黄连化浊胶囊对分泌及Ras相关GTP酶1A敲除诱导的外被蛋白Ⅱ功能障碍胰岛β细胞内质网应激的干预效果

目的考察黄连化浊胶囊对分泌及Ras相关GTP酶1A(sar-1A)敲除诱导的外被蛋白Ⅱ(COP-Ⅱ)功能障碍胰岛β细胞内质网应激的干预效果。方法将小鼠胰岛β细胞Min6分为空白组(Min6细胞无任何干预)、阴性对照(NC)组(Min6细胞转染sar-1A-NC-siRNA)及sar-1A siRNA组(Min6细胞转染sar-1A siRNA)。收集sar-1A siRNA转染的Min6细胞,分为空白血清组(用含10%大鼠空白血清的培养基培养),5%、10%、20%黄连化浊胶囊组(分别用含5%、10%、20%黄连化浊胶囊含药血清的培养基培养),以及罗格列酮组(用含10%罗格列酮含药血清的培养基培养)。采用qPCR检测Min6细胞中sar-1A miRNA的表达、免疫荧光法检测sec31蛋白的表达,蛋白质印迹法检测胰岛素原、磷酸化真核翻译起始因子2α(p-eIF2α)、C/EBP同源蛋白(CHOP)、X盒结合蛋白1(XBP1)、肌醇需求酶1(IRE1)、X盒(X-box)蛋白的表达。结果空白组与NC组Min6细胞中sar-1A mRNA、sec31蛋白及胰岛素原、p-eIF2α、CHOP、XBP1、IRE1、X-box蛋白表达差异均无统计学意义(P均>0.05);与NC组相比,sar-1A siRNA组Min6细胞中sar-1A mRNA、sec31蛋白及胰岛素原和X-box蛋白表达均降低(P均<0.05),p-eIF2α、CHOP、XBP1、IRE1蛋白表达均升高(P均<0.05)。与空白血清组相比,5%、10%、20%黄连化浊胶囊组及罗格列酮组Min6细胞中sar-1A mRNA表达均升高(P均<0.05),5%、10%、20%黄连化浊胶囊组Min6细胞中sar-1A mRNA表达逐渐升高,各组间差异均有统计学意义(P均<0.05)。空白血清组与5%黄连化浊胶囊组Min6细胞中sec31蛋白及胰岛素原、p-eIF2α、CHOP、XBP1、IRE1、X-box蛋白表达差异均无统计学意义(P均>0.05);与5%黄连化浊胶囊组相比,10%、20%黄连化浊胶囊组及罗格列酮组Min6细胞中sec31蛋白和胰岛素原表达均增加(P均<0.05),p-eIF2α、CHOP、XBP1、IRE1、X-box蛋白表达均降低(P均<0.05)。结论sar-1A敲除后胰岛β细胞存在COP-Ⅱ功能障碍,黄连化浊胶囊能够降低sar-1A敲除后胰岛β细胞的内质网应激水平。

三结构域蛋白8、Ras相关蛋白35、多聚ADP核糖聚合酶1在子宫内膜癌组织中的表达及检测临床意义

目的:探讨三结构域蛋白8(TRIM8)、Ras相关蛋白35(Rab35)、多聚ADP核糖聚合酶1(PARP-1)在子宫内膜癌(EC)组织中的表达及检测临床意义。方法:选择75例EC患者为研究对象,取手术切除的EC组织及癌旁正常子宫内膜组织,以免疫组织化学法检测EC组织和癌旁组织中TRIM8、Rab35、PARP-1蛋白表达情况,并结合患者临床病理因素分析其与临床病理特征的关系,随访5年,记录EC患者生存率,并分析EC患者预后影响因素。结果:Rab35、PARP-1蛋白在EC组织和癌旁组织中阳性表达率分别为71.00%和35.00%、74.00%和43.00%,TRIM8蛋白阳性表达率分别为30.00%和69.00%(均P<0.01)。EC组织中Rab35与PARP-1为正相关性,Rab35和PARP-1与TRIM8表达为负相关性(r=0.542、-0.461、-0.461,均P<0.05)。Rab35阳性患者5年生存率55.17%低于阴性患者70.57%,PARP-1阳性患者5年生存率65.96%低于阴性患者79.24%,TRIM8阳性患者5年生存率93.33%高于阴性患者72.73%(均P<0.05)。FIGO分期Ⅲ-Ⅳ期、肌层浸润深度≥1/2和PARP-1、TRIM8、Rab35表达异常为影响EC患者预后的危险因素(均P<0.05)。结论:子宫内膜癌组织PARP-1、Rab35表达升高、TRIM8表达降低,三者表达变化与子宫内膜癌的发生、发展有显著相关性。

