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白色念珠菌分泌型天冬氨酸蛋白酶的纯化与性质 被引量:4
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作者 王丹敏 刘丽英 +1 位作者 叶路 高磊 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期27-30,共4页
利用硫酸铵分级沉淀和DEAE-Sephacel离子交换层析从白色念珠菌WD27培养液中提纯得到一种蛋白酶,纯化倍数为25.4,收率为5.2%。其活性可被抑胃肽特异抑制,初步鉴定该酶为天冬氨酸蛋白酶。该酶在酸性范围内有水解蛋白活性,最适作用pH为4.0... 利用硫酸铵分级沉淀和DEAE-Sephacel离子交换层析从白色念珠菌WD27培养液中提纯得到一种蛋白酶,纯化倍数为25.4,收率为5.2%。其活性可被抑胃肽特异抑制,初步鉴定该酶为天冬氨酸蛋白酶。该酶在酸性范围内有水解蛋白活性,最适作用pH为4.0,最适温度为37℃。酶在pH5.0~6.0、45℃以下较稳定,该酶具有较广的底物作用范围,对牛血红蛋白最敏感。酶作用于牛血红蛋白的米氏常数Km为0.814mmol/L。 展开更多
关键词 分泌蛋白酶 致病 毒力因子 白色念珠菌 纯化
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Bcl-2、半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶在SD大鼠脑梗死急性期的动态表达研究 被引量:2
2
作者 王晓平 罗永杰 +1 位作者 马思文 刘君霞 《实用医院临床杂志》 2013年第5期53-57,共5页
目的探讨SD大鼠大脑中动脉闭塞模型急性期半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶(Caspase-3)和抗凋亡蛋白Bcl-2(B cell lymphoma/leukemia 2)不同时相的动态表达。方法健康雄性SD大鼠36只,采用完全随机设计方法分为空白对照组(n=4)、假手术组(n=16)... 目的探讨SD大鼠大脑中动脉闭塞模型急性期半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶(Caspase-3)和抗凋亡蛋白Bcl-2(B cell lymphoma/leukemia 2)不同时相的动态表达。方法健康雄性SD大鼠36只,采用完全随机设计方法分为空白对照组(n=4)、假手术组(n=16)和手术组(n=16)并予以处理。用ELISA法测定各组大鼠不同时点Bcl-2和Caspase-3的OD值,绘制标准曲线并计算对应的浓度。结果①Bcl-2的表达:手术组术后6 h显著升高,12 h点达高峰,3 d时下降接近空白对照组水平。手术组与假手术组在6、12、24 h时间点比较差异有统计学意义(P<0.05);手术组与空白对照组在2、3、6、12、24 h及3、7 d时间点比较差异有统计学意义(P<0.05);手术组内6、12、24 h与其他时间点比较差异有统计学意义(P<0.05)。②Caspase-3的表达:手术组Caspase-3在术后0.5 h即开始表达,并逐渐升高,24 h达到高峰,以后逐渐下降,在3、7d仍高于假手术组和空白对照组(P<0.05)。手术组内6 h、12 h、24 h、3 d表达水平与其他各时间点比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Bcl-2和Caspase-3在脑梗死急性期均显著升高,参与神经元缺血缺氧的病理过程,在神经细胞早期的凋亡和存活中有着重要作用。二者的表达水平有正相关性(ρ=0.744592,P<0.05)。 展开更多
关键词 脑梗死 BCL-2 半胱-蛋白酶
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糖尿病大鼠血蛋白激酶C和骨骼肌Bax/B细胞淋巴瘤-2、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3变化及其意义 被引量:1
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作者 项静燕 赵玉武 +1 位作者 陈自柳 周健 《中国临床医学》 北大核心 2008年第6期899-901,共3页
