猪源分泌性白细胞蛋白酶抑制因子的原核表达及单克隆抗体制备

【目的】制备猪源分泌性白细胞蛋白酶抑制因子(SLPI)及其单克隆抗体,为建立猪源SLPI检测方法及其功能研究提供试验材料。【方法】将经串联的猪源SLPI基因克隆至pET-28a(+)、pGEX-6P-1载体构建重组表达载体;利用大肠杆菌表达系统表达重组蛋白,采用SDS-PAGE分析重组蛋白的诱导表达情况;重组菌经超声破碎以镍柱对重组蛋白进行纯化,并进行SDS-PAGE和Western blotting鉴定。用纯化后的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,经细胞融合制备杂交瘤细胞,采用间接ELISA筛选和鉴定所制备单克隆抗体和亚类,利用Western blotting及间接免疫荧光(IFA)方法鉴定单克隆抗体的特异性。【结果】试验成功构建了pGEX-6P-1-SLPI、pET-28a-SLPI重组质粒,获得纯度较高的His-SLPI、GST-SLPI重组蛋白,分子质量分别为27和50 ku,前者为包涵体表达,后者为可溶性表达;获得3株可稳定分泌抗猪SLPI单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其中,9D10为IgG3亚类,9G11、10E2为IgG2b亚类;3株单克隆抗体均可与猪肠上皮细胞内的SLPI结合,9D10在细胞核中显示较强的荧光信号,而9G11、10E2在细胞浆和细胞核中均有荧光信号。【结论】本研究成功制备了重组His-SLPI和GST-SLPI蛋白,获得3株稳定分泌抗猪源SLPI单克隆抗体,特异性良好,为进一步研究猪源SLPI特性及其在黏膜免疫中的作用搭建技术平台。

分泌性白细胞蛋白酶抑制因子在结肠癌中的表达及其临床意义

目的探讨结肠癌组织中白细胞蛋白酶抑制因子（SLPI）的表达及其临床意义。方法选择150例结肠癌及癌旁正常组织制成微阵列芯片作为研究对象，用免疫组织化学方法检测组织芯片中SLPI蛋白表达并评分，采用f检验比较不同SLPI表达水平和结肠癌临床病理f生特征，包括年龄、性别、组织分化程度、TNM分期、淋巴结转移及远处转移之间的关系。结果SLPI在结肠癌组织中相对于正常结肠组织高表达，SLPI蛋白高表达与肿瘤分化[低分化：8（42．1％）”s11（57．9％）；中腐分化：3（2．3％）w128（97．7％）、TNM分期：[Ⅲ～Ⅳ：25（29．4％）口s60（70．6％）]、Ⅰ～Ⅱ：2（3．1％）郴63（96．9％）、淋巴结转移[18（28．6％）w45（71．4％）]及远处转移[11（84．6％）傩2（15．4％）]相关（P〈O．05），而与患者的性别和年龄差异无统计学意义（P〉0．05）。结论SLPI表：g_Jk平与肿瘤分化程度、TNM分期、淋巴结转移及远处转移有关，有可能作为判断结肠癌患者预后的指标。

分泌型白细胞蛋白酶抑制剂对急性肺损伤大鼠趋化因子fractalkine表达的影响

目的:探讨分泌型白细胞蛋白酶抑制剂(SLPI)对急性肺损伤新生大鼠肺组织中趋化因子fractalkine表达的影响。方法:利用内毒素(LPS)气管内滴入制备新生大鼠急性肺损伤的模型;设立SLPI治疗组、LPS组、生理盐水(NS)对照组。SLPI治疗组在气管内滴入LPS前预先滴入400μg SLPI。分别在6,12,24 h后取肺组织匀浆,用ELISA法分别测定各组趋化因子fractalkine蛋白水平。RT-PCR测定fractalkine的mRNA水平。结果:在各时间点,SLPI治疗组肺组织中Fractalkine蛋白水平及mRNA水平均显著低于LPS组。24 h时SLPI治疗组肺组织中fractalkine蛋白为(3 124.9±155.6)pg/ml,显著低于LPS组的(4 231.4±177.9)pg/ml和NS对照组的(4 412.4±201.5)pg/ml,F=42.8,P<0.05,差异有统计学意义。24 h时SLPI治疗组肺组织中fractalkine的mRNA相对水平为47.0±5.1,显著低于LPS组的87.3±8.2和NS对照组的81.1±9.9,F=33.2,P<0.05,差异有统计学意义。结论:SLPI能有效抑制新生大鼠急性肺损伤时肺组织中趋化因子fractalkine的表达。