子宫内膜样腺癌中具有IQ结构域的人RasGTP激活蛋白相关蛋白1和E-cadherin的表达及临床意义

目的检测子宫内膜样腺癌术后组织中具有IQ结构域的人Ras GTP激活蛋白相关蛋白(IQGAP)1、上皮型黏附蛋白(E-cadherin)的表达,分析二者的临床意义及相关性。方法子宫内膜样腺癌患者术后组织63例为观察组,子宫肌瘤术后留取的非肿瘤性子宫内膜组织35例为对照组。应用免疫组化法检测两组IQGAP1和E-cadherin的表达。结果两组IQGAP1和E-cadherin表达阳性率差异有统计学意义。观察组IQGAP1和E-cadherin表达与淋巴结转移相关,IQGAP1表达与肿瘤肌层浸润、细胞增殖指数相关。二者阳性率与年龄及分化程度无明显相关,二者阳性表达呈负相关。结论子宫内膜样腺癌中IQGAP1和E-cadherin异常表达且具有负向协同作用,共同促进肿瘤的形成和进展。

免疫相关GTP酶M1在脓毒症诱导脑损伤小鼠皮质神经元细胞自噬中的作用

目的:探讨免疫相关GTP酶M1(immune-related GTPase M1,IRGM1)在脓毒症诱导脑损伤(sepsis-induced brain injury,SIBI)小鼠皮质神经元细胞自噬中的作用。方法:将野生型和IRGM1基因敲除小鼠各60只分为野生型假手术(sham-operated wild-type,SWT)组、野生型模型(model wild-type,MWT)组、基因敲除假手术(sham-operated knockout,SKO)组和基因敲除模型(model knockout,MKO)组。模型组行小鼠盲肠结扎穿孔术(cecal ligation and puncture,CLP),CLP后6 h行神经行为学评分,如神经生物学低于6分,诊断为SIBI;假手术组只打开腹腔,未行CLP。采用HE染色观察小鼠大脑皮质区病理学改变;电子显微镜下观察小鼠皮质神经元细胞自噬的超微结构;实时定量PCR检测IRGM1和INF-γm RNA在小鼠大脑皮质组织中的表达;Western印迹检测小鼠大脑皮质组织微管相关蛋白1轻链3(LC3)-II,LC3-I,SQSTM1,IRGM1的蛋白相对表达量;免疫荧光法观察IRGM1在小鼠大脑皮质神经元中的表达。结果:电子显微镜显示,与SWT组比较,MWT组在CLP后12或24 h小鼠皮质神经元内质网扩张、线粒体肿胀、自噬体数量增加。Western印迹结果显示,CLP后6 h小鼠大脑皮质组织LC3-II表达开始增加,高表达维持至CLP后96 h,相反,SQSTM1在CLP后6 h开始下降。与SWT组比较,MWT组在CLP后12 h小鼠大脑皮质组织中IRGM1的m RNA和蛋白表达水平明显上调,同时,IFN-γ的m RNA表达也明显增加(P<0.05)。双色免疫荧光检测结果显示,CLP后24 h,与SWT组比较,MWT组小鼠皮质神经元中IRGM1表达明显上调。SWT组和SKO组小鼠大脑皮质细胞中自噬活性的基线水平相当低,几乎无LC3-II的表达,而SQSTM1表达均很高。但是,CLP后12 h,MWT组LC3-II表达明显升高,SQSTM1表达下调(P<0.05),而IRGM1基因敲除的MKO组小鼠大脑皮质组织中几乎无LC3-II,SQSTM1的表达明显上调。CLP后6 h,MWT组SIBI发生率90%(27/30),MKO组发生率96.67%(29/30)。CLP后12 h,MKO组小鼠神经生物学评分明显低于MWT组(4.97±0.71 vs 5.43±0.86;t=2.284,P=0.026)。小鼠大脑皮质HE染色显示,与MWT比较,MKO组小鼠脑皮质损伤严重,神经细胞数量明显减少。结论:SIBI时IRGM1表达对小鼠大脑皮质神经元损伤具有一定的保护作用,其机制可能与其调节小鼠大脑皮质神经元细胞自噬有关。