目的:探讨糖尿病大鼠血蛋白激酶C(PKC)和骨骼肌Bax/Bcl-2、Caspase3变化及意义。方法:建立糖尿病大鼠模型,16只SD大鼠随机分成正常对照组和糖尿病组,采用ELISA法测定血PKC值,取后肢腓肠肌HE染色后行组织学观察,并用免疫组化方法测定Bax... 目的:探讨糖尿病大鼠血蛋白激酶C(PKC)和骨骼肌Bax/Bcl-2、Caspase3变化及意义。方法:建立糖尿病大鼠模型,16只SD大鼠随机分成正常对照组和糖尿病组,采用ELISA法测定血PKC值,取后肢腓肠肌HE染色后行组织学观察,并用免疫组化方法测定Bax、Bcl2和Caspase3值。结果:糖尿病组大鼠骨骼肌普遍萎缩,肌纤维萎缩变细,纤维变性、水肿,部分区域坏死,纤维断裂,肌丝走行紊乱,核固缩,横纹模糊消失,间质脂肪组织略增生。糖尿病组和正常对照组大鼠的血PKC值分别为110.60±5.94ng·mL-1和74.72±7.19ng·mL-1,骨骼肌Bax值分别为26311±3698.30μm2和16764±6116.10μm2,Bcl2值分别为18573±8529.90μm2和35533±485.52μm2,Caspase3值为32419±3201.50μm2和12123±1919.60μm2。糖尿病大鼠血中PKC值较正常对照组显著升高,糖尿病组肌肉中Caspase3及Bax值显著升高,而Bcl2值明显下降,Bax/Bcl2值升高,两组间比较均有显著差异。结论:氧化应激中的PKC途径及细胞凋亡通路共同参与了糖尿病骨骼肌病变的发生,可能是糖尿病骨骼肌病变的重要发病机制之一。 展开更多
关键词 糖尿病 蛋白激酶C Bax/B细胞淋巴瘤-2 特异半胱蛋白酶-3
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分泌型天冬氨酸蛋白酶-2的研究进展 被引量:1
4
作者 林艳 赵玮 《国际口腔医学杂志》 CAS 2011年第1期51-54,共4页
分泌型天冬氨酸蛋白酶(Sap)-2是真菌生存所需的毒力因子,可以诱导抗体产生,参与白色假丝酵母菌的多方面致病过程。本文就Sap-2的命名、结构、生物化学特性、表达、影响因子、致病机制和应用等研究进展作一综述。
关键词 分泌蛋白酶-2 毒力因子 白色假丝酵母菌
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棘孢木霉天冬氨酸蛋白酶基因的克隆表达及其对大豆分离蛋白的水解
5
作者 周迪 邱小娴 +1 位作者 柯野 胡秋怡 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2023年第20期175-182,共8页
为开发木霉天冬氨酸蛋白酶的应用潜能,采用实时聚合酶链式反应技术,从棘孢木霉(Trichoderma asperellum)中克隆蛋白酶基因asp,并在毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115中成功表达,进一步对重组蛋白酶rAsp进行分离纯化,分析其生化特性及对大... 为开发木霉天冬氨酸蛋白酶的应用潜能,采用实时聚合酶链式反应技术,从棘孢木霉(Trichoderma asperellum)中克隆蛋白酶基因asp,并在毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115中成功表达,进一步对重组蛋白酶rAsp进行分离纯化,分析其生化特性及对大豆分离蛋白的水解作用。结果显示,asp基因编码的蛋白酶属于天冬氨酸蛋白酶家族,其序列与本家族成员序列相似性最高为47.74%。在三角瓶中诱导表达时,发酵液中rAsp的酶活力为25.8 U/mL。rAsp最适反应pH值和温度分别为2.5和45℃,在pH 2.0~6.0范围和45℃以下具有较强的稳定性。Cu^(2+)和Mn2+具有促进rAsp活性的作用,而Fe^(3+)、十二烷基硫酸钠和胃蛋白酶抑制剂显著抑制rAsp的活性。rAsp对大豆分离蛋白的水解效率较商业化胃蛋白酶高7.7%;同时,降低β-伴大豆球蛋白和球蛋白致敏性的能力分别是胃蛋白酶的1.4倍和1.8倍。因此,rAsp在大豆蛋白加工应用中具有潜在的开发价值。 展开更多
关键词 棘孢木霉 重组蛋白酶 生化特 大豆分离蛋白 致敏
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中药联合窄谱中波紫外线对寻常型银屑病表皮中B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3及生存素的影响 被引量:2
6
作者 秦兰英 邢卫斌 +1 位作者 叶文静 李玉平 《中国中西医结合杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期706-709,共4页
目的探讨中药联合窄谱中波紫外线(NB-UVB)在调节寻常型银屑病皮损中角质形成细胞凋亡的可能作用。方法选择30例寻常型银屑病患者给予中药银屑病方联合NB-UVB治疗,疗程8周,取治疗前后标本,用免疫组化方法检测正常人(20名)及患者(30例)治... 目的探讨中药联合窄谱中波紫外线(NB-UVB)在调节寻常型银屑病皮损中角质形成细胞凋亡的可能作用。方法选择30例寻常型银屑病患者给予中药银屑病方联合NB-UVB治疗,疗程8周,取治疗前后标本,用免疫组化方法检测正常人(20名)及患者(30例)治疗前后皮损中B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)蛋白、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、生存素(survivin)的表达。结果寻常型银屑病患者皮损中Bcl-2(7.50±2.01)的表达明显低于正常组(12.65±2.83),Caspase-3(21.73±3.70)的表达明显高于正常组织(8.55±2.16),survivin(23.90±2.82)的表达明显高于正常组织(7.06±1.96,P<0.01);治疗后Bcl-2(13.63±2.14)表达上调,Caspase-3(11.70±2.44)、survivin(12.46±1.80)表达下调(P<0.01),三者均有向正常组织表达转化的趋势。银屑病面积和严重程度指数(PASI)评分由治疗前(14.24±3.42)下降至治疗后(3.52±1.07,P<0.01))。结论中药银屑病方联合NB-UVB可能通过调节Bcl-2、Caspase-3、survivin的表达而调节角质形成细胞的凋亡达到治疗目的。 展开更多