分泌性白细胞蛋白酶抑制因子在创伤愈合中的潜在应用前景

分泌性白细胞蛋白酶抑制因子(SLPI)是一种可以对抗各种丝氨酸蛋白酶活性的12kDa阳离子蛋白,其羧基末端具有抑制糜蛋白酶、胰弹性蛋白酶等方面的活性,氨基末端有抗细菌、抗真菌、抗逆转录病毒等多方面的活性。近来研究发现,SLPI可通过生长增殖、细胞凋亡、组织改建等多种途径来调控创伤微环境,从而影响创伤愈合进程。本文就SLPI参与创伤愈合过程的可能环节和作用综述如下。

分泌性白细胞肽酶抑制剂与肿瘤关系的研究进展

分泌性白细胞肽酶抑制剂属于Kazal型-丝氨酸蛋白酶抑制剂家族,其与肿瘤发生发展、生物学行为及其预后有较密切的关系,而成为研究热点。在卵巢癌、非小细胞性肺癌、胃癌等均有表达,且与肿瘤的发生、发展相关。然而,到目前为止,分泌性白细胞肽酶抑制剂在肿瘤中的作用仍然存在争议。探讨其在肿瘤及抗肿瘤中的作用及可能的肿瘤发生、发展机制,将有助于肿瘤的防治及对疾病预后的判断。

分泌性白细胞蛋白酶抑制因子在结肠癌中的表达及其临床意义

目的探讨分泌性白细胞蛋白酶抑制因子(SLPI)在结肠癌中的表达及其临床意义。方法选取沧州市中心医院2014年2月—2017年6月收治的结肠癌患者50例,通过免疫组织化学法检测患者SLPI表达水平,并分析SLPI表达水平与结肠癌患者临床病理特征的关系。结果高分化组患者SLPI表达水平高于低分化组,Ⅰ~Ⅱ期患者SLPI表达水平高于Ⅲ~Ⅳ期,现淋巴结转移患者SLPI表达水平高于未现淋巴结转移,现远端转移患者SLPI表达水平高于未现远端转移(P<0.05);不同年龄、性别患者SLPI表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论结肠癌患者的SLPI表达水平与结肠癌淋巴结转移、远处转移、肿瘤分化、TNM分期相关,可将其作为判定临床结肠癌预后的重要指标和结肠癌靶向药物治疗的新靶点。

分泌性白细胞蛋白酶抑制因子对口腔黏膜屏障保护作用的研究

分泌性白细胞蛋白酶抑制因子是一种广泛存在于黏膜分泌液中的因子,具有抑制蛋白酶、抗微生物、促进组织修复等多种生物学功能,是黏膜表面防御屏障的重要组成成分。本文对近期有关其结构、功能的研究进行综述,并重点探讨它对口腔黏膜屏障保护作用。

分泌性白细胞蛋白酶抑制因子在不同分期的结肠癌组织中的表达

目的 :探讨分泌性白细胞蛋白酶抑制因子(SLPI)在不同分期的结肠癌组织中的表达情况。方法 :择取2014年2月至2017年6月期间河北省沧州市中心医院收治的50例结肠癌患者作为研究对象。采用免疫组织化学法对这些患者进行SLPI检测。分析SLPI在不同分期结肠癌组织中表达的情况。结果 :不同分期的结肠癌患者其癌组织中SLPI的表达水平存在一定的差异。Ⅰ期结肠癌患者和Ⅱ期结肠癌患者癌组织中SLPI的表达水平相比,差异无统计学意义(P>0.05)。Ⅲ期结肠癌患者和Ⅳ期结肠癌患者癌组织中SLPI的表达水平相比,差异无统计学意义(P>0.05)。Ⅲ期结肠癌患者和Ⅳ期结肠癌患者癌组织中SLPI的表达水平均低于Ⅰ期结肠癌患者和Ⅱ期结肠癌患者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 :Ⅰ期结肠癌患者和Ⅱ期结肠癌患者癌组织中SLPI的表达水平均高于Ⅲ期结肠癌患者和Ⅳ期结肠癌患者。SLPI可作为鉴别结肠癌分期、预测结肠癌患者预后的重要指标。

分泌性白细胞蛋白酶抑制因子在肿瘤中的作用

分泌性白细胞蛋白酶抑制因子(secretory leukocyte protease inhibitor,SLPI)是一个可抑制多种丝氨酸蛋白酶活性的阳离子蛋白质。SLPI羧基端具有抑制糜蛋白酶、胰弹性蛋白酶等抗蛋白酶活性,氨基端的功能尚不清楚,可能具有抗菌、抗真菌、抗病毒、抗炎和免疫调节等活性。近年来研究发现,SLPI在有些癌症,如卵巢癌、肺癌、胃癌、结肠癌中表达升高,但在有些癌症如乳腺癌、前列腺癌、口腔癌中表达降低。目前,尚未完全了解SLPI在调控致癌效应中的作用。本文就SLPI在肿瘤及抗肿瘤中的可能作用及其机制进行综述,为SLPI在抗肿瘤中的应用提供新思路。