胃癌RASSF1A基因启动子CpG岛甲基化与DNMT1表达的意义

目的探讨RAS相关区域家族1A(RASSF1A)基因启动子CpG岛甲基化和DNA甲基转移酶1(DN-MT1)的表达与胃癌发生的关系。方法运用甲基化特异性聚合酶链反应和免疫组织化学方法检测胃癌癌旁正常组织和癌组织RASSF1A基因启动子CpG岛甲基化发生率及DNMT1的表达情况。结果癌旁正常组织中RASSF1A基因启动子CpG岛甲基化发生率、DNMT1阳性表达率显著低于相应癌组织(P均<0.01)。RASSF1A启动子CpG岛甲基化患者DNMT1阳性表达率与非甲基化患者比较无统计学差异(P>0.05)。结论RASSF1A基因启动子区CpG岛甲基化和DNMT1的高表达可能与胃癌发生有一定关系。

非小细胞肺癌患者血浆 RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO 基因甲基化状态观察

目的观察非小细胞肺癌(NSCLC)患者血浆抑癌基因runt相关转录因子3(RUNX3)、ras相关结构域家族基因1A(RASSF1A)、3-0-硫基转移酶-2(3-OST-2)、死亡相关蛋白激酶(DAPK)、膜结合受体型蛋白酪氨酸磷酸酶O(PTPRO)等基因启动子区域的甲基化状态。方法采用甲基化特异PCR技术对63例NSCLC患者血浆中RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO基因是否甲基化进行观察,并以25例健康人作对照。结果 NSCLC患者血浆中甲基化RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO基因检出率分别为46.0%、50.8%、26.9%、34.9%、41.3%;健康人血浆中甲基化PTPRO基因检出率为12.0%,而甲基化RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK均未检出;两者甲基化RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO基因检出率相比,P均<0.05。NSCLC患者血浆中上述5种甲基化基因联合检测的敏感度为88.9%、特异度为88.0%。血浆甲基化RUNX3基因检出率与NSCLC的病理类型、临床分期以及分化程度有关(P均<0.05);甲基化RASSF1A基因检出率与NSCLC的分化程度有关(P<0.05)。结论 NSCLC患者血浆中甲基化RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO基因检出率明显高于健康人。联合检测血浆中甲基化RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO基因有可能会有助于NSCLC的早期诊断及其生物学行为的判断。

RASSF1A、CK19和p53在甲状腺良恶性病变中的表达及临床意义

目的探讨Ras相关区域家族1A(RASSF1A),细胞角蛋白19和p53基因产物在甲状腺乳头状癌及良性病变中的表达及临床意义。方法采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测,41例甲状腺乳头状癌、19例结节性甲状腺肿、35例甲状腺腺瘤和5例桥本氏病患者标本中RASSF1A、细胞角蛋白19和p53基因的表达情况。结果 RASSF1A、CK19和p53阳性表达率甲状腺乳头状癌与滤泡源性良性病变比较差异有显著性(P<0.05);而各良性病变中其表达率差异无显著性(P>0.05)。半定量结果显示,在甲状腺乳头状癌及良性病变中,上述3种基因产物的mRNA丰度差异性显著(P<0.01)。在甲状腺滤泡源性良恶性病变中RASSF1A与CK19表达呈负相关(γ=-0.3181,P=0.0013);RASSF1A与p53表达呈正相关(γ=0.2364,P=0.0179)。结论 RASSF1A、CK19和p53表达产物可作为鉴别甲状腺乳头状癌与良性乳头状增生的重要参考标记物,联合测定效果更好。

