粪便硫酸类肝素蛋白多糖2与分泌型卷曲相关蛋白2基因甲基化检测在结直肠癌筛查中的应用价值

目的:研究粪便硫酸类肝素蛋白多糖2(SDC2)与分泌型卷曲相关蛋白2(SFRP2)基因甲基化检测在结直肠癌(CRC)筛查中的应用价值。方法:选取CRC患者51例为CRC组。选取同期进展期腺瘤患者61例为进展期腺瘤组,选取同期健康体检者50例为正常对照组。采集所有受试者粪便样本,以甲基化特异性PCR法检测粪便SDC2及SFRP2基因甲基化情况。比较各组粪便SDC2及SFRP2基因甲基化情况。分析粪便SDC2及SFRP2基因甲基化与CRC患者临床病理特征的关系。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析粪便SDC2及SFRP2基因甲基化检测筛查CRC的效能。结果:CRC组患者粪便SDC2及SFRP2基因甲基化率高于进展期腺瘤组和正常对照组,且进展期腺瘤组粪便SDC2及SFRP2基因甲基化率高于正常对照组(均P<0.05)。TNM分期Ⅲ-Ⅳ期CRC患者粪便SDC2及SFRP2基因甲基化率高于Ⅰ-Ⅱ期患者(均P<0.05)。而性别、年龄、病变部位、肿瘤大小以及分化程度均与CRC患者粪便SDC2及SFRP2基因甲基化无相关性(均P>0.05)。ROC曲线分析显示,粪便SDC2及SFRP2基因甲基化单项检测筛查CRC的效能较高,且两者联合检测的效能高于单项检测。结论:粪便SDC2及SFRP2基因甲基化检测有助于筛查CRC,两者联合检测的筛查效能更高。

恶性血液病细胞系分泌型卷曲相关蛋白基因启动子CpG岛甲基化状态的检测及意义

为了研究分泌型卷曲相关蛋白(secreted frizzled-related protein,SFRP)家族基因启动子CpG岛的甲基化状态,探讨SFRP基因启动子区CpG岛的异常甲基化状态与恶性血液病发病机制的可能联系,采用甲基化特异性PCR(Methylation-specific PCR,MSP)的方法检测了9种恶性血液病细胞系及正常人外周血单个核细胞中SFRP基因启动子区的甲基化状态。结果显示:9种恶性血液病细胞系中SFRP1、2基因启动子区均呈高甲基化状态,CA46、HL60和U937细胞中的SFRP4基因以及U266细胞中的SFRP5基因启动子区呈部分甲基化状态,其他细胞系SFRP4、5基因启动子均呈完全甲基化状态。正常人外周血单个核细胞中SFRP1、2、4、5基因启动子区均呈非甲基化状态。结论:SFRP基因启动子区异常甲基化模式与恶性血液病的发生密切相关。SFRP基因启动子区的甲基化状态有可能成为恶性血液病新的分子诊断标记物。

贲门腺癌中分泌型卷曲相关蛋白4、5基因启动子区甲基化状态研究

目的:研究贲门腺癌(gastric cardia adenocarcinoma,GCA)中分泌型卷曲相关蛋白4(secreted frizzled related protein4,SFRP4)及SFRP5基因启动子区甲基化状态与贲门腺癌发生发展的关系。方法:采用甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MSP)方法检测94例GCA组织及47例相应癌旁正常组织中SFRP4和SFRP5基因的甲基化情况,并分析其与临床病理特征之间的关系。结果:94例GCA组织中SFRP4基因甲基化率为68.1%(64/94),显著高于癌旁正常组织中的甲基化发生率8.5%(4/47)(P<0.01);SFRP5基因在贲门腺癌组织中的甲基化发生率为79.8%(75/94),显著高于癌旁正常组织中的甲基化发生率12.8%(16/47)(P<0.01)。SFRP4基因在高、中分化腺癌组甲基化发生率为35%(14/40),显著低于低分化腺癌组的发生率92.6%(50/54)(P<0.01);SFRP4基因在无淋巴结转移组的甲基化发生率为60.5%(23/38),低于有淋巴结转移组73.2%(41/56),但其差异无统计学意义(P>0.05)。SFRP5基因在低分化腺癌组甲基化发生率为85.1%(46/54),高于高、中分化腺癌组甲基化发生率72.5%(29/40),但其差异无统计学意义(P>0.05);SFRP5基因甲基化发生率在无淋巴结转移组为65.8%(25/38),显著低于有淋巴结转移组89.3%(50/56)(P<0.05)。57例贲门腺癌组织中SFRP4和SFRP5基因同时发生甲基化者,高、中分化18例,低分化39例,两者间的差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:SFRP4和SFRP5基因可能参与了贲门腺癌的发生,SFRP4,SFRP5基因的高甲基化状态与贲门腺癌的恶性行为有关。