分泌性白细胞蛋白酶抑制剂(SLPI)在前列腺癌组织中表达下调及意义

目的探讨分泌性白细胞蛋白酶抑制剂在不同前列腺组织中表达情况。方法运用半定量聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测来源于正常前列腺(5例)、良性前列腺增生(BPH)及BPH细胞株(13例)、前列腺癌及前列腺癌细胞株(8例)的上皮细胞中SLPI mRNA表达水平;运用蛋白印迹方法(western blot)检测不同前列腺组织的上皮细胞中SLPI蛋白表达水平;免疫组化分析正常前列腺(20例)、良性前列腺增生(50例)、前列腺癌(103例)组织中SLPI表达水平。根据染色强度及阳性率,分为四个等级,进行分析。结果SLPI mRNA水平在肿瘤上皮中下调表达,在正常组织和良性前列腺增生组织中未发现表达差异。Western blot结果提示SLPI在前列腺肿瘤上皮中表达下调。免疫组化证实SLPI在前列腺肿瘤中表达低于良性前列腺组织,SLPI表达水平在正常前列腺组织和良性增生前列腺组织中差异无显著性。结论SLPI在前列腺肿瘤组织中表达下调,提示SLPI在前列癌的发生和进展中可能扮演一定角色。

COPD患者急性加重期呼吸道分泌性白细胞蛋白酶抑制剂含量调节机制研究进展

慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者稳定期呼吸道内分泌性白细胞蛋白酶抑制剂(SLPI)含量增加,急性加重期反而下降,这种现象以蛋白酶的反向调节、TGF-β1/Smads信号通路的下调、病原体多种机制参与SLPI含量的调控等假说为主,但确切机制尚未完全阐明。

不同程度肺炎患儿分泌型白细胞蛋白酶抑制剂与核因子-κB水平变化及临床意义

目的探讨不同程度肺炎患儿分泌型白细胞蛋白酶抑制剂(SLPI)与核因子-κB(NF-κB)水平变化及其临床意义。方法选择66例支气管肺炎患儿,分为普通肺炎组和重症肺炎组,分别在入院24h内(治疗前)和治疗5d后(治疗后)检测SLPI水平和NF-κB表达水平,同时选择20例健康儿童作为健康对照组。结果治疗前,重症肺炎组和普通肺炎组患儿SLPI水平明显低于健康对照组,NF-κB水平明显高于健康对照组(P<0.05)。治疗后,重症肺炎组和普通肺炎组SLPI水平较治疗前显著升高,NF-κB水平显著降低(P<0.05),但重症肺炎组的SLPI水平仍低于健康对照组,NF-κB水平仍高于健康对照组,差异均有统计学意义(P<0.05),普通肺炎组的SLPI水平和NF-κB水平与健康对照组差异无统计学意义(P<0.05)。结论对肺炎患儿早期检测SLPI及NF-κB水平,有助于重症肺炎的早期诊断、治疗和预后。

分泌型白细胞蛋白酶抑制剂对内毒素致新生大鼠急性肺损伤的抗感染作用

目的探讨分泌型白细胞蛋白酶抑制剂(SLPI)对内毒素(LPS)致新生大鼠急性肺损伤(ALI)的抗感染作用。方法利用LPS气管内滴入制备新生大鼠ALI模型,设立SLPI治疗组、LPS组、生理盐水(NS)对照组。SLPI治疗组在气管内滴入LPS前30 min预先滴入400μg SLPI。4 h后取各组大鼠肺组织匀浆,用琼脂扩散法、ELISA法分别测定中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)活性和TNFα-水平。结果LPS组肺组织NE活性、TNFα-及总蛋白水平均显著高于SLPI治疗组和对照组,3组比较差异有显著性(F=1475.28,35.8,21.6 P均<0.01);SLPI治疗组肺组织NE活性、TNF-α及总蛋白水平均显著低于LPS组,差异有显著性(q=66.14,7.02,5.60 P均<0.01);但高于对照组,亦有显著性差异(q=22.18,5.07,3.77 P<0.01,0.05)。结论SLPI对LPS致新生大鼠急性肺损伤有抗感染作用。

