分泌型溶酶体与疾病

传统意义的溶酶体被认为是细胞内消化途径的终点站,是含有多种水解酶和脂肪酶的细胞器,可以消化蛋白以及膜结构等.某些特殊类型的细胞中存在分泌型溶酶体,它既有胞内消化的功能,又有调节分泌功能.在调节溶酶体胞吐的蛋白质中,Rab27a蛋白起到了核心作用.相关基因特别是控制胞吐的基因突变,可造成各种免疫缺陷综合症.星型胶质细胞溶酶体胞吐释放ATP,在神经元和胶质细胞之间传递信息.分泌型溶酶体还参与了肿瘤细胞浸润、转移的过程.

NK92细胞经非溶酶体途径快速生成并释放35kD颗粒酶B至靶细胞

目的探讨NK92细胞能否经非分泌型溶酶体途径分泌颗粒酶B(GZB)以及其可能的分泌机制。方法 NK92细胞作为细胞模型,经佛波酯(PMA)和离子霉素(ION)活化后4 h内,采用免疫荧光染色和胶体金标记免疫电镜技术检测NK92细胞胞质中蛋白合成功能被抑制前后相对分子质量(M_r)35 000和32 000 GZB的含量及其分布情况;采用Western blot法检测分离纯化分泌型溶酶体(SL)及不含溶酶体胞质中的GZB种类;通过EDTA抑制溶酶体的胞吐来阻断M_r32 000 GZB的释放,观察活化后NK92细胞上清中的M_r35 000 GZB含量;将活化的NK92细胞与K562细胞共培养,观察M_r35 000 GZB能否进入K562细胞;观察活化后NK92细胞的死亡率,并检测其分泌M_r35 000 GZB的酶活性。结果 NK92细胞PMA/ION刺激4 h后,在SL外的胞质中生成大量GZB,M_r为35 000区别于SL内GZB的M_r32 000。经免疫电镜和免疫荧光染色进一步显示,这些GZB位于溶酶体外的小囊泡内。同时,M_r35 000 GZB能被分泌至细胞外。进一步检测发现受到刺激的NK92细胞在SL外的胞质中同时出现GZB/丝氨酸蛋白酶抑制剂9(serpinb9)复合物以及M_r35 000 GZB,但死亡率未上升,与之相应的是SL内的GZB具有酶活性,SL外的M_r35 000 GZB为酶原形式,表明M_r35 000 GZB并非由SL漏出。结论人NK细胞内存在SL外无酶活性的M_r35 000 GZB,以非溶酶体途径快速生成方式分泌至细胞外,提供了部分细胞外的GZB。

TNF受体胞外区在RBL-2H3肥大细胞中表达及分泌后的生物活性

检测TNF受体胞外区在RBL-2H3细胞中表达及分泌后的生物活性。用Ⅰ型TNF受体(TNFR1)胞外区的表达载体转染RBL-2H3细胞,用免疫荧光技术检测TNFR1的亚细胞定位,通过诱导IgE受体交联诱导细胞脱粒,用免疫沉淀结合SDS-PAGE检测TNFR1,用TNF-α敏感细胞株WEHI细胞检测分泌的TNFR1的生物活性。免疫荧光结果显示RBL-2H3细胞的分泌型溶酶体中存在TNFR1,免疫沉淀结果显示TNFR1在RBL-2H3细胞脱粒中释放,对WEHI细胞的TNF-α毒性实验显示分泌的TNFR1具有降低TNF-α细胞毒的作用。提示在RBL-2H3细胞中表达及分泌的TNFR1具有结合TNF-α的生物活性,能够降低TNF-α的细胞毒作用。