急性髓系白血病分泌型卷曲相关蛋白5基因启动子区甲基化状态研究

目的研究急性髓系白血病(AML)中WNT信号传导通路拮抗基因分泌型卷曲相关蛋白5(SFRP5)基因的甲基化状态。方法应用甲基化特异性PCR(MSP)法对99例AML患者的骨髓或外周血进行SFRP5基因启动子区甲基化状况检测,并以70例门诊普通病人的外周血作为对照。结果 99例AML患者中检出10例(10.1%)SFRP5的甲基化,70例正常对照中仅检出1例(1.4%)SFRP5的甲基化。SFRP5在AML患者中的甲基化率显著高于正常对照(P<0.05)。SFRP5基因的甲基化状态与年龄、性别无关(P>0.05),与AML的临床分型相关(P<0.05)。结论 SFRP5基因的甲基化与AML有相关性,SFRP5基因的甲基化可能是引起AML的分子机制之一。

大肠癌发生与分泌型卷曲相关蛋白2基因甲基化的关系

异常的Wnt信号通路在90％的大肠癌中是个早期事件，它促成肿瘤细胞的成长、增殖和凋亡。Wnt拈抗物分泌型卷曲相关蛋白（SFRPs）具有抗Wnt／Frizzled（FZ）信号的功能，激活Wnt信号并持续整个大肠癌进展过程。我们应用甲基化荧光定量聚合酶链反应（PCR）分析了大肠癌发生发展过程中SFRP2基因的甲基化状态，并与大肠癌临床病理学特征进行了比较。

分泌型卷曲相关蛋白1基因异常甲基化对食管鳞癌的影响

目的:研究分泌型卷曲相关蛋白1(secreted frizzled-related protein 1,SFRP1)基因启动子区与食管鳞癌的相关性.方法:选取食管鳞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)患者22例为实验组,另同期选取食管良性病变者22例为对照组,提取术前外周血DNA,利用甲基化特异性PCR法(MSP)检测SFRP1基因启动子区域甲基化状态,并分析其与临床病理参数的相关性.结果:在22例食管鳞癌患者中其甲基化阳性例数为8例,甲基化阳性率为36.4%,在22例食管良性病变者中其甲基化阳性例数为2例,甲基化阳性率为9.1%(P<0.05).SFRP1基因甲基化与患者临床病理参数及癌胚抗原(carcino-embryonic antigen,CEA)水平无相关性(P>0.05).结论:血清SFRP1基因启动子区异常甲基化可能参与食管鳞癌的发生,有望成为食管鳞癌临床诊断的新型辅助指标.

肾透明细胞癌中分泌型卷曲相关蛋白1基因甲基化及其表达与亚甲基四氢叶酸还原酶C677T基因多态性的关系

目的探讨人肾透明细胞癌组织中分泌型卷曲相关蛋白1基因(SFRP 1)的甲基化状态及其mRNA表达与亚甲基四氢叶酸还原酶C677T(MTHFR C677T)基因多态性的关系。方法采用PCR-RFLP技术分别检测38例手术切除的肾透明细胞癌区和外周正常肾脏组织标本MTHFR基因677(C→T)多态,并分别以Real-time PCR和和甲基化特异性PCR(MSP)技术检测SFRP 1基因的表达和甲基化状态。结果 SFRP 1基因失表达和/或低表达的肾透明细胞癌组织其启动子区处于高甲基化状态,MTHFR 677CC基因型的肾透明细胞癌组织SFRP 1甲基化升高且其表达降低,SFRP 1的甲基化及其表达与MTHFRC677T基因多态性有明显相关性。结论 MTHFR基因多态性通过影响SFRP 1基因的甲基化状态而调控其表达,可能在肾癌的发生、发展中具有重要作用。