关键词 寻常型银屑病 中药 窄谱中波紫外线 B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白 特异半胱 蛋白酶一3 生存素
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电针对骶上脊髓损伤后神经源性膀胱大鼠尿流动力学及脊髓组织中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3表达的影响 被引量:29
7
作者 许明 张泓 +4 位作者 张健 刘继生 尹秀婷 艾坤 邓石峰 《中国康复医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期1338-1344,共7页
目的:观察电针对骶上脊髓损伤后神经源性膀胱大鼠尿流动力学、髓内细胞凋亡率及脊髓组织中Caspase-3表达的影响。方法:从60只雌性SD大鼠中随机抽取36只,按脊髓横断法制作神经源性膀胱模型后,将符合要求的模型大鼠24只随机分为模型组、... 目的:观察电针对骶上脊髓损伤后神经源性膀胱大鼠尿流动力学、髓内细胞凋亡率及脊髓组织中Caspase-3表达的影响。方法:从60只雌性SD大鼠中随机抽取36只,按脊髓横断法制作神经源性膀胱模型后,将符合要求的模型大鼠24只随机分为模型组、电针组各12只,其余24只随机分为空白组、假手术组各12只;术后第19天取"次髎""中极""三阴交""大椎"行电针干预,连续治疗7天后行尿流动力学检测,并用TUNEL法测定髓内细胞凋亡率、Western Blot法测定脊髓组织中Caspase-3蛋白的表达情况。结果:(1)尿流动力学,与空白组及假手术组比较:模型组、电针组的膀胱基础压力、膀胱最大压力、漏尿点压力升高(P<0.05),膀胱最大容量及顺应性降低(P<0.01);与模型组比较:电针组的膀胱基础压力、膀胱最大压力、漏尿点压力均降低(P<0.05),膀胱最大容量及顺应性均升高(P<0.01);(2)髓内细胞凋亡率,与空白组及假手术组比较:模型组及电针组的脊髓组织TUNEL阳性率明显升高(P<0.01);与模型组比较:电针组的脊髓组织TUNEL阳性率明显降低(P<0.01);(3)Caspase-3蛋白表达,与空白组及假手术组比较:模型组、电针组脊髓组织中Caspase-3蛋白表达明显升高(P<0.01);与模型组比较:电针组脊髓组织中的Caspase-3蛋白表达下降(P<0.05)。结论:电针"次髎""中极""三阴交""大椎"可改善骶上脊髓损伤后神经源性膀胱大鼠的膀胱压力、最大容量及顺应性,降低受损脊髓组织的凋亡率,其作用机制可能与脊髓组织中凋亡效应蛋白Caspase-3的表达下调有关。 展开更多
关键词 电针 骶上脊髓损伤 神经源膀胱 尿流动力学 半胱蛋白酶-3
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银杏平颤方对帕金森病鼠黑质半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶和Bcl-2蛋白表达的影响 被引量:8
8
作者 孙红梅 张军 +3 位作者 白丽敏 许红 吴海霞 崔龙 《中国临床康复》 CSCD 北大核心 2005年第17期136-138,共3页
目的:观察银杏平颤全方及其拆方对帕金森病鼠黑质半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3,9及B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)蛋白在不同时期表达的影响。方法:实验于2002-09/2003-12在北京中医药大学解剖教研室神经解剖实验室进行。动物随机分成6组:正常组、模... 目的:观察银杏平颤全方及其拆方对帕金森病鼠黑质半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3,9及B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)蛋白在不同时期表达的影响。方法:实验于2002-09/2003-12在北京中医药大学解剖教研室神经解剖实验室进行。动物随机分成6组:正常组、模型组、全方组、解毒组、平肝组和化瘀组,除正常组6只外,其余每组又分造模后14,28d两个时间点,每个时间点6只。除正常组外,其余5组动物腹腔注射1-甲基-4苯基-1,2,3,6四氢吡啶犤30mg/(kg·d),连续5d犦建立帕金森病动物模型,从造模第1天开始每天分别灌胃中药0.5mL(全方含生药1.18g/L,拆方含生药0.6g/L),模型组灌胃生理盐水0.5mL。