非小细胞肺癌血清MGMT、RASSF2、RUNX3及RASSF1A基因启动子CpG岛甲基化的联合检测及意义

目的探讨非小细胞肺癌患者血清中人类O6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶(MGMT)、RASSF2、人类Runt相关转录因子3、RAS相关区域家族1A基因启动子区域甲基化状况及其临床意义。方法基因测序法检测62例NSCLC患者(肺癌组)和30例肺部良性疾病患者和16例健康体检者(对照组)血清中MGMT、RASSF2、RUNX3、RASSF1A基因启动子区域甲基化状况,并分析目标基因启动子区域甲基化状况与临床特征的关系。结果肺癌组MGMT基因甲基化频率为27.42%(17/62),而对照组为0(0/46)(x2=14.97,P<0.01);MGMT基因甲基化状态与年龄、性别、病理类型和分化状况无明显相关(P>0.05)。甲基化组吸烟指数(620.78±135.34)高于非甲基化组(498.96±150.87)(t=2.91,P<0.05)。MGMT基因甲基化多见于晚期患者,Ⅰ～Ⅱ期甲基化率为0(0/11)而Ⅲ～Ⅳ期为33.33%(17/51)(Fisher精确概率法,P<0.05)。肺癌组RASSF2基因甲基化频率为38.71%(24/62),而对照组为0(0/46)(x2=22.89,P<0.01);NSCLC患者血清RASSF2基因甲基化检出率与年龄、性别、病理类型、临床分期、分化程度无明显相关(P>0.05),不吸烟者RASSF2甲基化率高于吸烟者(61.90%vs26.83%,x2=7.20,P<0.05)。结论 MGMT、RASSF2、RUNX3、RASSF1A等基因异常甲基化在NSCLC患者外周血中有较高的发生率。MGMT、RASSF2、RUNX3、RASSF1A等基因异常甲基化状态可能和患者临床资料有一定关系。MGMT、RASSF2、RUNX3、RASSF1A等基因异常甲基化可能在NSCLC发生、发展中起重要作用。MGMT、RASSF2、RUNX3、RASSF1A等基因异常甲基化状态有望成为NSCLC辅助诊断和预后判断的分子标记。

RASSF1A在胃癌组织中的表达及临床意义

目的研究Ras相关结构域家族(RASSF)1A抑癌基因mRNA在胃癌组织中的表达及其与临床病理参数的关系。方法应用RT-PCR法检测胃癌和癌旁组织中RASSF1A mRNA的表达情况,并以正常胃黏膜组织作对照。结果 RASSF1A mRNA在胃癌组织中的表达缺失率为45.0%(27/60),高于癌旁组织1.7%(1/60)和正常胃黏膜组织0(0/20),P均<0.01;RASSF1A mRNA表达缺失与胃癌TNM分期、浸润深度和淋巴结转移相关,而与年龄、性别、肿瘤大小和分化程度无关。结论胃癌组织中RASSF1A mRNA表达缺失与胃癌发生、进展和转移相关,可作为胃癌诊疗和预后评估的分子标志。

胃癌RASSF1A的表达与幽门螺杆菌感染关系的研究

目的:探讨RAS相关区域家族基因1A(RASSF1A)在胃腺癌中的表达及与幽门螺杆菌(Hp)感染的关系。方法:用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测48例胃癌组织及15例癌旁正常组织中RASSF1A mRNA的表达,用PCR法检测上述胃癌组织中的Hp感染情况。结果:RASSF1A在胃癌组织中转录表达缺失率为50.0%,其表达缺失率与胃癌分化程度、淋巴结转移及TNM分期有一定关系(P<0.05),与其组织学类型无明显关系(P>0.05)。胃癌组织中Hp感染率为62.5%(30/48),RASSF1A的表达缺失与Hp感染组之间无相关性(P>0.05)。结论:RASSF1A是胃癌的相关抑癌基因,RASSF1A的表达缺失与胃癌的临床分期和病理分级具有一定关系,RASSF1A的表达缺失与Hp感染之间无明显关系,它们可能是两个独立的致病因素。

