补肾健脾活血方干预沉默DKK1、Sost骨细胞对细胞活性和相关蛋白的影响研究

目的用补肾健脾活血方干预沉默Dickkopf(DKK)1、骨硬化蛋白Sclerostin(Sost)转染的成骨细胞,观察其对细胞活性和相关蛋白的影响。方法将培养好的细胞分为空白对照组(NC组)、沉默DKK1(Ad-sh DKK1)组和沉默Sost(Ad-sh Sost)组,空载腺病毒转染NC组,沉默DKK1和Sost重组腺病毒转染其余两组,再分别给予空白血清和含药血清干预,观察细胞增殖、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性以及骨相关蛋白变化情况。结果 (1)三组含药血清干预后的细胞活性强于空白血清干预后的细胞活性。与空白血清干预的三组比较,含药血清干预后的三组细胞活性在24、48、72 h均增加,尤其在72 h时含药血清对Ad-sh DKK1组的细胞活性作用更强,与同组空白血清比较,差异有统计学意义(P<0.05);(2)三组含药血清干预与空白血清干预比较ALP活性明显升高,差异有统计学意义(P<0.01)。含药血清干预后,与NC组比较,其余两组ALP活性显著升高,差异有统计学意义(P<0.01),Ad-sh DKK1组和Ad-sh Sost组比较,ALP活性升高不明显;(3)与空白血清干预比较,含药血清干预后三组的结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)、骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)均升高,与NC组比较,Ad-sh DKK1组OPG、OPN差异有统计学意义(P<0.05和P<0.01),Ad-sh Sost组CTGF、OPG、OPN差异有统计学意义(P<0.05)。结论补肾健脾活血方含药血清可显著促进沉默DKK1、Sost干预后细胞增殖和提高ALP活性,上调沉默DKK1、Sost腺病毒转染细胞CTGF、OPG、OPN的表达。

旋毛虫新生幼虫期特异性T668全长cDNA的克隆及序列分析

利用旋毛虫新生幼虫期特异性 c DNA片段 T6 6 8- SS2作为核酸探针 ,在新生幼虫 c DNA文库中筛选出 10个阳性克隆。序列测定及分子生物学软件分析表明 ,克隆 G10 - 6的 c DNA片段全长 16 0 0 bp,含 12 90 bp的开放阅读框架 ,编码 1个由 4 30个氨基酸残基组成的多肽 ,其相对分子质量理论推导值为 4 6 84 0 ,等电点 (PI)为 9.6 5。主导氨基酸为Ser(11.39% )和 Thr(10 .93% )。开放阅读框架中具有丝氨酸蛋白酶保守功能区及酶活性位点结构 ,其 N末端的信号肽及 2个糖基化位点表明 ,其为分泌性糖蛋白 ,预示其可能在细胞外起着重要作用。DNA同源性分析表明 ,该 c DNA为一新的 c DNA分子。

血管生成素样蛋白-4在动脉粥样硬化过程中的双重作用

血管生成素样蛋白（angiopoietin-like protein,ANGPTL）是分泌性糖蛋白,与血管生成素（angiopoietin）结构同源;其参与血管生成调控,以及糖脂代谢调控。血管生成素样蛋白-4（ANGPTL-4）,因具有抑制血管生成效应、以及对脂蛋白酯酶（lipoprotein lipase,LPL）的抑制效应,而成为近年来医学界的研究热点。最近,耶鲁大学Carlos F.Hernando团队揭示：ANGPTL-4密切参与动脉粥样硬化形成过程;尤为让人惊奇的是,该分子在动脉粥样硬化形成过程中,发挥＂双重作用＂。