动物存活到相应时间点处死,采用免疫组化技术观察黑质半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3,9和Bcl-2的表达。结果:66只动物全部进入结果分析。①帕金森病模型组鼠中脑黑质半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9,3的表达明显增加,14d较28d更强,而黑质内Bcl-2蛋白的表达下降,28d较14d更明显。②中药银杏平颤方及其拆方可不同程度地抑制半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3,9的表达,提高Bcl-2的表达。通过全方和3组拆方比较发现化瘀中药的作用基本同全方组,两个时间是均有效。③解毒中药在14d作用比28d显著,平肝中药在28d的作用一般大于14d。 展开更多
关键词 帕金森病/中药疗法 银杏 原癌基因蛋白质C-BCL-2 半胱蛋白酶
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五味苦参肠溶胶囊对溃疡性结肠炎小鼠半胱天冬氨酸蛋白酶1、白细胞介素-1β蛋白的影响 被引量:10
9
作者 罗丹 高路 +1 位作者 仝战旗 张晨 《解放军医学院学报》 CAS 2018年第2期140-143,149,共5页
目的观察新药五味苦参肠溶胶囊(composite sophora colon-soluble capsules,CSCC)对葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium salt,DSS)诱导的溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)小鼠结肠组织中半胱天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、白介素-... 目的观察新药五味苦参肠溶胶囊(composite sophora colon-soluble capsules,CSCC)对葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium salt,DSS)诱导的溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)小鼠结肠组织中半胱天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、白介素-1β(interleukin 1-beta,IL-1β)蛋白含量的影响。方法 BALB/C小鼠50只,随机分成模型组、空白对照组、五味苦参低剂量组[1.92 g/(kg·d)]、五味苦参中剂量组[3.84 g/(kg·d)]、五味苦参高剂量组[7.68 g/(kg·d)],每组10只。除空白组外,其余各组自由饮用3%葡聚糖硫酸钠溶液7 d,之后空白对照组与模型组采用0.9%氯化钠注射液灌肠7 d,中药组分别按高、中、低剂量进行CSCC灌肠7 d。各组取结肠组织观察病变程度,测量其结肠长度、结肠系数、脾系数,并行苏木精-伊红染色法染色、光镜下观察结肠组织病理变化,ELISA法检测小鼠结肠组织中Caspase-1、IL-1β的蛋白含量。结果结肠组织HE染色:与空白组相比,模型组结肠组织结构紊乱,杯状细胞减少,炎症细胞浸润,腺体破坏或消失、局部有水肿,而五味苦参各组炎症较轻。ELISA法检测:与模型组相比,五味苦参各组小鼠结肠组织中Caspase-1[(模型组vs中剂量组,(27.02±4.23)ng/L vs(22.73±1.68)ng/L,P<0.05]、IL-1β蛋白含量均有所降低[模型组vs中剂量组,(87.79±11.34)ng/L vs(75.49±8.41)ng/L,P<0.05]。结论五味苦参肠溶胶囊可降低DSS诱导的UC小鼠结肠组织中Caspase-1、IL-1β蛋白含量,减轻结肠组织的病理损伤。 展开更多
关键词 五味苦参肠溶胶囊 溃疡结肠炎 半胱蛋白酶-1 白介素-1β
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白色念珠菌分泌型天冬氨酸蛋白酶在口腔扁平苔藓患者唾液中的表达 被引量:4
10
作者 张英 闻妍 +1 位作者 康媛媛 钟鸣 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2012年第4期40-46,共7页
研究白色念珠菌分泌型天冬氨酸蛋白酶(SAP)家族在扁平苔藓患者唾液中的表达,进而探讨白色念珠菌病与扁平苔藓的关系。选取白色念珠菌携带者、白色念珠菌病患者、携带白色念珠菌的扁平苔藓患者、伴有白色念珠菌病的扁平苔藓患者各20例,... 研究白色念珠菌分泌型天冬氨酸蛋白酶(SAP)家族在扁平苔藓患者唾液中的表达,进而探讨白色念珠菌病与扁平苔藓的关系。选取白色念珠菌携带者、白色念珠菌病患者、携带白色念珠菌的扁平苔藓患者、伴有白色念珠菌病的扁平苔藓患者各20例,念珠菌培养阴性的扁平苔藓患者10例。从唾液标本中直接提取RNA,进行RT-PCR。白色念珠菌携带者唾液中有SAP2、SAP4-6、SAP7的不同表达,携带白色念珠菌的口腔扁平苔藓患者唾液中有SAP2、SAP4-6、SAP7、SAP8、SAP9的不同表达,所有携带者中均未表现SAP1、SAP3和SAP10的阳性扩增。白色念珠菌患病者及伴有白色念珠菌病的口腔扁平苔藓患者唾液中有SAP1-10的不同表达。念珠菌培养阴性的扁平苔藓患者均无SAP1-10的阳性扩增。SAP9与扁平苔藓密切相关。 展开更多