非小细胞肺癌中RASSF6与MST1的表达及病理意义

目的检测RAS相关结构域家族成员6基因(RASSF6)及MST1在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达情况,并探讨二者对NSCLC患者的病理意义。方法利用GEPIA2数据库测定肺腺癌(LUAD)和肺鳞癌(LUSC)中RASSF6和MST1基因表达水平;通过qRT-PCR实验测定NSCLC新鲜组织中RASSF6、MST1 mRNA表达水平;免疫组化法检测石蜡标本中RASSF6、MST1蛋白表达。Spearman探讨二者的相互关系。结果与癌旁正常肺组织比较,NSCLC的RASSF6 mRNA和蛋白表达水平均明显增加(P<0.05),但MST1 mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P<0.05)。RASSF6及MST1蛋白表达均与临床分期、淋巴结转移相关(P<0.05),而与NSCLC患者的年龄、性别、组织分型及分化程度无关(P>0.05);且RASSF6与MST1呈负相关(r_(s)=-0.227,P<0.05)。结论RASSF6和MST1可能与NSCLC的进展有关,有望成为NSCLC患者新的潜在治疗靶点。

改进的亚硫酸氢钠测序法检测HepG2 RASSF1A基因CpG岛甲基化状态

目的改进亚硫酸氢钠测序法,并检验改进后方法在甲基化检测中的可行性。方法提取人肝癌细胞株HepG2基因组DNA,亚硫酸氢钠化学修饰,针对修饰后Ras相关家族1A基因(RASSF1A)启动子序列设计特异引物并结合沉降PCR扩增,T-A载体克隆、测序。结果HepG2细胞RASSF1A基因启动子CpG岛的16个CpG位点均被甲基化。结论改进后亚硫酸氢钠测序法能明显减少非特异性扩增,提高PCR效率,更适于基因甲基化状态的检测。

敲低结肠癌转移相关基因1促进RSL3诱导的结直肠癌细胞铁死亡

目的探讨结肠癌转移相关基因1(MACC1)对RAS选择性致死化合物3(RSL3)诱导的结直肠癌细胞铁死亡的影响及其分子机制。方法体外培养结直肠癌细胞SW620,HCT116,LOVO及RKO细胞,Western blot实验检测细胞中MACC1表达;以SW620细胞为实验材料,MTT法检测不同浓度(0、2.5、5、10、20、40μmol/L)铁死亡诱导剂RSL3以及不同浓度(0、5、10、20μmol/L)铁死亡抑制剂Fer-1对SW620细胞存活率的影响,分析单独使用10μmol/L RLS3以及10μmol/L RLS3和10μmol/LFer-1联合作用对SW620细胞存活率的影响,并检测干扰MACC1后不同浓度RSL3对SW620细胞存活率的影响;实时定量RT-PCR和Western blot法检测不同浓度RSL3(0、2.5、5、10μmol/L)对MACC1在mRNA和蛋白水平的影响,并检测干扰MACC1后GPX4在mRNA和蛋白水平的表达;流式细胞仪及激光共聚焦实验检测干扰MACC1后,SW620细胞中脂质过氧化Lipid ROS水平的变化。结果4种结直肠癌细胞中SW620细胞MACC1表达量最高;铁死亡诱导剂RSL3抑制SW620细胞的存活率,细胞存活率随RSL3浓度升高而降低,呈剂量依赖性;不同浓度的铁死亡抑制剂Fer-1对SW620细胞的存活率没有影响;与对照Ctrl组细胞存活率相比,单独使用RSL3细胞存活率降低了50%(P<0.01),而联合使用RSL3与Fer-1处理SW620细胞,细胞的存活率得到恢复(P>0.05);不同浓度的RSL3作用于SW620细胞后,细胞中MACC1基因在mRNA和蛋白水平被显著抑制(P<0.01),具有一定的药物浓度依赖性。siRNA干扰MACC1基因表达后,增强RSL3对SW620细胞毒作用,并抑制细胞中GPX4的表达(P<0.01),增加细胞中Lipid ROS水平(P<0.05)。结论MACC1通过调控GPX4影响RSL3诱导的结直肠癌细胞铁死亡。