分泌型卷曲相关蛋白2基因启动子区甲基化水平与左侧乳腺癌术后放射治疗早期心脏毒性的相关性分析

目的 探讨分泌型卷曲相关蛋白2(secreted frizzle-related protein 2,SFRP2)基因启动子区甲基化水平与左侧乳腺癌术后放射治疗早期心脏毒性的相关性。方法 选取2017年1月至2021年1月于山东省东营市人民医院进行改良根治术的194例左侧乳腺癌患者为研究对象,根据放射治疗后6个月是否发生心脏毒性将患者分为观察组(发生心脏毒性,41例)和对照组(无心脏毒性,153例)。比较分析两组患者放射治疗后6个月的SFRP2基因甲基化水平、mRNA表达量以及放射治疗前后的左心室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF)、肌钙蛋白I(cardiac troponin I,cTnI)和N末端B型利钠肽前体(N-terminal B-type precursor of natriuretic peptide precursor,NT-proBNP)水平。分析SFRP2基因甲基化水平与LVEF、cTnI、NT-proBNP、mRNA表达量的相关性。结果 放射治疗后6个月,观察组患者SFRP2-1岛、SFRP2-2岛的甲基化水平均显著高于对照组(P<0.05)。放射治疗前,两组患者的LVEF、cTnI、NT-proBNP水平比较差异均无显著性(P>0.05);放射治疗后6个月,观察组患者的LVEF显著低于对照组(P<0.05),cTnI、NT-proBNP水平均显著高于对照组(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,SFRP2-1岛的甲基化水平与LVEF、mRNA表达量呈负相关(r<0,P<0.05),与cTnI、NT-proBNP呈正相关(r>0,P<0.05);SFRP2-2岛的甲基化水平与LVEF、mRNA呈负相关(r<0,P<0.05),与NT-proBNP呈正相关(r>0,P<0.05),但与cTnI无显著相关性(P>0.05)。放射治疗后6个月,观察组患者的SFRP2基因mRNA表达量为1.81±0.16,低于对照组的2.47±0.21,差异有显著性(P>0.05)。结论 SFRP2基因启动子区甲基化水平升高与左侧乳腺癌术后放射治疗早期心脏毒性事件的发生相关,可能成为早期识别放射治疗相关心脏毒性的分子标志物。

5-氮杂-2’-脱氧胞苷对高糖培养的NRK-52E细胞中分泌型卷曲相关蛋白1表达的影响

目的检测DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)干预肾小管上皮细胞(NRK-52E)后对分泌型卷曲相关蛋白1(Sfrp1)表达变化的影响。方法将SD大鼠随机分为正常组(NC组)和糖尿病肾病组(DN组),DN组建模10周后检测相关生化指标、计算肾脏指数(KI);免疫组化法检测肾组织中Sfrp1的表达;将NRK-52E细胞分为正常糖组(NG,葡萄糖5.5 mmol/L)、高糖组(HG,葡萄糖30 mmol/L)和高糖加5-Aza-CdR组(5-Aza-CdR组,80μmol/L),用Western blot检测Sfrp1、DNA甲基转移酶(Dnmt)3a、Dnmt3b、col-Ⅲ和col-Ⅳ蛋白的表达;RT-qPCR检测Sfrp1 mRNA的表达;Pearson检验分析Sfrp1与Dnmt3a、Dnmt3b、col-Ⅲ及col-Ⅳ的相关性。结果DN组大鼠KI、血糖(BG)、24 h尿蛋白(24 h UP)、肌酐水平均高于NC组。与NC组比,DN组肾组织中Sfrp1表达明显降低。与NG组比,HG组Sfrp1 mRNA和蛋白表达减少(P<0.05),Dnmt3a、Dnmt3b、col-Ⅲ和col-Ⅳ蛋白表达增加(P<0.05);与HG组相比,5-Aza-CdR组Sfrp1 mRNA和蛋白表达增多(P<0.05);Dnmt3a、Dnmt3b、col-Ⅲ和col-Ⅳ蛋白表达减少(P<0.05);Sfrp1与Dnmt3a(r=-0.937,P<0.05)、Dnmt3b(r=-0.965,P<0.05)、col-Ⅲ(r=-0.694,P<0.05)和col-Ⅳ(r=-0.888,P<0.05)均呈负相关。结论5-氮杂-2’-脱氧胞苷可能通过降低Dnmt3a和Dnmt3b表达,进而使Sfrp1表达升高。