关键词 白色念珠菌 分泌蛋白酶 扁平苔藓
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大鼠马钱子碱中毒心肌细胞B-淋巴细胞/白血病2基因和半胱氨酸天冬氨酸特异蛋白酶的表达 被引量:2
11
作者 雷怀成 朱方成 刘涛 《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期16-18,共3页
目的:研究马钱子碱中毒后不同时间段内心肌细胞B-淋巴细胞/白血病2基因(Bcl-2)和半胱氨酸天冬氨酸特异蛋白酶(Caspase-3)表达的病理变化.方法:用20只Wistar大鼠为正常对照组,40只Wistar大鼠复制马钱子碱中毒模型,用免疫组织化学... 目的:研究马钱子碱中毒后不同时间段内心肌细胞B-淋巴细胞/白血病2基因(Bcl-2)和半胱氨酸天冬氨酸特异蛋白酶(Caspase-3)表达的病理变化.方法:用20只Wistar大鼠为正常对照组,40只Wistar大鼠复制马钱子碱中毒模型,用免疫组织化学技术检测中毒后大鼠心肌细胞Bcl-2与Caspase-3蛋白的表达,并用图像分析对检测结果进行分析.结果:大鼠在马钱子碱中毒低、中剂量后的1~7d不同时间段内,心肌细胞Bcl-2与Caspase-3蛋白表达均高于正常对照组,差异有统计学意义.结论:Bcl-2和Caspase-3参与了马钱子碱中毒的病理生理过程. 展开更多
关键词 马钱子碱 中毒 B淋巴细胞/白血病2基因 半胱特异蛋白酶 免疫组织化学 大鼠
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三磷酸腺苷敏感性钾通道开放剂对大鼠脑缺血再灌注后神经元凋亡及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-8表达的影响 被引量:1
12
作者 张鸿 马英 +1 位作者 刘艳艳 吕永利 《临床神经病学杂志》 CAS 北大核心 2007年第5期364-367,共4页
目的 研究三磷酸腺苷敏感性钾通道(KATP)开放剂对大鼠脑缺血再灌注后神经元凋亡和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(caspase)-8 表达的影响.方法 200只Wistar雄性大鼠随机分为假手术组、对照组、KATP开放剂预处理组(开放剂组)及KATP开放剂... 目的 研究三磷酸腺苷敏感性钾通道(KATP)开放剂对大鼠脑缺血再灌注后神经元凋亡和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(caspase)-8 表达的影响.方法 200只Wistar雄性大鼠随机分为假手术组、对照组、KATP开放剂预处理组(开放剂组)及KATP开放剂+阻断剂预处理组(阻断剂组).应用线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,应用原位末端标记法(TUNEL)、免疫组化染色、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测脑缺血再灌注后各组脑组织凋亡细胞数和caspase-8 mRNA及蛋白的表达.结果 (1)缺血再灌注12 h、24 h、48 h、72 h各时间点凋亡细胞数,开放剂组较对照组和阻断剂组显著减少(P<0.05~0.01),阻断剂组与对照组间各时间点差异无统计学意义.(2)缺血再灌注12 h、24 h、48 h、72 h各时间点caspase-8蛋白表达,开放剂组显著低于对照组和阻断剂组(P<0.05~0.01),阻断剂组与对照组间各时间点差异无统计学意义.(3)缺血再灌注各时间点caspase-8 mRNA表达,开放剂组均显著低于对照组和阻断剂组(均P<0.01), 阻断剂组与对照组各时间点相比差异无统计学意义.结论 KATP开放剂能显著减少脑缺血再灌注后神经元凋亡和caspase-8 mRNA及蛋白的表达;KATP开放剂可能通过抑制死亡受体通路发挥脑保护作用. 展开更多
关键词 脑缺血 凋亡 三磷腺苷敏感钾通道 开放剂 特异半胱蛋白酶-8
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白假丝酵母菌天冬氨酸蛋白酶Sap2多克隆抗体的制备、纯化及鉴定 被引量:1
13
作者 仇萌 邹先彪 李蕾 《中国感染控制杂志》 CAS 2013年第4期241-246,共6页