5-氮杂-2’-脱氧胞苷对高糖培养的NRK-52E细胞中分泌型卷曲相关蛋白1表达的影响

目的检测DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)干预肾小管上皮细胞(NRK-52E)后对分泌型卷曲相关蛋白1(Sfrp1)表达变化的影响。方法将SD大鼠随机分为正常组(NC组)和糖尿病肾病组(DN组),DN组建模10周后检测相关生化指标、计算肾脏指数(KI);免疫组化法检测肾组织中Sfrp1的表达;将NRK-52E细胞分为正常糖组(NG,葡萄糖5.5 mmol/L)、高糖组(HG,葡萄糖30 mmol/L)和高糖加5-Aza-CdR组(5-Aza-CdR组,80μmol/L),用Western blot检测Sfrp1、DNA甲基转移酶(Dnmt)3a、Dnmt3b、col-Ⅲ和col-Ⅳ蛋白的表达;RT-qPCR检测Sfrp1 mRNA的表达;Pearson检验分析Sfrp1与Dnmt3a、Dnmt3b、col-Ⅲ及col-Ⅳ的相关性。结果DN组大鼠KI、血糖(BG)、24 h尿蛋白(24 h UP)、肌酐水平均高于NC组。与NC组比,DN组肾组织中Sfrp1表达明显降低。与NG组比,HG组Sfrp1 mRNA和蛋白表达减少(P<0.05),Dnmt3a、Dnmt3b、col-Ⅲ和col-Ⅳ蛋白表达增加(P<0.05);与HG组相比,5-Aza-CdR组Sfrp1 mRNA和蛋白表达增多(P<0.05);Dnmt3a、Dnmt3b、col-Ⅲ和col-Ⅳ蛋白表达减少(P<0.05);Sfrp1与Dnmt3a(r=-0.937,P<0.05)、Dnmt3b(r=-0.965,P<0.05)、col-Ⅲ(r=-0.694,P<0.05)和col-Ⅳ(r=-0.888,P<0.05)均呈负相关。结论5-氮杂-2’-脱氧胞苷可能通过降低Dnmt3a和Dnmt3b表达,进而使Sfrp1表达升高。

溃疡性结肠炎患者血清Rac1、ACE2水平与肠道功能损害的相关性

目的探讨溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)患者血清Ras相关的C3肉毒素底物1(Rac1)、血管紧张素转化酶2(ACE2)水平与肠道功能损害的相关性。方法选取2020年3月至2022年3月驻马店中心医院就诊的UC患者60例为病例组,依据Mayo评分将病例组分为活动期组(36例)、缓解期组(24例),同时以同期健康体检者40例为对照组。分别静脉抽取所有研究对象空腹血液,ELISA法检测血清ACE2水平;q RT-PCR检测血清中Rac1 m RNA水平;同时检测肠道屏障指标(血清二胺氧化酶、细菌内毒素、D-乳酸)水平;采用Pearson法分析UC患者血清中ACE2、Rac1 m RNA水平的相关性以及两者分别与血清二胺氧化酶、细菌内毒素、D-乳酸的相关性。结果与对照组相比,病例组血清中ACE2、Rac1 m RNA水平显著下降,二胺氧化酶、细菌内毒素、D-乳酸水平显著增加(P<0.05);与缓解期组相比,活动期组ACE2、Rac1 m RNA水平显著下降(P<0.05);Pearson法结果显示,UC患者血清中ACE2与Rac1水平呈明显正相关(r=0.390,P<0.05),且分别与二胺氧化酶、细菌内毒素、D-乳酸呈负相关(P<0.05)。结论UC患者血清中ACE2与Rac1水平呈正相关,且分别与肠道屏障指标呈负相关,检测两者水平对于评定肠道功能损害可能具有一定临床价值。