AECOPD患者呼出气冷凝液中分泌性白细胞蛋白酶抑制剂的检测及其临床意义

目的分析慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)患者治疗前后呼出气冷凝液(EBC)中分泌性白细胞蛋白酶抑制剂(SLPI)浓度的变化,及其与AECOPD各临床指标的相关性。方法随机选择AECOPD患者30例,正常健康者18例,采用ELISA方法检测AECOPD组治疗前后及健康对照组EBC中SLPI浓度,应用Pearson直线相关分析AECOPD组治疗前EBC中SLPI浓度与COPD临床特征、肺功能(PEF、FEV1%预计值)、血气分析、血WBC计数等指标的相关性。结果经抗感染、氧疗、解痉、激素等常规治疗7天后,AECOPD组EBC中SLPI浓度明显高于治疗前(P<0.05);AECOPD组治疗前EBC中SLPI浓度与患者FEV1%预计值、痰量、呼吸困难症状密切相关(P<0.05),与患者PEF、血白细胞(WBC)计数、动脉血pH值、PaO2/FiO2、PaCO2无相关性(P均>0.05)。结论 AECOPD患者EBC中SLPI浓度可作为反映病情的严重程度和临床转归的指标。

分泌型白细胞蛋白酶抑制因子在胸腔积液中的水平及意义

目的探讨各种疾病所致的胸腔积液中分泌型白细胞蛋白酶抑制因子的水平及其临床意义。方法收集85例胸腔积液及其同源外周血(分为四组,其中结核性胸腔积液组为29例,恶性胸腔积液组30例,细菌性胸腔积液组15例,漏出液组11例)。应用ELISA法测定胸水上清液和血清中分泌型白细胞蛋白酶抑制因子(SLPI)的浓度,并对结果及意义进行分析。结果 (1)胸腔积液间:结核组浓度(21 1710±29 130)pg/ml,分别与肿瘤组(99 274±21 807)pg/ml、细菌组(127 980±34 299)pg/ml及漏出液组(109 360±21 619)pg/ml相比,差异均有统计学意义(P<0.05);肿瘤组、细菌组及漏出液组三组之间相比差异均无统计学意义(P>0.05)。(2)血清中:结核组(35 116±4 122.1)pg/ml及肿瘤组(2 5767±2 054)pg/ml分别与漏出液组(51 377±10 190)pg/ml相比差异有统计学意义(P<0.05);漏出液组与细菌组(52 396±8 954.5)pg/ml比较差异无统计学意义,结核组、肿瘤组及细菌组之间差异亦无统计学意义(P>0.05)。(3)胸腔积液与血清液间:结核组、肿瘤组与漏出液组之间差异有统计学意义(P<0.05);而在细菌组差异无统计学意义(P>0.05)。(4)各组胸腔积液与同源外周血清之间无相关性(P>0.05)。(5)受试者工作特征曲线(ROC曲线)结果显示:胸腔积液中SLPI浓度对结核性胸腔积液的最佳诊断阈值为23 6071 pg/ml,相应灵敏度和特异度分别为43.33%和96.77%。结论白细胞蛋白酶抑制因子(SLPI)有可助于结核性与恶性、细菌性及漏出性胸腔积液的鉴别。SLPI浓度测定有可能成为结核性胸腔积液的新诊断方法。

分泌性白细胞蛋白酶抑制剂与COPD的关系

COPD是严重影响人类健康的多发病之一,其主要特征是气道重塑和动态气体陷闭引起的气流受限,且气流受限呈持续性、进行性发展.其发病机制尚未完全阐明,目前认为,蛋白酶-抗蛋白酶失衡是造成COPD气道重塑及气流不可逆受限的重要原因[1],同时炎症反应及氧化-抗氧化失衡也参与其中。

抗人分泌性白细胞蛋白酶抑制剂单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备抗人分泌性白细胞蛋白酶抑制剂(hSL-PI)单克隆抗体(mAb)。方法以hSLPI为免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术制备抗hSLPI mAb。采用Ig类与亚类鉴定试剂盒鉴定mAb的Ig亚类;通过ELISA、Western blot、免疫组化染色法、流式细胞术、激光共聚焦显微镜技术鉴定mAb的特异性。结果获得4株可稳定分泌抗hSLPI mAb的杂交瘤细胞,其分泌的mAb均为IgM。Western blot分析表明,此株mAb所识别的靶分子的相对分子质量(Mr)约为12000。免疫组化染色表明,mAb与肺和结肠组织的上皮细胞、疑似肥大细胞、扁桃体和包皮组织的疑似肥大细胞的反应性均呈阳性。流式细胞术分析显示,4株mAb与人肺腺癌细胞系A549细胞中的SLPI均呈阳性反应。激光共聚焦扫描显微镜观察,荧光标记的阳性反应物主要位于A549细胞的胞质内。结论成功地制备抗hSLPI mAb,为变态反应性疾病和炎症性疾病的研究工作提供了有用的试剂。

