(2)=77.354,P<0.005)4种检测方法差异具有统计学意义。结论4种检测方法中,TB-DNA灵敏度和特异度较好,Xpert MTB/RIF灵敏度较好,TB-DNA和Xpert MTB/RIF的真实性较好,同时阳性预测值和阴性预测值较高,对骨结核的诊断具有较好的价值。