恶性胶质瘤SPARC基因的甲基化状态及其表达水平分析

目的探讨胶质瘤组织中富含半胱氨酸的酸性分泌性糖蛋白(SPARC)基因甲基化状态和mRNA表达水平及两者相关性。方法2008年3月至2011年12月收集98例胶质瘤组织标本和98例正常脑组织标本(颅脑损伤患者术中切取)以及胶质瘤细胞系LN229,提取DNA和RNA,利用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测SPARC基因甲基化状态;利用实时荧光定量PCR检测SPARC基因mRNA表达水平。结果胶质瘤细胞系LN229中SPARC基因呈高度甲基化,其mRNA表达水平极低;去甲基化处理后,mRNA表达水平明显升高(P<0.01)。胶质瘤组织中SPARC基因甲基化率(70.4%,69/98)明显高于正常脑组织(21.4%,21/98;P<0.01),但其mRNA表达水平明显低于正常脑组织(P<0.01)。而且随着胶质瘤级别的增加,胶质瘤组织中SPARC基因甲基化率明显呈升高(P<0.05),但其mRNA表达水平却明显降低(P<0.01)。伴有SPARC基因甲基化的胶质瘤组织SPARC基因mRNA表达水平明显低于非甲基化胶质瘤组织(P<0.01)。然而,伴有SPARC基因启动子甲基化的胶质瘤患者生存期与非甲基化患者无统计学差异(P>0.05)。结论胶质瘤组织中SPARC基因呈高甲基化状态,其mRNA呈低水平表达;SPARC基因mRNA表达水平受其甲基化的影响;SPARC基因高甲基化可能与胶质瘤的发生相关。

Fstl1在肺部疾病中的研究进展

Fstl1是一种胞外糖蛋白,也是一种分泌型骨形态发生蛋白(BMP)拮抗剂,在文献中,Fstl1有许多不同的名称,如转化生长因子β1诱导蛋白36(TSC-36)或者卵泡抑素相关蛋白(Follistatin-Related Protein FRP)等。最早是由Shibanuma等[1]利用转化生长因子β1刺激小鼠成骨细胞系MC3T3-EL而分离出来的一种相对分子质量约35kDa的分泌性糖蛋白。

旋毛虫ES抗原基因的克隆和序列分析

目的 完成旋毛虫ES抗原 (Excretory -secretoryAntigen)中 4 3kDa分泌性糖蛋白基因和 5 3kDa分泌性抗原基因的克隆和测序 ,并与已发表的该两种基因的相关序列比较、分析。方法 通过RT -PCR ,从旋毛虫幼虫总RNA中扩增得到特异性片段 ,利用TA克隆将PCR产物克隆入 pUC -T载体中并进行测序及同源性比较。 结果 RT -PCR扩增得到 4 3kDa分泌性糖蛋白基因和 5 3kDa分泌性抗原基因 ,序列分析表明 ,其核苷酸序列与已发表的 4 3kDa分泌性糖蛋白基因和 5 3kDa分泌性抗原的同源性均为 99%。结论 成功提取了旋毛虫幼虫的总RNA ,并用PT -PCR方法克隆了 4 3kDa分泌性糖蛋白基因和 5 3kDa分泌性抗原基因 ,这为两基因的表达及在医学、兽医学中应用研究奠定了基础。

骨唾液酸蛋白与乳腺癌细胞黏附性的相关性

[目的]探讨骨唾液酸蛋白(BSP)与人乳腺癌细胞黏附性的相关性。[方法]构建pCDNA3.1-myc-hisA(+)-BSP真核表达载体,在COS7细胞中表达并纯化BSP全长蛋白。以纤黏连蛋白、胶原和重组BSP蛋白包被96酶标板,细胞黏附实验检测MCF-7和MDA-MB-231在上述基质的黏附性。构建BSP正义和反义表达载体,及同pCDNA3.1(-)空载体稳定转染人乳腺癌细胞MCF-7获得稳定细胞株。细胞黏附实验检测不同BSP表达水平的各组MCF-7稳定细胞株在纤黏连蛋白(FN)和胶原(collagen)上的黏附性。免疫细胞化学检测各组MCF-7稳定细胞株中E-cadherin的表达。[结果]成功表达人骨唾液酸蛋白并证实其具有黏附性。分析不同BSP表达水平的乳腺癌细胞在不同基质上黏附性,结果显示转染正义BSP的MCF-7细胞在不同基质上的OD595值(FN:1.93±0.06;collagen:1.82±0.15)显著高于反义组(FN:0.83±0.19;collagen:0.89±0.08)、空载体转染组(FN:1.49±0.18;collagen:1.44±0.09)和亲本细胞组(FN:1.52±0.27;collagen:1.42±0.12),有统计学差异(P<0.05)。转染正义BSP的MCF-7细胞中E-cadherin的表达与其它组别相比明显降低。[结论]BSP以RGD序列介导细胞黏附,其表达水平与乳腺癌细胞黏附性相关。