草分枝杆菌疫苗治疗支气管哮喘的疗效及其免疫学效应

目的 :研究草分枝杆菌疫苗对支气管哮喘患者的疗效及其免疫学效应。方法 :非急性发作期哮喘患者 32例 ,分为治疗组 (n =2 0 )和对照组 (n =12 )。 2组在维持原控制用药基础上 ,治疗组用草分枝杆菌疫苗 1mL ,im ,biw ,共 8wk ;对照组维持原来治疗。结果 :治疗组经治疗后白天和夜间哮喘发作次数减少 ,每天吸入沙丁胺醇量减少 ;1秒钟用力呼气量升高 ;血中嗜酸性粒细胞降低 ;免疫球蛋白IgE降低 ;自然杀伤细胞活性升高 ;白细胞介素 4降低 ;干扰素 γ升高。与治疗前比较 ,上述指标均有统计学意义 (P <0 0 5 )。对照组治疗前后上述指标均无明显变化。结论 :草分枝杆菌疫苗是有效的免疫调节剂 ,能调节Th1/Th2的平衡 。

表达幽门螺杆菌外膜蛋白的重组耻垢分枝杆菌疫苗菌对小鼠的免疫保护作用

为研究含pLAO的重组耻垢分枝杆菌疫苗(Recombinant Mycobacterium smegmatis,rM.S)对小鼠的保护作用。将重组耻垢分枝杆菌疫苗pLAO(MS)2×107灌胃免疫接种BALB/c小鼠,同时设PBS组、耻垢分枝杆菌空菌组,免疫4周后,各组处死一批小鼠,取胃组织待用;余下的小鼠用幽门螺杆菌标准株(Helicobacter pylori SS1,Hp SS1)攻击2次,4周后处死小鼠,进行胃组织快速尿素酶试验、Hp培养、炎症程度及其炎症活动度评分,以评价疫苗对胃黏膜Hp感染的免疫保护作用,ELISA检测Hp特异性血清IgG和IgA水平。结果表明疫苗组Hp定植评分均明显低于PBS组和空菌组,疫苗组不仅可以降低Hp的定植,而且能减轻Hp造成的小鼠胃黏膜的局部慢性炎症反应。免疫后BALB/c小鼠特异性抗体显示rM.S疫苗诱导的Hp特异性血清IgG、IgA水平都升高。因此rM.S疫苗经灌胃接种BLAB/c小鼠能降低Hp定植,减轻胃黏膜的炎症反应,对Hp感染有明显的预防保护作用。

无细胞耻垢分枝杆菌疫苗对豚鼠的长期毒性研究

目的:观察无细胞耻垢分枝杆菌疫苗对豚鼠的长期毒性。方法:48只豚鼠随机均分成无细胞耻垢分技杆菌疫苗低、中、高剂量组(疫苗用量分别为50,250和500μg·kg-1)和阴性对照组,每周1次,连续7周肌内注射疫苗,阴性对照组给予等体积的生理氯化钠溶液。在实验前、中、末期(n=12)和恢复期(n=4)观察动物体重、白蛋白和球蛋白比值、抗疫苗抗体IgG和总IgE的含量;在实验末期和恢复期对豚鼠作病理组织学检查和骨髓细胞学检查。结果:阴性对照组豚鼠抗疫苗抗体IgG始终为阴性,疫苗组豚鼠注射疫苗后抗疫苗抗体IgG阳转;各组豚鼠在整个实验过程中体重稳定增加,白蛋白和球蛋白比值未见明显改变,血清IgE均为阴性;各脏器未见病理性损害和免疫复合物沉积,各脏器系数与阴性对照组比较未见统计学差异;骨髓各系造血细胞未见抑制现象。结论:无细胞耻垢分枝杆菌疫苗对豚鼠无长期毒性。