目的制备白假丝酵母菌天冬氨酸蛋白酶Sap2多克隆抗体,并对其进行鉴定。方法提取白假丝酵母菌基因组DNA为模板,经聚合酶链反应(PCR)获取SAP2目的基因;双酶切SAP2基因与原核表达载体pMAL-c2x(+),构建pMAL-c2x/SAP2重组质粒;在大肠埃希菌BL... 目的制备白假丝酵母菌天冬氨酸蛋白酶Sap2多克隆抗体,并对其进行鉴定。方法提取白假丝酵母菌基因组DNA为模板,经聚合酶链反应(PCR)获取SAP2目的基因;双酶切SAP2基因与原核表达载体pMAL-c2x(+),构建pMAL-c2x/SAP2重组质粒;在大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞中经IPTG诱导表达出可溶性的融合蛋白;用可溶性Sap2免疫小鼠制备抗血清,间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗血清效价,亲和层析法纯化抗血清后,利用Western免疫印迹(Western Blot)检测抗体特异性。结果该研究成功制备了抗Sap2多克隆抗体,抗体效价>1∶51 200;Western Blot检测结果表明,该抗体可特异性识别Sap2蛋白。结论纯化后的Sap2作为抗原免疫小鼠,有较好的抗原性和免疫原性,可成功制备多克隆抗体,并具有高特异性,为快速检测侵袭性白假丝酵母菌感染奠定了基础。 展开更多
关键词 白假丝酵母菌 分泌蛋白酶 多克隆抗体 抗原 抗体
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白念珠菌天冬氨酸蛋白酶基因SAP2在大肠杆菌中的表达及产物纯化 被引量:1
14
作者 李蕾 仇萌 邹先彪 《中国真菌学杂志》 CSCD 2013年第1期14-19,共6页
目的构建SAP 2重组原核表达载体并表达、纯化出可溶性的蛋白,为抗体制备及Sap2抗原检测奠定基础。方法提取白念珠菌基因组DNA为模板,经PCR方法获取SAP 2目的基因。双酶切SAP 2基因与原核表达载体pMAL-c2x(+),连接酶切产物,转化大肠杆菌T... 目的构建SAP 2重组原核表达载体并表达、纯化出可溶性的蛋白,为抗体制备及Sap2抗原检测奠定基础。方法提取白念珠菌基因组DNA为模板,经PCR方法获取SAP 2目的基因。双酶切SAP 2基因与原核表达载体pMAL-c2x(+),连接酶切产物,转化大肠杆菌TOP10感受态细菌,筛选菌落和测序鉴定。将pMAL-c2x/SAP2重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达出可溶性的融合蛋白,经直链淀粉树脂亲和层析、蛋白酶Factor Xa切割标签获得纯化的Sap2蛋白。结果经PCR扩增获得正确的SAP 2序列并定向插入原核表达载体pMAL-c2x(+)中。重组原核表达载体pMAL-c2x/SAP2经IPTG诱导14 h后表达出可溶性的融合蛋白,并经纯化、切除标签后得到目的蛋白。结论成功构建了白念珠菌天冬氨酸蛋白酶原核表达质粒pMAL-c2x/SAP2,该质粒在BL21(DE3)中可获得高效融合表达,通过亲和层析纯化及标签切割得到了氨基酸序列同天然蛋白一致的目的蛋白。 展开更多
关键词 白念珠菌 分泌蛋白酶 SAP2基因 重组质粒
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不同雌激素受体、人表皮生长因子受体-2表达的乳腺癌组织中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3情况 被引量:1
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作者 肖刚 王振威 戚辉 《中日友好医院学报》 2017年第2期112-113,共2页
目的:探讨不同雌激素受体(ER)、人表皮生长因子受体-2(CerbB-2)表达的乳腺癌组织中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的情况及意义。方法:应用免疫组化SP法检测132例乳腺癌中ER、CerbB-2、Caspase-3的表达情况。结果 :132例乳腺癌组... 目的:探讨不同雌激素受体(ER)、人表皮生长因子受体-2(CerbB-2)表达的乳腺癌组织中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的情况及意义。方法:应用免疫组化SP法检测132例乳腺癌中ER、CerbB-2、Caspase-3的表达情况。结果 :132例乳腺癌组织中,ER阳性74例,其中Caspase-3阳性表达51例,表达率为68.9%;ER阴性58例,其中Caspase-3阳性表达28例,表达率为48.3%,Caspase-3在ER阳性乳腺癌组织中的表达显著高于ER阴性组(P<0.05)。132例乳腺癌组织中,CerbB-2阳性48例,其中Caspase-3阳性表达21例,表达率为43.8%;CerbB-2阴性84例,其中Caspase-3阳性表达58例,表达率为69%,Caspase-3在CerbB-2阳性乳腺癌组织中的表达显著低于CerbB-2阴性组(P<0.05)。结论:不同ER、CerbB-2表达的乳腺癌组织中Caspase-3均有统计学差异,Caspase-3介导的细胞调亡可能参与了乳腺癌发生发展。 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 雌激素受体 人表皮生长因子受体-2 半胱蛋白酶-3
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白假丝酵母菌天冬氨酸蛋白酶真核表达质粒pcDNA3.1/SAP2的构建