六味补气方对COPD大鼠肺部衰老相关分泌表型及NF-кB/SIRT-1/p53信号通路的影响

目的探究六味补气方对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠肺部衰老相关分泌表型及核因子κB(NF-κB)/沉默信息调节因子相关酶1(SIRT-1)/p53信号通路的影响。方法按随机数字表法,将60只雄性SD大鼠分为正常组、模型组、桂龙咳喘宁组及六味补气低、中、高剂量组,每组10只。除正常组外,其余组大鼠均采用烟熏联合气管滴注脂多糖的方法制备COPD模型。造模成功后,桂龙咳喘宁组给予0.8 mg/kg的桂龙咳喘宁片混悬液灌胃,六味补气低、中、高剂量组分别给予0.27 g/kg、0.52 g/kg、1.05 g/kg的六味补气方混悬液灌胃,正常组和模型组给予等体积生理盐水灌胃,均2次/d,连续灌胃6周。检测肺功能,记录呼气峰流速(PEF)、第0.3秒用力呼气容积(FEV0.3)及FEV0.3与用力肺活量(FVC)比值(FEV0.3/FVC);HE染色观察肺组织病理学形态;ELISA法测定肺泡灌洗液中肿瘤坏死因-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)含量;免疫组化SP法测定肺组织中NF-кB蛋白阳性表达情况;Western blot法检测肺组织中SIRT-1和p53蛋白表达情况。结果与正常组比较,模型组大鼠PEF、FEV0.3、FEV0.3/FVC均明显降低(P均<0.05);大鼠细支气管壁结构发生破坏且管腔变窄,黏膜皱襞脱落,肺泡壁塌陷,肺泡腔发生融合,肺泡腔和肺间质发生炎性浸润;肺泡灌洗液中IL-6、TNF-α含量均明显升高(P均<0.05);肺组织中NF-кB蛋白呈强阳性表达,SIRT-1蛋白相对表达量明显降低(P<0.05),p53蛋白相对表达量明显升高(P<0.05)。与模型组比较,各药物组大鼠PEF、FEV0.3、FEV0.3/FVC均明显升高(P均<0.05);细支气管壁结构和黏膜相对完整,肺泡塌陷和肺泡腔融合在一定程度上有所改善;肺泡灌洗液中IL-6、TNF-α含量均明显降低(P均<0.05);肺组织中NF-кB蛋白阳性表达减少,SIRT-1蛋白相对表达量均明显升高(P均<0.05),p53蛋白相对表达量均明显降低(P均<0.05),其中各指标均以六味补气高剂量组改善最为明显。结论六味补气方可通过上调SIRT-1表达,下调NF-κB和p53蛋白表达,从而抑制衰老相关分泌表型表达进程,减轻炎症反应,延缓COPD的进展。

Rac1、Cdc42在肿瘤方面的研究

近年来对Rho家族蛋白的研究进展很快,其中以RhoA、Rac1、Cdc42最为人们所关注。这些小分子量G蛋白具有GTP酶活性,参与细胞周期调控和基因转录的调节。在调节细胞骨架、细胞运动、细胞凋亡、细胞恶性转化及肿瘤的浸润、转移等方面发挥重要作用。

脑卒中患者血清IL-1β、IL-1Ra、IL-1Ra/IL-1β比值的监测及临床意义

目的:研究白细胞介素1β( IL - 1β)、白细胞介素1受体拮抗剂( IL - 1 Ra)以及IL -1 Ra/IL - 1β比值在脑卒中患者血清中的水平变化以及IL- 1β与IL - 1 Ra水平之间的相关关系。方法:用酶联免疫吸附试验检测了5 5例脑梗死患者、48例脑出血患者和60例对照者血清IL - 1β、IL - 1 Ra和IL- 1 Ra/IL - 1β水平。结果:脑梗死组和脑出血组患者血清IL - 1β水平均显著高于正常对照组( P<0 .0 1 ) ;脑梗死组和脑出血组患者血清IL - 1 Ra以及IL - 1 Ra/IL - 1β水平显著低于正常对照组( P<0 .0 1 ) ;脑梗死组和脑出血组患者血清IL- 1β和IL - 1 Ra水平无明显相关性( P>0 .0 5 )。结论:IL - 1β在脑卒中发病过程中可能起着促进作用,而IL - 1 Ra可能起着抑制作用;两者的免疫失调状态可能与脑卒中密切相关;IL - 1 Ra/IL -