无细胞耻垢分枝杆菌疫苗对结核杆菌感染者的预防作用研究

目的初步探讨无细胞耻垢分枝杆菌疫苗对结核杆菌感染者的预防作用。方法1.动物实验:将结核杆菌感染的豚鼠随机分为不同剂量的无细胞耻垢分枝杆菌疫苗组(A组:7.0μg/次,B组:35.0μg/次)和阴性对照组(C组),观察疫苗对豚鼠PPD皮肤反应、病变指数和活菌负荷的影响。2.人体试验:将31名PPD皮试强阳性者随机分为不同剂量的无细胞耻垢分枝杆菌疫苗组(D组:8.7μg/次、E组:17.5μg/次、F组:35.0μg/次),观察受试者注射疫苗前后PPD皮肤反应情况。结果1.动物实验:A、B、C组豚鼠PPD皮肤反应强度依次为(9.87±3.36、7.04±3.09、12.67±1.47)mm,A组、B组和C组比较,均有极显著性差异(P<0.01);A、B、C组豚鼠病变指数依次为34.6±13.7、29.6±12.3、49.6±16.7,A组、B组和C组比较,均有显著性差异(P<0.05);A、B、C组豚鼠脾脏分离的结核杆菌对数值依次为4.32±1.58、4.00±1.39、4.94±0.41,B组和C组相比有显著性差异(P<0.05)。2.人体实验:D、E、F组受试者注射疫苗前PPD皮试结果依次为(36.1±4.5、34.0±3.6、33.5±3.1)mm,注射疫苗后PPD皮试结果依次为(20.6±0.6、16.0±1.6、17.82±1.2)mm,各组注射疫苗前后PPD皮试结果比较均有显著性差异(P<0.05)。结论无细胞耻垢分枝杆菌疫苗对结核杆菌感染者有较好的预防效果。

母牛分枝杆菌疫苗对癌性胸腔积液的治疗作用

癌性胸腔积液是晚期原发性肺癌的常见并发症.其特点是生长快、化疗难、效果差,从而影响患者的心肺功能和生存质量.为了探讨治疗原发性肺癌所致胸水的理想方法,1999年7月至2003年7月,我们选择化疗药物联合母牛分枝杆菌疫苗胸腔内注射治疗原发性肺癌所致胸腔积液,获得了良好效果.现报告如下.

耻垢分枝杆菌疫苗经灌胃免疫在小鼠体内的分布与安全性研究

目的探讨携带编码幽门螺杆菌UreB基因质粒(pLUB)的重组耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis,M.s)经灌胃免疫在小鼠体内的分布和安全性。方法将携带绿色荧光蛋白(GFP)基因质粒(pLUB)的重组耻垢分枝杆菌灌胃BALB/c小鼠后8周,处死小鼠,观察胃、心、肝、脾、肺和肾组织中荧光蛋白的分布,测定小鼠肌酐及ALT;处死小鼠,分离出肺、肾、肝并分别测定其重量及HE染色。结果在BALB/c小鼠胃、脾组织中均检测到绿色荧光蛋白的表达,其他组织及对照组未检测到绿色荧光;小鼠体质量、各脏器质量、各血清肌酐和ALT含量与对照组无差异(P>0.05)。结论携带GFP的重组耻垢分枝杆菌可在胃和脾组织分布,对小鼠无系统毒性作用。

胸腔注射母牛分枝杆菌疫苗治疗肺癌胸膜腔积液28例

AIM To explore the effects of cow bacillus vaccine on pleural cavity dropsy caused by lung cancer. METHODS Twenty eight cases of cancriform othorax cavity dropsy caused by lung cancer were divided into the treatment group and the control one at random with multi center division method,the treatment group was infused with cow bacillus vaccine 1000 μg into the thorax cavity 2 3 times, the control one was infused with boleymycine 60 mg 2 3 times, both of which were conducted systamic chemiotherapy. RESULTS Total effective rate of the treatment group was, and the effective rate of the treatment one was , which were higher than those of the control group ( P <0.05). CONCLUSION Cow bacillus vaccine can be used to treat locally cancriform pleural cavity dropsy.