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作者 李蕾 邹先彪 杨宇光 《中国感染控制杂志》 CAS 2008年第4期233-236,共4页
目的构建白假丝酵母菌天冬氨酸蛋白酶真核表达质粒pcDNA3.1/SAP2,为以其作为基因疫苗进行免疫动物实验奠定物质基础。方法从白假丝酵母菌中提取基因组DNA,以其为模板采用聚合酶链反应(PCR)法获取SAP2基因,将真核表达质粒pcDNA3.1(+)myc-... 目的构建白假丝酵母菌天冬氨酸蛋白酶真核表达质粒pcDNA3.1/SAP2,为以其作为基因疫苗进行免疫动物实验奠定物质基础。方法从白假丝酵母菌中提取基因组DNA,以其为模板采用聚合酶链反应(PCR)法获取SAP2基因,将真核表达质粒pcDNA3.1(+)myc-HisC和SAP2基因行EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切,琼脂糖凝胶纯化,连接酶切产物,转化TOP10感受态细菌,筛选菌落和测序鉴定。结果经PCR扩增获得的目的基因分子量与预计相同,并定向插入真核表达载体pcDNA3.1(+)myc-HisC,电泳获得预期的SAP2条带,测序证实为正确的SAP2序列。结论利用真核表达质粒pcDNA3.1(+)myc-HisC可以方便而高效地构建pcDNA3.1/SAP2重组质粒,该质粒能直接激活抗原提呈细胞,可以使重组质粒具有较强的免疫原性和免疫反应性。 展开更多
关键词 白假丝酵母菌 蛋白酶 SAP2基因 重组质粒 基因疫苗
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白念珠菌分泌的天冬氨酸蛋白酶6诱导人单核细胞凋亡
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作者 崔凡 李丹 +2 位作者 陈霞 王有为 杨戈 《实用医院临床杂志》 2017年第4期30-32,共3页
目的检测白念珠菌分泌的天冬氨酸蛋白酶6(Sap6)对人类单核细胞系(THP-1细胞)增殖的影响,明确Sap6蛋白是否具有诱导单核细胞凋亡的活性。方法用XTT比色法检测25、50μg/ml Sap6对THP-1细胞增殖率的影响;在流式细胞仪下用Annexin V-FITC/P... 目的检测白念珠菌分泌的天冬氨酸蛋白酶6(Sap6)对人类单核细胞系(THP-1细胞)增殖的影响,明确Sap6蛋白是否具有诱导单核细胞凋亡的活性。方法用XTT比色法检测25、50μg/ml Sap6对THP-1细胞增殖率的影响;在流式细胞仪下用Annexin V-FITC/PI细胞凋亡试剂盒检测25、50μg/ml Sap6诱导THP-1细胞凋亡情况;用Con A-FITC/DAPI双染法在荧光显微镜下观察Sap6作用于THP-1细胞的位置。结果与25μg/ml比较,50μg/ml Sap6蛋白显著抑制人THP-1细胞增殖率(P=0.0001),并提高THP-1细胞早期凋亡率(P=0.0001);Sap6蛋白进入THP-1细胞内,结合于细胞核。结论白念珠菌分泌的Sap6在体外能够进入人单核细胞内,诱导凋亡,从而抑制细胞增殖率。 展开更多
关键词 白念珠菌 人单核细胞系 分泌蛋白酶6 细胞凋亡
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六味安神胶囊联合氨氯地平贝那普利治疗老年原发性高血压伴焦虑抑郁障碍患者的临床疗效及对NR2B蛋白表达的干预作用
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作者 李慧琼 马圣军 +2 位作者 马训平 刘丽 柳丹 《广州中医药大学学报》 CAS 2024年第8期2001-2008,共8页
【目的】分析六味安神胶囊联合氨氯地平贝那普利治疗老年原发性高血压(essential hypertension,EH)伴焦虑抑郁障碍患者的临床疗效及对N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基(NR2B)蛋白表达的干预作用。【方法】选取该院老年科2020年12月至2022年1... 【目的】分析六味安神胶囊联合氨氯地平贝那普利治疗老年原发性高血压(essential hypertension,EH)伴焦虑抑郁障碍患者的临床疗效及对N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基(NR2B)蛋白表达的干预作用。【方法】选取该院老年科2020年12月至2022年12月就诊的138例老年原发性高血压伴焦虑抑郁障碍痰热壅盛证患者进行回顾性研究,根据治疗方案的不同将患者分为观察组和对照组,每组各69例。对照组给予氨氯地平贝那普利及常规心理治疗,观察组在对照组的基础上给予六味安神胶囊治疗,疗程为1个月。观察2组患者治疗前后血压指标[收缩压(SBP)、舒张压(DBP)]、汉密尔顿焦虑量表(HAMA)评分、汉密尔顿抑郁量表(HAMD)-17项评分、NR2B蛋白表达量、单胺类神经递质[多巴胺(DA)、肾上腺素(NE)、5-羟色胺(5-HT)]的变化情况,并比较2组患者的临床疗效和不良反应总发生率。