海马RAGE和BACE异常表达与SHR认知功能损害相关性研究

目的:探讨自发性高血压大鼠海马β淀粉样蛋白(Aβ)代谢通路的变化,揭示Aβ代谢通路异常在高血压认知损害中的意义。方法:以SHR和WKY大鼠为研究对象,使用RT-PCR和Western blot方法分别检测SHR及WKY海马RAGE、LRP-1、APP和BACE的mRNA及蛋白质表达水平。结果:与WKY大鼠相比,SHR海马组织RAGEmRNA、BACEmRNA的表达水平明显增高(P<0.05),而APP mRNA表达水平相对降低(P>0.05),LRP-1mRNA表达水平相对增高(P>0.05);与WKY大鼠相比,SHR海马组织RAGE、BACE的表达水平明显增高(P<0.05),而APP和LRP-1表达水平相对增高(P>0.05)。结论:SHR海马RAGE和BACE的mRNA及其蛋白表达水平异常增高,提示Aβ代谢异常可能参与了高血压认知损害的发生机制。

AML和ALL患者骨髓DNMT1,SFRP1基因甲基化及其与临床病理特征和预后相关性研究

目的检测急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)和急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)患者骨髓中DNA甲基化转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)、分泌型卷曲相关蛋白1(secreted frizzled related protein 1,SFRP1)基因甲基化及mRNA表达水平,探讨其与临床病理特征和预后的关系。方法根据FBA(French-American-British classification systems;法-美-英分型系统)标准选取2019年11月~2020年11月于邯郸市中心医院新诊断的急性白血病患者70例,其中AML 50例和ALL 20例;另选取65例非恶性血液病患者作为正常对照组。用甲基化特异性聚合酶链式反应(methylation-specific PCR,MSP)检测所有研究对象骨髓标本中DNMT1和SFRP1基因甲基化状态,并分析两基因甲基化与AML和ALL患者临床参数之间的关系;用实时定量PCR检测所有研究对象化疗前和化疗缓解后骨髓标本中DNMT1,SFRP1和β-catenin mRNA表达;Pearson相关分析明确DNMT1,SFRP1和β-catenin mRNA水平之间的相关性;对所有患者进行随访,比较DNMT1和SFRP1基因甲基化与预后的关系。结果AML和ALL患者中DNMT1基因甲基化发生率分别为26.0%和25.0%,较对照组(73.8%)显著下降(χ^(2)=47.683,P<0.001);SFRP1基因甲基化发生率分别为78.0%和85.0%,较正常对照组(18.5%)显著增加(χ^(2)=55.265,P<0.001),差异均有统计学意义。AML组DNMT1基因甲基化与WBC水平、遗传学预后分组有明显相关性(χ^(2)=6.524,5.732,均P<0.001);SFRP1基因甲基化与WBC水平、BM水平和遗传学预后分组有明显相关性(χ^(2)=8.115,5.395,5.060,均P<0.05)。ALL组DNMT1基因甲基化只与遗传学预后分组有关(χ^(2)=4.802,P<0.05);SFRP1基因甲基化与WBC水平、遗传学预后分组有明显相关性(χ^(2)=4.920,5.115,均P<0.05)。与对照组相比,AML和ALL患者化疗前DNMT1和β-catenin mRNA表达均显著升高(t=4.807~10.456,均P<0.05),SFRP1表达显著下降(t=24.791,12.069,均P<0.05)。与化疗前相比,AML和ALL患者化疗后DNMT1和β-catenin mRNA表达显著下降(t=3.461~6.374,均P<0.05),SFRP1表达显著上升(t=17.076,7.454,P<0.05)。两组患者DNMT1与SFRP1表达呈明显负相关(r=-0.328,-0.315,均P<0.05);SFRP1与β-catenin表达呈明显正相关(r=0.682,0.728,均P<0.05);两组患者DNMT1与β-catenin表达均无明显相关性。两组患者DNMT1基因甲基化生存率高于其未甲基化生存率(χ^(2)=3.862,3.679,均P<0.05);SFRP1基因甲基化生存率低于其未甲基化生存率(χ^(2)=2.927,3.155,均P<0.05)。结论DNMT1和SFRP1基因甲基化与恶性血液病患者临床病理及预后相关,究其原因可能与DNMT1和SFRP1基因甲基化异常激活Wnt/β-catenin信号通路有关。