母牛分枝杆菌疫苗与乙肝疫苗联合免疫对慢性乙肝患者效果观察

目的:用母牛分枝杆菌疫苗联合乙肝疫苗免疫慢性乙肝患者,观察乙肝患者免疫水平的变化。方法:将慢性乙肝患者随机分成对照组和试验组,试验组按0、1、2免疫程序,在不同部位同时接种22.5μg母牛分枝杆菌疫苗和10μg酵母乙肝疫苗,对照组接种疫苗稀释液。于免疫前后分别采血,对其CD3+CD4+、CD3+CD8+和淋巴细胞进行计数。结果:试验组与对照组之间CD3+CD4+、CD3+CD8+、淋巴细胞、CD3+CD4+/CD3+CD8+之数值比较有显著性差异。结论:母牛分枝杆菌疫苗联合乙肝疫苗免疫慢性乙肝患者,能够提高其细胞免疫的应答能力。

草分枝杆菌疫苗辅助治疗耐多药肺结核临床及免疫功能观察

目的 :观察草分枝杆菌疫苗对耐多药肺结核辅助治疗的临床疗效。方法 :采用配对的方法将 60例耐多药肺结核患者分为 :化疗 +草分枝杆菌疫苗组 ( M组 )及单纯化疗组 ( C组 )。 M组除化疗外 ,给予草分枝杆菌疫苗 :1 7.2μg,1次 /周 ,臀深部肌肉注射 ,共 1 0次。结果 :M组痰菌阴转率、病灶吸收率、空洞直径缩小率分别为 60 %、80 %、5 0 .2 % ,明显高于 C组的 30 %、47%、1 1 % ( P<0 .0 1 )。细胞免疫学指标 CD3+ 、CD4 + 、CD4 + /CD8+ 、IFN-γ、IL - 2水平比治疗前明显提高 ( P<0 .0 1 )。结论 :M组比 C组对耐多药肺结核患者治疗可改善患者细胞免疫功能 。

母牛分枝杆菌疫苗联合生长激素改善AIDS患者免疫重建不良的效果研究

目的 研究母牛分枝杆菌疫苗联合生长激素改善获得性免疫缺陷综合征(AIDS)患者免疫重建不良的效果。方法 选取患者135例作为研究对象,随机分为4组,A组肌肉注射母牛分枝杆菌疫苗,B组肌肉注射重组人生长激素,C组采用安慰剂治疗,D组肌肉注射母牛分枝杆菌疫苗+重组人生长激素。疗程为48周,治疗后分别检测各组患者体内静脉血纯真T细胞、调节性T细胞(Treg)、总CD4^(+)T细胞、Th1细胞、Th2细胞、白细胞介素-7(IL-7)细胞因子水平变化。结果 A组、B组和D组中,AIDS患者体内总CD4^(+)T细胞、Th1细胞、纯真T细胞水平增加,IL-7细胞因子、Treg、Th2细胞水平下降,差异均有统计学意义(P<0.05),C组无变化。A组与B组Th1细胞下降幅度比较,差异有统计学意义(P<0.05);A组与D组各项指标比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 母牛分枝杆菌疫苗可改善AIDS患者免疫重建不良状态,疗效与重组人生长激素相当,但费用更低。

分枝杆菌疫苗联合标准抗痨化疗治疗HIV阳性肺结核患者的效果分析

作者采用分枝杆菌疫苗(SRL172)与标准抗痨化疗联合治疗HIV阳性肺结核患者,旨在通过以下机制加强抗痨治疗的效果和降低死亡率:恢复宿主对分枝杆菌抗原的识别和促进Th1对抗原的应答;减少CD8^+细胞毒性T淋巴细胞;下调能产生IL-4和IL-5的T细胞比例,以达到阻断免疫病理机制对组织的损伤和增加胞内杀菌的效果,提高治愈率。