【结果】(1)治疗1个月后,观察组的总有效率为95.65%(66/69),对照组为75.36%(52/69),组间比较(χ^(2)检验),观察组的疗效明显优于对照组(P<0.01)。(2)治疗后,2组患者的SBP、DBP均较治疗前明显降低(P<0.05),且观察组对SBP、DBP的降低作用均明显优于对照组(P<0.01)。(3)治疗后,2组患者的HAMA评分和HAMD-17项评分均较治疗前明显降低(P<0.05),且观察组对HAMA评分和HAMD-17项评分的降低作用均明显优于对照组(P<0.01)。(4)治疗后,2组患者的NR2B蛋白表达量均较治疗前明显降低(P<0.05),且观察组对NR2B蛋白表达量的降低作用明显优于对照组(P<0.01)。(5)治疗后,2组患者的血清DA、NE、5-HT水平均较治疗前明显降低(P<0.05),且观察组对血清DA、NE、5-HT水平的降低作用均明显优于对照组(P<0.01)。(6)观察组的不良反应总发生率为2.90%(2/69),对照组为5.80%(4/69),组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。【结论】六味安神胶囊联合氨氯地平贝那普利可有效减轻老年原发性高血压伴焦虑抑郁障碍痰热壅盛证患者的不良情绪,降低血压,抑制NR2B蛋白过度表达,纠正单胺类神经递质紊乱,且联合治疗未引发严重不良反应,安全有效。 展开更多
关键词 六味安神胶囊 氯地平贝那普利 老年原发高血压 焦虑抑郁障碍 痰热壅盛 N-甲基-D-受体2B亚基(NR2B)蛋白
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白念珠菌分泌型天冬氨酸蛋白酶的研究进展
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作者 秦振宇 《国外医学(皮肤性病学分册)》 北大核心 1995年第6期341-344,共4页
目前的间接研究,趋向于肯定分泌型天冬氨酸蛋白酶在白念珠菌病发病中的作用。本文综述了近几年中此酶在分子特征、基因及其表达、分泌机制和致病机理等方面的文献报道。
关键词 白念珠菌 蛋白酶 分泌
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合并2型糖尿病对椎间盘退变患者血清半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9、B细胞淋巴瘤2表达水平的影响及其临床意义 被引量:2
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作者 臧燕伟 姚明言 史鹏鹏 《广西医学》 CAS 2021年第6期685-689,共5页
目的探讨合并2型糖尿病对椎间盘退变患者血清半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9(Caspase-9)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)表达水平的影响及其临床意义。方法根据是否合并2型糖尿病将343例椎间盘退变患者分为2型糖尿病组216例,非2型糖尿病组127例。比较... 目的探讨合并2型糖尿病对椎间盘退变患者血清半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9(Caspase-9)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)表达水平的影响及其临床意义。方法根据是否合并2型糖尿病将343例椎间盘退变患者分为2型糖尿病组216例,非2型糖尿病组127例。比较两组血清Caspase-9、Bcl-2及炎症因子表达水平,以及腰椎间盘退变程度,分析2型糖尿病合并椎间盘退变患者血清Caspase-9、Bcl-2水平与椎间盘退变程度Pfirrmann评分的相关性以及两组患者Caspase-9和Bcl-2水平的相关性。结果 2型糖尿病组患者血清Caspase-9、白细胞介素(IL)-6、IL-18、C反应蛋白水平均高于非2型糖尿病组,血清Bcl-2水平低于非2型糖尿病组;2型糖尿病组患者L_(1/2)、L_(2/3)、L_(3/4)、L_(4/5)、L_(5)/S_(1)节段椎间盘Pfirrmann评分均高于非2型糖尿病组。2型糖尿病合并椎间盘退变患者血清Caspase-9水平与L_(1/2)、L_(2/3)、L_(3/4)、L_(4/5)、L_(5)/S_(1)节段椎间盘Pfirrmann评分均呈正相关,血清Bcl-2水平与L_(1/2)、L_(2/3)、L_(3/4)、L_(4/5)、L_(5)/S_(1)节段椎间盘Pfirrmann评分均呈负相关;两组患者血清Caspase-9水平与Bcl-2水平均呈负相关(均P<0.05)。结论患有2型糖尿病的椎间盘退变患者血清Caspase-9水平升高、Bcl-2水平降低,二者与椎间盘退变程度有关,可能共同调节细胞凋亡,从而加重椎间盘退变的程度。 展开更多
关键词 半胱蛋白酶9 B细胞淋巴瘤2 2型糖尿病 椎间盘退变 合并症 病变程度
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