快速杂交法定量检测HBV DNA及临床应用

目的:介绍一种快速定量检测HBV DNA的方法及临床初步应用。方法:对40例乙型肝炎病毒表面抗原阳性的慢性乙型肝炎患者共79份血清标本,采用Digene第二代杂交捕获试验(Hybrid Capture Ⅱ,HC Ⅱ,v2.0)定量检测HBVDNA,并与分枝链DNA信号扩增试验(bDNA,v1.0)作比较。结果:79份HBsAg阳性血清中,HC Ⅱ检出HBV DNA 57份(72.2％),bDNA法为45份(57％),HC Ⅱ敏感性略高于bDNA法;2种方法定量检测HBV DNA的符合率为85.9％,相关性良好(r=0.95);19例抗病毒治疗乙肝患者,治疗后平均HBV DNA载量下降2(Log10)数量级,6例发生e抗原血清转换的患者平均HBV DNA载量下降3(Log10)数量级以上,且HBV DNA阴转早于e抗原血清转换。结论:HC Ⅱ比bDNA更为简便、经济、快速,可用于临床HBV DNA水平的定量检测、监控及抗病毒药物的筛选、考核。

二种分子杂交技术定量检测临床标本中HBV DNA的比较

目的 第 2代核酸杂交捕获系统 (HCⅡ )与分枝链DNA信号放大系统 (bDNA)定量检测HBVDNA的临床应用比较。方法 4 0例乙型肝炎病毒表面抗原阳性的慢性乙型肝炎患者临床血清标本共 79份 ,采用 2种杂交方法定量检测HBVDNA。结果 HCⅡ与bDNA定量检测HBVDNA的阴阳性符合率为 85 .9% ,相关系数r =0 .96 ,P <0 .0 0 1;经敏感性比较 ,HCⅡ灵敏度较bDNA提高 10 1拷贝 /ml～ 10 2 拷贝 /ml。HCⅡ与bDNA定量检测HBVDNA结果的换算方程为 :HCⅡ (HBVDNA拷贝 /ml) =1.0 14×〔bDNA (HBVDNAEq/ml)〕0 .963 2 ;或bDNA (HBVDNAEq/ml) =4 .0 34×〔HCⅡ (HBVDNA拷贝 /ml)〕0 .9574。在操作上HCⅡ比bDNA更为简便、快速。结论 HCⅡ与bDNA法检测HBVDNA具有较好的相关性 ,可用于临床HBVDNA水平的定量检测、监控及抗病毒药物的筛选、考核。

串联重复信号放大系统检测HBV DNA与其他方法的比较研究

目的探讨TRSE液相杂交法检测HBVDNA的临床应用价值。方法先用TRSE法、斑点杂交法、定性PCR法及荧光定量TaqmanPCR法分别检测倍比稀释的标准HBVDNA质粒,比较其敏感性;再用355份血清标本对各个方法的敏感性、特异度、结果的符合率等做进一步的比较分析。结果荧光定量PCR法的敏感性最高,达到1.33×104copy/ml;普通PCR法的敏感性为5.15×104copy/ml;TRSE法的敏感性为8.33×104copy/ml较斑点杂交法的6.25×105copy/ml高。在HBsAg+HBeAg阳性组,TRES液相杂交法的阳性率与普通PCR法无差别;在HBsAg(+)/HBeAg(-)组,TRSE液相杂交法只与荧光定量TaqmanPCR法有差别。结论TRSE杂交法能够区分在HBeAg阳性和阴性组HBVDNA复制的差别;它具有敏感性、特异度高,实用性强等特点,是一种较好的HBVDNA检测方法。