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大肠杆菌-分枝杆菌分泌型穿梭表达质粒pBCG-SP-HSP65的构建及人结核杆菌HSP65的表达
被引量:
2
1
作者
戴五星
陈智浩
+4 位作者
高红
黄海浪
梁靓
程继忠
皇甫永穆
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第2期170-174,共5页
用PCR技术从BacillusCalmette gu啨rin(BCG)基因组中扩增出抗原 85B(Ag85B)的信号肽 (SP)DNA序列 ,从pCMVMTHSP65质粒中扩增出人结核杆菌HSP65全长基因。利用DNA重组技术将以上两个片段插入质粒pBCG 2 10 0的人结核杆菌HSP70启动子下...
用PCR技术从BacillusCalmette gu啨rin(BCG)基因组中扩增出抗原 85B(Ag85B)的信号肽 (SP)DNA序列 ,从pCMVMTHSP65质粒中扩增出人结核杆菌HSP65全长基因。利用DNA重组技术将以上两个片段插入质粒pBCG 2 10 0的人结核杆菌HSP70启动子下游 ,构建成分泌型原核穿梭表达质粒 (pBCG SP HSP65)。酶切鉴定、PCR和测序分析结果均表明分泌型原核穿梭表达质粒pBCG SP HSP65构建成功。利用电穿孔将该质粒转入耻垢分枝杆菌(Mycobacterialsmegmatis,MS)中 ,用卡那霉素筛选出阳性重组子。经热诱导后用SDS PAGE观察到在耻垢分枝杆菌中 65kD蛋白占总蛋白的 2 0 % ,而在重组耻垢分枝杆菌表达的 65kD蛋白占菌体总蛋白的 3 4 46% ,占裂解物上清总蛋白的 68 56% ,表明重组的HSP65基因能在耻垢分枝杆菌中高效表达 ,表达的蛋白大部分以可溶状态存在。通过Western blot证实分泌的该蛋白能与结核杆菌HSP65的抗体特异性结合 ,说明该重组蛋白具有HSP65的生物学活性。
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关键词
大肠杆菌
分枝杆菌
分泌
型
穿梭
表达
质粒
信号肽
结核轩菌HSP65
人
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职称材料
重组炭疽保护性抗原的表达、纯化与生物活性分析
被引量:
15
2
作者
徐俊杰
董大勇
+5 位作者
宋小红
葛猛
李冠霖
付玲
庄汉澜
陈薇
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第5期652-655,共4页
构建分泌型表达质粒 ,在大肠杆菌中实现了重组炭疽保护性抗原 (rPA)的分泌型表达。重组蛋白位于细菌外周质 ,表达量约占菌体总蛋白的 10 %。以离子交换、疏水层析和凝胶过滤为基础 ,建立了rPA的纯化工艺 ,每升培养物可获得约 15mgrPA ,...
构建分泌型表达质粒 ,在大肠杆菌中实现了重组炭疽保护性抗原 (rPA)的分泌型表达。重组蛋白位于细菌外周质 ,表达量约占菌体总蛋白的 10 %。以离子交换、疏水层析和凝胶过滤为基础 ,建立了rPA的纯化工艺 ,每升培养物可获得约 15mgrPA ,纯度可达 95 %以上。体外细胞毒性试验显示rPA具有较好的生物学活性。用rPA免疫家兔产生的抗血清在体外可抑制炭疽致死毒素的活性 ,表明rPA可诱导机体产生保护性免疫。
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关键词
炭疽杆菌
炭疽毒素
保护性抗原
表达
纯化
分泌型表达质粒
大肠杆菌
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职称材料
题名
大肠杆菌-分枝杆菌分泌型穿梭表达质粒pBCG-SP-HSP65的构建及人结核杆菌HSP65的表达
被引量:
2
1
作者
戴五星
陈智浩
高红
黄海浪
梁靓
程继忠
皇甫永穆
机构
华中科技大学同济医学院生物化学与分子生物学系
出处
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第2期170-174,共5页
基金
国家自然科学基金项目资助(No .30 370 0 75)
湖北省自然科学基金项目资助 (No .2 0 0 3ABA1 36 )~~
文摘
用PCR技术从BacillusCalmette gu啨rin(BCG)基因组中扩增出抗原 85B(Ag85B)的信号肽 (SP)DNA序列 ,从pCMVMTHSP65质粒中扩增出人结核杆菌HSP65全长基因。利用DNA重组技术将以上两个片段插入质粒pBCG 2 10 0的人结核杆菌HSP70启动子下游 ,构建成分泌型原核穿梭表达质粒 (pBCG SP HSP65)。酶切鉴定、PCR和测序分析结果均表明分泌型原核穿梭表达质粒pBCG SP HSP65构建成功。利用电穿孔将该质粒转入耻垢分枝杆菌(Mycobacterialsmegmatis,MS)中 ,用卡那霉素筛选出阳性重组子。经热诱导后用SDS PAGE观察到在耻垢分枝杆菌中 65kD蛋白占总蛋白的 2 0 % ,而在重组耻垢分枝杆菌表达的 65kD蛋白占菌体总蛋白的 3 4 46% ,占裂解物上清总蛋白的 68 56% ,表明重组的HSP65基因能在耻垢分枝杆菌中高效表达 ,表达的蛋白大部分以可溶状态存在。通过Western blot证实分泌的该蛋白能与结核杆菌HSP65的抗体特异性结合 ,说明该重组蛋白具有HSP65的生物学活性。
关键词
大肠杆菌
分枝杆菌
分泌
型
穿梭
表达
质粒
信号肽
结核轩菌HSP65
人
Keywords
signal peptide, HSP65 of human Mycobacterium tuberc ulosis, a secreting prokaryotic shuttle expressing plasmid, recombinant Myco bacterial smegmatis
分类号
R346 [医药卫生—基础医学]
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职称材料
题名
重组炭疽保护性抗原的表达、纯化与生物活性分析
被引量:
15
2
作者
徐俊杰
董大勇
宋小红
葛猛
李冠霖
付玲
庄汉澜
陈薇
机构
军事医学科学院微生物流行病研究所
出处
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第5期652-655,共4页
基金
国家高科技研究发展计划 ( 863 )项目资助 (No .2 0 0 3AA0 0 2 0 0 4)
文摘
构建分泌型表达质粒 ,在大肠杆菌中实现了重组炭疽保护性抗原 (rPA)的分泌型表达。重组蛋白位于细菌外周质 ,表达量约占菌体总蛋白的 10 %。以离子交换、疏水层析和凝胶过滤为基础 ,建立了rPA的纯化工艺 ,每升培养物可获得约 15mgrPA ,纯度可达 95 %以上。体外细胞毒性试验显示rPA具有较好的生物学活性。用rPA免疫家兔产生的抗血清在体外可抑制炭疽致死毒素的活性 ,表明rPA可诱导机体产生保护性免疫。
关键词
炭疽杆菌
炭疽毒素
保护性抗原
表达
纯化
分泌型表达质粒
大肠杆菌
Keywords
Bacillus anthracis , anthrax toxin, protective antigen, expression, purification
分类号
R392 [医药卫生—免疫学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
大肠杆菌-分枝杆菌分泌型穿梭表达质粒pBCG-SP-HSP65的构建及人结核杆菌HSP65的表达
戴五星
陈智浩
高红
黄海浪
梁靓
程继忠
皇甫永穆
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2004
2
下载PDF
职称材料
2
重组炭疽保护性抗原的表达、纯化与生物活性分析
徐俊杰
董大勇
宋小红
葛猛
李冠霖
付玲
庄汉澜
陈薇
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2004
15
下载PDF
职称材料
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