粪便中SFRP2基因甲基化与大肠癌的相关性

目的探讨粪便中的分泌型卷曲相关蛋白(SFRP)2基因甲基化对大肠癌患者的诊断价值。方法选取2011年12月至2013年12月该院经病理检查确诊的52例大肠癌病人及32例结肠镜阴性的健康者(对照组)。通过亚硫酸氢盐的限制酶法(COBRA)检测大肠癌52例粪便中SFRP2基因启动子两个区域(区域1和区域2)甲基化状态,分析SFRP2基因甲基化与肿瘤临床病理因素的关系。结果大肠癌患者及健康者粪便中广泛甲基化、部分甲基化及无甲基化分别为59.6%(31/52)、84.6%(44/52)、15.4%(8/52)和12.5%(4/32),25.0%(8/32)、75.0%(24/32);广泛和部分SFRP2的甲基化率在大肠癌患者粪便的检出率均明显高于健康体检者(P<0.05);SFRP2基因甲基化与大肠癌患者性别、肿瘤分期、浸润程度无显著关联。结论 SFRP2基因甲基化是大肠癌进展过程中的早期事件,粪便SFRP2基因甲基化有望成为早期无创诊断大肠癌的新途径。

启动子区甲基化和组蛋白乙酰化对人食管鳞癌细胞SFRP1基因表达的影响

目的探讨食管鳞癌(ESCC)细胞株中分泌型卷曲相关蛋白(SFRP)1基因表达与启动子区甲基化和乙酰化的关系。方法采用RT-PCR方法检测SFRP1 mRNA表达,并用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测SFRP1基因启动子区甲基化状态,检测5-氮杂脱氧胞苷(DAC)及曲古抑菌素(TSA)对SFRP1基因核酸表达情况的影响。染色质免疫共沉淀方法检测SFRP1基因启动子区域组蛋白乙酰化状态。结果 ESCC细胞株的甲基化率高于正常细胞株。应用DAC及TSA联合处理ESCC细胞株可恢复SFRP1mRNA表达。ESCC细胞株中SFRP1基因启动子区域存在乙酰化组蛋白H3、H4。结论 ESCC细胞株中存在SFRP1基因高甲基化及组蛋白乙酰化。启动子区甲基化和组蛋白乙酰化可能是SFRP1基因表达沉默的主要原因。

肾透明细胞癌中SFRP1、SFRP2基因启动子区甲基化状态的检测及其临床意义

目的探讨分泌型卷曲相关蛋白1(secreted frizzled-related protein 1,SFRP1)及分泌型卷曲相关蛋白2(secreted frizzled-related protein 2,SFRP2)基因启动子区甲基化状态与肾透明细胞癌(renal clear cell carcinoma,RCCC)的关系。方法采用甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MSP)法检测RCCC及其癌旁组织中SFRP1和SFRP2基因的甲基化情况;采用免疫组织化学SP法检测Wnt通路中心因子β-catenin蛋白表达。结果122例RCCC组织SFRP1基因和SFRP2基因甲基化发生率显著高于癌旁组织(P<0.05)。临床分期Ⅳ期RCCC组织SFRP1基因的甲基化发生率高于临床分期Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期(P<0.05)。RCCC组织中β-catenin蛋白的表达率明显高于癌旁组织(P<0.05)。高甲基化SFRP1基因在RCCC组织中和高甲基化SFRP2基因在RCCC组织中β-catenin蛋白的表达率明显高于未甲基化的RCCC组织(P<0.05)。结论 SFRP1、SFRP2基因甲基化可能参与由Wnt/β-catenin信号转导通路介导的RCCC的发生;SFRP1基因高甲基化可能与RCCC的侵袭及转移相关。

