卡介苗分泌性130kD蛋白是诱导IL-12产生的主要成分

白介素12和18在宿主保护性免疫中起着非常重要的作用,它可以诱导γ-干扰素的产生。众所周知,在结核感染早期,γ-干扰素的诱导是产生保护性 T 细胞的基础。在体外和体内试验中,活的卡介苗都可以诱导出较高的γ-干扰素水平,而热杀死的卡介苗不能。在本研究中,我们调查了小鼠 PEC 细胞分别经活卡介苗和热杀死卡介苗刺激后,所产生的 IL-12p40,IL-18和γ-干扰素的水平。通过对卡介苗培养过滤液诱导细胞因子能力调查,来探索为什么活的卡介苗可以诱导较高的γ-干扰素,而热杀死卡介苗却不能。研究发现,活的卡介苗可以激活巨噬细胞,诱导出 IL-12p40和 IL-18,而死的卡介苗却不能。活的卡介苗的培养过滤液可以诱导出 IL-12p40。而热杀死卡介苗培养过滤液却不能产生 IL-12p40。研究表明,活的卡介苗分泌到培养上清液中的分子质量为130kD 的蛋白类物质是细胞因子的诱导产生的关键因素。

评价γ干扰素释放分析T-SPOT.TB在肺外结核病诊断中的敏感性

目的评价γ干扰素释放分析T-SPOT.TB检测在肺外结核病诊断中的敏感性。方法对北京协和医院根据细菌学或/和组织学诊断的肺外结核患者31例,应用酶联免疫斑点技术检测6kD早期分泌靶向抗原和10kD培养滤过蛋白肽段库刺激后外周血中释放γ-干扰素的特异性T细胞。结果31例肺外结核患者中29例T-SPOT.TB检测阳性,敏感性为93.5%(95%CI84.8%～100%),6kD早期分泌靶向抗原肽段库刺激后斑点形成细胞数中位数为196/106PB-MCs(4分位间距72～532/106PBMCs),10kD培养滤过蛋白肽段库刺激后斑点形成细胞数中位数为276/106PBMCs(4分位间距72～568/106PBMCs),对两个肽段库总的斑点形成细胞中位数为612/106PBMCs(4分位间距192～1152/106PBMCs)。结论T-SPOT.TB检测对肺外结核诊断具有较高的敏感性。

结核分枝杆菌Hsp65-Esat6与hGM-CSF联合DNA疫苗的构建与体外研究

目的:应用分子生物学技术,构建p IHsp65-Esat6GM共表达质粒,并在真核细胞中表达.方法:以p EGHsp65Esat-6为模板经聚合酶链反应(PCR)扩增出Hsp65-Esat6基因,同时从质粒p ORF-h GM-CSF中扩增出基因佐剂h GM-CSF,分别克隆到真核表达载体p IRES的多克隆位点A(MCSA)和B(MCSB)中,构建p IHsp65-Esat6GM共表达质粒,并转染Hep G-2细胞中表达和检测.结果:酶切鉴定提示插入的基因片段大小分别为1.93 kb和0.47kb,测序分析表明克隆的Hsp65-Esat6和人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(h GM-CSF)序列与Gen Bank上公布序列完全一致;Western-bolt检测到Hsp65-Esat6融合蛋白相对分子质量(Mr)为75 000 k Da;RT-PCR方法检测出p IGM,p IHsp65GM和p IHsp65-Esat6GM转染组细胞均有h GM-CSF mRNA表达,三组细胞中h GM-CSF基因mRNA的表达量差异无统计学意义(P>0.05).ELISA方法检测到p IHsp65-Esat6GM转染组细胞培养上清中h GM-CSF的表达,且与空载体对照组比较差异有统计学意义(P<0.01).结论:成功构建和表达了p IHsp65-Esat6GM质粒,为研制优于卡介苗(BCG)的新型抗结核病的DNA疫苗奠定了基础.