母牛分枝杆菌疫苗预防结核病的细胞免疫学和安全性研究

目的评价正常人群接种母牛分枝杆菌疫苗的安全性和细胞免疫学效果，探讨母牛分枝杆菌疫苗用于大龄儿童加强免疫，预防结核病的可行性。方法随机选择5～7岁的健康儿童，先进行结核菌素纯蛋白衍生物（TB-PPD）试验，然后分成TB-PPD试验阳性组和阴性组，每组分别接种母牛分枝杆菌疫苗3针，每针间隔2周。分别采集接种前和接种后1个月的血标本，用流式细胞仪检测各项细胞免疫学指标，观察两组免疫前后细胞免疫学指标的变化情况和接种后不良反应的发生率。结果观察300人次的接种，未发现任何不良反应。TB-PPD试验阴性组免疫前后淋巴细胞、Th细胞（CD4）、Ts细胞（CIX）、T细胞数均比免疫前显著增加，差异有显著的统计学意义。90％的TB-PPD试验阴性者细胞数的增长≥2个标准差，增长率92％～96％。TB-PPD试验阳性者免疫前后淋巴细胞数、Th细胞数均比接种疫苗前增加，差异有显著的统计学意义。TB-PPD试验阳性组免疫前后呈现出良好的双向免疫调节功能，淋巴细胞数、Th细胞数的增长率近70％，且增长幅度在1个标准差左右。结论对TB-PPD试验阴性或阳性者进行母牛分枝杆菌疫苗接种，均显示了较好的安全性和细胞免疫学效果，因此探讨用母牛分枝杆菌疫苗预防结核病，尤其是用于大龄儿童及青少年免疫预防有非常积极的意义。

猪带绦虫TSOL18重组耻垢分枝杆菌疫苗诱导小鼠免疫应答

目的观察猪带绦虫TSOL18重组耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis,MS)疫苗免疫小鼠诱导产生的体液和细胞免疫应答。方法SPF级昆明小鼠60只(18~22 g,雌雄各半),采用随机数字表法分为3组,每组20只,分别为重组MS-TSOL18疫苗组、MS对照组、磷酸盐缓冲液(PBS)对照组。采用口服灌胃法免疫2次,间隔2周。于免疫后0、2、4、6、8周,每周4只小鼠眼眶静脉取血,分离血清,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测小鼠血清IgG与IgG2a水平;无菌取脾,制备脾淋巴细胞悬液,采用CCK-8法检测脾淋巴细胞经特异性抗原刺激后增殖水平,采用ELISA法检测小鼠脾淋巴细胞经特异性抗原刺激后产生白细胞介素(IL)-2和IL-4的水平。结果与MS对照组(IgG:0.160 ± 0.019、0.187 ± 0.038、0.193 ± 0.050、0.170 ± 0.005,IgG2a:0.213 ± 0.010、0.198 ± 0.012)和PBS对照组(IgG:0.159 ± 0.015、0.184 ± 0.029、0.191 ± 0.025、0.165 ± 0.018,IgG2a:0.198 ± 0.032、0.178 ± 0.025)比较,重组MS-TSOL18疫苗组小鼠血清特异性IgG水平(0.310 ± 0.034、0.391 ± 0.029、0.443 ± 0.030、0.373 ± 0.021)在免疫后2、4、6、8周升高(P均< 0.05),lgG2a水平(0.446 ± 0.056、0.339 ± 0.026)在免疫后6、8周升高(P均< 0.05),6周时均达峰值。抗原刺激后,与MS对照组和PBS对照组比较,重组MS-TSOL18疫苗组小鼠脾淋巴细胞增殖水平在免疫后2、4、6、8周升高(P均< 0.05),在6周时达峰值。抗原刺激后,与MS对照组和PBS对照组比较,重组MS-TSOL18疫苗组小鼠脾淋巴细胞培养上清液中IL-2和IL-4水平均在免疫后2、4、6、8周升高(P均< 0.05),分别在6周和4周时达峰值。结论猪带绦虫TSOL18重组MS疫苗免疫可诱导小鼠产生体液和细胞免疫应答。