5-氮杂-2′-脱氧胞苷对肺癌SPC-A1细胞增殖及SFRP1、MGMT甲基化蛋白表达的影响

目的观察甲基化抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-aza-2′-deoxycytidine,5-Aza-CdR)对肺癌SPC-A1细胞增殖、细胞划痕和凋亡的影响,探讨抑癌基因分泌型卷曲相关蛋白1(secreted frizzled related protein 1,SFRP1)和O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(O6-methylguanine-DNA-methyltransferase,MGMT)基因启动子区DNA甲基化mRNA和蛋白在其中的表达和意义。方法CCK-8法检测不同浓度的5-Aza-CdR对人肺癌SPC-A1细胞增殖影响,划痕实验测定5-Aza-CdR对SPC-A1细胞迁移能力的影响,Hoechst 33258染色检测(0、3、10、30μmol·L^(-1))5-Aza-CdR处理肺癌SPC-A1细胞24h后细胞凋亡情况,RT-PCR、Western blot法检测SPC-A1细胞中SFRP1和MGMT的mRNA、蛋白表达。结果5-Aza-CdR可以浓度梯度的抑制肺癌SPC-A1细胞增殖,IC 50为21.2μmol·L^(-1);5-Aza-CdR(3、10、30μmol·L^(-1))作用48 h后,肺癌SPC-A1细胞划痕愈合分别为对照组的(92.4±2.6)%、(83.6±4.2)%、(76.7±4.5)%;5-Aza-CdR处理肺癌SPC-A1细胞后,出现典型的细胞凋亡形态学改变;不同浓度5-Aza-CdR(3、10、30μmol·L^(-1))处理SPC-A1细胞24 h后,SFRP1、MGMT mRNA和蛋白表达增加(P<0.05)。结论5-Aza-CdR可抑制肺癌SPC-A1细胞增殖,抑制肺癌细胞划痕修复和促进凋亡,可能与升高MGMT和SFRPl的甲基化表达有关。

AML和ALL患者骨髓DNMT1,SFRP1基因甲基化及其与临床病理特征和预后相关性研究

目的检测急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)和急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)患者骨髓中DNA甲基化转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)、分泌型卷曲相关蛋白1(secreted frizzled related protein 1,SFRP1)基因甲基化及mRNA表达水平,探讨其与临床病理特征和预后的关系。方法根据FBA(French-American-British classification systems;法-美-英分型系统)标准选取2019年11月~2020年11月于邯郸市中心医院新诊断的急性白血病患者70例,其中AML 50例和ALL 20例;另选取65例非恶性血液病患者作为正常对照组。用甲基化特异性聚合酶链式反应(methylation-specific PCR,MSP)检测所有研究对象骨髓标本中DNMT1和SFRP1基因甲基化状态,并分析两基因甲基化与AML和ALL患者临床参数之间的关系;用实时定量PCR检测所有研究对象化疗前和化疗缓解后骨髓标本中DNMT1,SFRP1和β-catenin mRNA表达;Pearson相关分析明确DNMT1,SFRP1和β-catenin mRNA水平之间的相关性;对所有患者进行随访,比较DNMT1和SFRP1基因甲基化与预后的关系。结果AML和ALL患者中DNMT1基因甲基化发生率分别为26.0%和25.0%,较对照组(73.8%)显著下降(χ^(2)=47.683,P<0.001);SFRP1基因甲基化发生率分别为78.0%和85.0%,较正常对照组(18.5%)显著增加(χ^(2)=55.265,P<0.001),差异均有统计学意义。AML组DNMT1基因甲基化与WBC水平、遗传学预后分组有明显相关性(χ^(2)=6.524,5.732,均P<0.001);SFRP1基因甲基化与WBC水平、BM水平和遗传学预后分组有明显相关性(χ^(2)=8.115,5.395,5.060,均P<0.05)。ALL组DNMT1基因甲基化只与遗传学预后分组有关(χ^(2)=4.802,P<0.05);SFRP1基因甲基化与WBC水平、遗传学预后分组有明显相关性(χ^(2)=4.920,5.115,均P<0.05)。与对照组相比,AML和ALL患者化疗前DNMT1和β-catenin mRNA表达均显著升高(t=4.807~10.456,均P<0.05),SFRP1表达显著下降(t=24.791,12.069,均P<0.05)。与化疗前相比,AML和ALL患者化疗后DNMT1和β-catenin mRNA表达显著下降(t=3.461~6.374,均P<0.05),SFRP1表达显著上升(t=17.076,7.454,P<0.05)。两组患者DNMT1与SFRP1表达呈明显负相关(r=-0.328,-0.315,均P<0.05);SFRP1与β-catenin表达呈明显正相关(r=0.682,0.728,均P<0.05);两组患者DNMT1与β-catenin表达均无明显相关性。两组患者DNMT1基因甲基化生存率高于其未甲基化生存率(χ^(2)=3.862,3.679,均P<0.05);SFRP1基因甲基化生存率低于其未甲基化生存率(χ^(2)=2.927,3.155,均P<0.05)。结论DNMT1和SFRP1基因甲基化与恶性血液病患者临床病理及预后相关,究其原因可能与DNMT1和SFRP1基因甲基化异常激活Wnt/β-catenin信号通路有关。