炎症性肠病患者外周血白细胞介素-22、基质金属蛋白酶-9、巨噬细胞移动抑制因子表达及其临床意义

背景:近年来炎症性肠病(IBD)的发病率呈上升趋势,其发病机制尚未完全阐明。目的:探讨IBD患者外周血白细胞介素-22(IL-22)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、巨噬细胞移动抑制因子(MIF)表达及其临床意义。方法:纳入2011年5月-2014年11月苏州大学附属第一医院收治的IBD患者80例,其中克罗恩病(CD)43例,溃疡性结肠炎(UC)37例;健康体检者40名作为正常对照组。采用ELISA法检测外周血IL-22、MMP-9、MIF表达水平,对CD和UC活动期IL-22、MMP-9、MIF表达水平行多因素Logistic回归分析,并以ROC曲线评价IL-22、MMP-9、MIF筛查CD和UC活动期的诊断性能。结果:CD组和UC组外周血IL-22、MMP-9、MIF表达水平较正常对照组显著升高(P<0.05),CD组与UC组间差异无统计学意义(P>0.05)。CD和UC活动期外周血IL-22、MMP-9、MIF表达水平较缓解期显著升高(P<0.05);IL-22、MMP-9联合检测筛查IBD活动期的ROC曲线下面积(AUC)(CD:0.853,UC:0.867)优于IL-22、MMP-9、MIF三项指标单独检测(CD:0.747、0.770和0.699,UC:0.774、0.815和0.761)。结论:IBD患者外周血IL-22、MMP-9、MIF表达水平显著升高,且与疾病活动性密切相关。IL-22、MMP-9联合检测有利于提高IBD活动期筛查的准确性。

慢性阻塞性肺疾病患者气道内分泌性白细胞蛋白酶抑制物表达水平及与肺功能的相关性

目的探索慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者稳定期与急性加重期气道内SLPI表达水平差异,明确COPD患者肺功能与气道内SLPI表达水平相关性。方法纳入40例COPD患者及40例健康成人为研究对象,检测健康成人痰液中的SLPI浓度及COPD患者稳定期和急性加重期痰液中的SLPI浓度和肺功能(FEV1%pred,FEV1/FVC),比较COPD患者气道内SLPI水平与健康成人差异及稳定期与急性加重期差异,并分析SLPI表达水平与肺功能相关性。结果稳定期COPD患者与健康志愿者气道内SLPI表达水平差异无统计学意义[(46.74±2.30)μg/L vs.(47.60±2.50)μg/L,t=1.321,P=0.190]。COPD患者急性加重期较稳定期气道内SLPI水平明显降低[(38.148±3.59)μg/L vs.(46.74±2.30)μg/L,t=35.707,P=0.01]。COPD患者稳定期气道内SLPI表达水平与FEV1/FVC没有明显相关性(r=0.215,P=0.183),但与FEV1呈正相关(r=0.466,P=0.002);COPD患者急性加重期气道内SLPI表达水平与FEV1/FVC没有明显相关性(r=0.088,P=0.589),但与FEV1%Pred呈正相关(r=0.369,P=0.019)。结论COPD患者急性加重期较稳定期气道内SLPI水平明显降低,气道内SLPI表水平与FEV1%Pred呈正相关。

人分泌性白细胞蛋白酶抑制剂在果蝇细胞中的稳定表达及鉴定

目的：在果蝇S2细胞中表达人分泌性白细胞蛋白酶抑制剂（ SLPI ）并对其生物学性质进行初步测定。方法以A549细胞RNA为模板，利用反转录PCR方法扩增得到SLPI蛋白的编码序列，并将其克隆到表达载体pMT/V5-His A中，构建pMT/V5-SLPI 表达质粒，通过与抗性筛选质粒pCoHygro 共转染S2细胞，经潮霉素B筛选3～4周，得到能够稳定表达SLPI蛋白的多克隆细胞系。经CuSO 4诱导表达后，用RT-PCR及Western blot分析SLPI基因的转录和表达。结果获得了抗性稳定的多克隆S2细胞株S2/SLPI，CuSO4诱导后，RT-PCR证明SLPI在S2/SLPI细胞中能高效转录，Western blot 在细胞培养上清中检测到表达的重组SLPI蛋白。结论在果蝇S2细胞中成功表达了人SLPI，SLPI的成功表达为进一步开展SLPI促进免疫应答及其在抗病毒感染等方面的作用研究提供了重要基础。