猪带绦虫TSOL18重组耻垢分枝杆菌疫苗的构建及其表达

目的构建猪带绦虫TSOL18重组耻垢分枝杆菌疫苗,分析猪带绦虫TSOL18基因在重组耻垢分枝杆菌中的表达情况。方法采用PCR方法从重组质粒pGEX-TSOL18中扩增TSOL18基因,克隆入pMV361载体,构建pMV361-TSOL18穿梭质粒,经酶切和测序鉴定后电穿孔法转化入耻垢分枝杆菌,进行单克隆菌落筛选及PCR鉴定。构建的猪带绦虫TSOL18重组耻垢分枝杆菌疫苗经热诱导后,以SDS-PAGE分析及Western blot分析TSOL18基因在重组耻垢分枝杆菌中的表达情况。结果成功扩增出TSOL18目的基因,大小约为393 bp,与预期值相符;经酶切验证,pMV361-TSOL18穿梭质粒构建成功;PCR鉴定猪带绦虫TSOL18重组耻垢分枝杆菌疫苗构建成功。SDS-PAGE电泳检测重组菌表达的目的蛋白TSOL18,相对分子质量为15×10^3与预期相符;Western blot分析该蛋白能被TSOL18兔抗血清识别。结论成功构建了猪带绦虫TSOL18重组耻垢分枝杆菌疫苗,猪带绦虫TSOL18基因在耻垢分枝杆菌中成功表达,表达蛋白具有反应原性,其免疫原性有待进一步研究。

结核病免疫研究进展

结核病的免疫是由T淋巴细胞所介导的细胞免疫反应。研究表明 ,多种细胞因子(CK)参与结核病的免疫反应 ,Th1型CK主要激活单核巨噬细胞 ,增强其杀灭结核分枝杆菌的活力 ,从而在结核分枝杆菌感染中起着保护性免疫应答作用。Th2型CK抑制Th1型CK如γ 干扰素的产生 ,降低巨噬细胞杀灭结核菌的能力 ,从而削弱结核病保护性免疫应答。此外 ,不少前炎症CK也参与结核病病理性免疫过程 ,引起组织损伤、空洞形成 ,发热等全身症状。结核病的免疫治疗已取得了一定的进展 ,不少CK及其受体或受体拮抗剂可增加Th1型CK的分泌 ,减少Th2型CK的表达 ;母牛分枝杆菌疫苗则能使机体免疫反应从Th2型向Th1型偏移 。

BCG感染巨噬细胞后内质网应激对细胞焦亡的调控作用

旨在探讨牛分枝杆菌疫苗株卡介苗(Bacillus Calmette-Guérin,BCG)感染人单核巨噬细胞THP-1细胞后内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)对细胞焦亡的调控作用及分子机制。在BCG单独感染THP-1细胞或与ERS抑制剂TUDCA共处理细胞后,采用qRT-PCR检测ERS标志性分子GRP78,细胞焦亡标志性分子GSDMD、Caspase1、NLRP3、IL^(-1)β和IL^(-1)8在mRNA水平的表达,采用Western blot检测GRP78、Caspase12、GSDMD、Caspase1和NLRP3在蛋白水平的表达,采用ELISA检测IL^(-1)β和IL^(-1)8的释放量,采用CCK-8检测细胞存活率。结果表明:在BCG单独感染THP-1细胞不同时间后,GRP78在mRNA水平和蛋白水平的表达均随感染时间延长而升高(P<0.01),GSDMD蛋白表达在24 h达到最高,IL^(-1)β和IL^(-1)8在mRNA水平的表达呈时间依赖性(P<0.01)。在BCG单独感染或与TUDCA共同作用细胞24 h后,与未感染对照组相比,BCG感染组GRP78、GSDMD、Caspase1、NLRP3、IL^(-1)β和IL^(-1)8 mRNA水平表达上调(P<0.05),GRP78、Caspase12、GSDMD、Caspase1和NLRP3蛋白水平表达上调(P<0.001),IL^(-1)β和IL^(-1)8的浓度增加(P<0.01),细胞存活率下降(P<0.001),而经TUDCA预处理的BCG感染组与BCG单独感染组相比,以上分子的表达下降,细胞存活率上升(P<0.01)。综上表明,在BCG感染THP-1细胞后,引起的ERS对细胞焦亡具有调控作用。