SFRP基因甲基化与消化系肿瘤相关性的研究进展

DNA启动子异常甲基化是人类基因组一种最常见的表观遗传学修饰改变,与肿瘤的发生发展及预后密切相关.分泌型卷曲相关蛋白(secreted frizzled-related proteins,SFRPs)作为Wnt信号通路的拮抗因子,在多种肿瘤中常由于其启动子的高甲基化而致该基因的表达沉默,从而减弱对Wnt信号通路的抑制作用,使得Wnt信号通路异常激活,促进了肿瘤的发生与发展.本文就SFRP基因甲基化在消化系肿瘤中的研究作一综述.

SFRP1基因甲基化及其蛋白在肺腺癌中的表达及临床意义

目的探讨SFRP1基因甲基化及其蛋白在肺腺癌组织中的表达。方法收集手术切除的肺腺癌标本60例和癌旁组织30例,采用甲基化特异性PCR法、实时荧光定量PCR法和免疫组织化学染色法分别检测SFPR1基因甲基化、m RNA及蛋白的表达情况。结果 SFRP1基因甲基化率在肺腺癌中(58.3%)表达明显高于癌旁组织(20.0%)(P=0.001)。SFRP1 m RNA在肺腺癌(0.847±0.297)中的表达明显低于癌旁组织(2.019±0.445)(P<0.01)。SFRP1蛋白在肺腺癌中的阳性表达率为38.3%(23/60),明显低于癌旁组织中的表达率83.3%(25/30)(P<0.001);SFRP1蛋白表达与肺腺癌组织分化程度、临床分期及淋巴结转移情况有关(均P<0.05)。SFRP1基因甲基化与其蛋白表达缺失存在相关性(r=-0.585,P<0.001)。结论 SFRP1蛋白的表达降低可能是由于SFRP1基因甲基化所致,SFRP1基因甲基化及其蛋白表达与肺腺癌组织分化程度及淋巴结转移情况密切相关。

SFRP5在白血病细胞中基因甲基化状态及蛋白表达分析

目的检测白血病患者标本及细胞系中分泌型卷曲相关蛋白5(SFRP5)基因启动子区域的甲基化状态及蛋白表达情况。方法甲基化特异性PCR(MSP)检测白血病患者及细胞系中SFRP5基因启动子区甲基化状态,亚硫酸盐测序PCR(BSP)方法检测KG1a细胞中SFRP5基因甲基化状态,Western blot方法检测SFRP5蛋白在白血病患者及细胞系中的表达。结果 12例白血病患者标本中有7例发生了SFRP5基因甲基化,6例正常对照标本均未发生SFRP5基因甲基化。4种白血病细胞系(HL-60、Raji、U937、KG1a)中均发生SFRP5基因甲基化。KG1a细胞中SFRP5基因启动子区-394 bp到+99 bp位点的CpG总甲基化频率为82.5%。白血病患者标本中有7例存在SFRP5蛋白表达,6例正常标本存在SFRP5蛋白表达,4种白血病细胞系中未检测到SFRP5蛋白表达。使用去甲基化试剂DAC处理4种白血病细胞系,结果均恢复SFRP5蛋白表达。结论白血病细胞中存在SFRP5基因启动子区甲基化,并导致SFRP5蛋白表达缺失或下调。

高糖促进小鼠肾小管上皮细胞DNMT3B表达并通过激活β-catenin信号通路促进纤维化相关蛋白分泌

目的观察高糖条件下小鼠肾小管上皮细胞(RTEC)中DNA甲基转移酶3B(DNMT3B)对分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)表达的影响及对Wnt/β联蛋白(β-catenin)信号通路的调控作用。方法将体外培养的小鼠RTEC分为正常糖(NG)组和高糖(HG)组。RTEC分别转染DNMT3B短发夹RNA(sh-DNMT3B)及DNMT3B过表达(DNMT3B-OE)质粒后,反转录PCR检测RTEC的DNMT3B、 SFRP1、Ⅳ型胶原蛋白(Col4)、纤连蛋白(FN)mRNA表达,Western blot法检测DNMT3B、 SFRP1、糖原合成酶3β(GSK3β)、磷酸化的GSK3β(p-GSK3β)、β-catenin、 Col4、 FN的蛋白表达。免疫荧光细胞化学染色检测DNMT3B和SFRP1在RTEC的表达和定位。结果与NG组相比,HG组RTEC中DNMT3B、β-catenin、 p-GSK3β、 Col4、 FN蛋白表达增加,SFRP1表达降低。与空载体组比较,敲低DNMT3B后,HG条件下RTEC的SFRP1 mRNA及蛋白表达均增加,β-catenin、 p-GSK3β、 Col4蛋白表达降低,FN的mRNA和蛋白表达均降低,而β-catenin mRNA表达无明显改变;过表达DNMT3B后,各指标表达情况与上述结果相反。DNMT3B及SFRP1在RTEC的细胞核及细胞质中均有表达,与NG组相比,HG组的细胞可见DNMT3B在细胞核内聚集,且与SFRP1的共定位增加。结论 HG刺激增加RTEC的DNMT3B表达,下调SFRP1表达,激活Wnt/β-catenin信号通路促进细胞外基质形成。

血浆GATA结合蛋白5、分泌型卷曲相关蛋白2、整合素α4基因甲基化在结直肠癌诊断中的价值

结直肠癌是高发的恶性肿瘤之一,结直肠黏膜由正常发展至癌变的过程常需7～10年[1-3].基因启动子异常甲基化不仅存在于结直肠癌组织中,而且在血浆中亦可被检测到,可作为非侵入性生物标志物用于结直肠癌早期筛查[4-5].本研究应用甲基化特异性PCR法检测结直肠癌患者血浆GATA结合蛋白5（GATA binding protein 5,GATA5）基因、分泌型卷曲相关蛋白2 （secreted frizzled-related protein 2,SFRP2）基因、基因整合素α4 （integrin alpha 4,ITGA4）基因DNA启动子区的甲基化状态.

粪便SDC2、TFPI2、SFRP2基因甲基化联合检测在结直肠癌早期筛查中的临床价值

目的探讨粪便SDC2、TFPI2、SFRP2基因甲基化联合检测在结直肠癌早期筛查中的临床价值。方法收集苏州大学附属第一医院2021年6月至2022年2月就诊患者105例,其中结直肠癌组患者30例,腺瘤组患者45例,健康对照者30名,采用荧光定量PCR法检测患者粪便SDC2、TFPI2、SFRP2的甲基化情况。分析粪便SDC2、TFPI2、SFRP2甲基化及其三者联合检测诊断结直肠癌的敏感度及特异度,以病理结果为金标准,通过ROC曲线分析该检测方法对疾病的诊断效能。结果结直肠癌组患者粪便SDC2、TFPI2、SFRP2甲基化及其联合结直肠癌检测阳性率高于腺瘤组和正常对照组,且腺瘤组高于正常对照组。SDC2、TFPI2、SFRP2甲基化及其联合检测结直肠癌的敏感度分别为46.7%、53.3%、66.7%、76.7%;特异度分别为96.7%、93.3%、96.7%、86.7%。ROC曲线分析显示粪便SDC2、SFRP2、TFPI2甲基化联合检测筛查结直肠癌的效能较高。结论粪便SDC2、TFPI2、SFRP2甲基化联合检测对结直肠癌早期筛查的诊断价值较高,具有重要意义。