基于FIASCO技术的合浦珠母贝微卫星标记分离与筛选研究

用FIASCO(Fast Isolation by AFLP of Sequences Containing Repeats)技术开展了合浦珠母贝Pinctada fucata基因组微卫星标记的分离与筛选研究。合浦珠母贝基因组DNA经限制性内切酶MseI酶切后与接头连接,用生物素标记的(CA)15探针与其杂交,然后用磁珠富集、洗脱获得单链目的片段,经PCR扩增后形成双链,最后进行克隆转化,构建微卫星富集文库。挑选克隆用探针引物(CA)15和载体引物进行第2次筛选,获得阳性克隆357个,测序结果表明,297个克隆(83.2%)含有微卫星序列,包括479个微卫星DNA结构域。其中完美型微卫星有370个(77.3%),非完美型95个(19.8%),复合型14个(2.9%)。合成引物49对,有31对(63%)扩增出目的产物,其中9对在种群中(n=32)具有扩增多态性,其多态信息含量PIC值在0.375―0.809之间,平均为0.536;等位基因数在2―9个之间,平均为4.889个;观测杂合度介于0.200―0.600之间,平均为0.415;期望杂合度的变化范围为0.454―0.844,平均为0.598。表明FIASCO技术适合于合浦珠母贝微卫星标记的分离与筛选。

晨鸣造纸厂污水中高效降解菌的分离与筛选

以晨鸣造纸厂污水中的活性污泥为材料,采用平板划线方法从中共分离出菌株22株,其中细菌14株,放线菌2株,酵母菌5株,霉菌1株。以CODCr值来计算不同菌株的降解率,从而筛选出降解能力较强的菌株。结果表明,晨明造纸厂污水的主要降解菌是细菌,其次是酵母菌,其中X3、X2、X4和J1的降解率较高,分别达到46.70%、45.72%、40.01%和39.39%;各菌株进入指数生长期的时间相差不大,在28℃处理条件下,达到最高降解能力的时间均为闷曝处理24h左右。

东方田鼠组织与血清中抗日本血吸虫相关蛋白的分离与筛选

本试验以兔、牛、人及感染日本血吸虫后小鼠血清蛋白为对照,分别提取东方田鼠和小鼠的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肌肉、皮肤、骨髓和脑组织蛋白,进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,综合比较和筛选东方田鼠组织及血清中潜在的抗日本血吸虫相关蛋白组分。结果表明,随着感染日龄的增加,小鼠在感染日本血吸虫后12和45d,其血清中85ku附近蛋白质条带较东方田鼠表达量明显上调,且有继续升高的趋势;东方田鼠肝脏及血清中150ku组分蛋白电泳条带与其他动物相同组织中相应蛋白质在表达量存在显著差异,蛋白质表达丰度高,该蛋白质组分可能与东方田鼠抗日本血吸虫作用相关。

降解天然树脂的微生物分离与筛选

从造纸厂采集的土样中,经过富集、初筛和多轮复筛实验,分离得到了5株降解天然树脂能力较强的微生物。采用液体发酵以及稳定性复筛的方法,从这5株微生物中筛选得到了降解天然树脂能力稳定并且降解率较高的菌株Z75、Z37。分别对这2株菌株进行形态学观察,培养24 h后的菌落直径均大于1 mm,菌株Z75菌体长度小于5μm,初步判断Z75菌株为短杆菌;菌株Z37菌体长度小于0.1μm,初步判断Z37为细球菌。对Z75菌株的降解条件进行研究,结果显示,在35 mL的Z75菌株发酵液中,最适降解反应的树脂底物颗粒(球形)质量为0.2 g,最适降解反应时间≥20 h;发酵条件和培养基初步优化的结果显示,Z75菌株发酵液降解天然树脂的降解率由优化前的6.5%左右提高到43.3%。

延吉市生活污水中高效降解菌的分离与筛选

以延吉市生活污水中的活性污泥为材料,采用平板划线方法共分离出菌株14株,其中细菌11株,放线菌1株和酵母菌2株.以CODCr为指标进行降解试验,从中筛选出4株降解能力超过40%的菌株.结果表明:生活污水的主要降解菌是细菌,各菌株进入指数生长期的时间相差不大,在28℃处理条件下,达到最高降解能力的时间均在闷曝处理24 h左右.

典型抗生素废水净化菌株的分离筛选及其效果研究

为使β-内酰胺环类抗生素生产废水得以有效处理,本研究以该类废水制作分离培养基,采用摇瓶实验模拟好氧曝气阶段,从活性污泥分离、筛选效应菌株,并对其进行鉴定,确定最佳作用条件,验证对该废水有机物的降解效果。实验结果显示:分离、筛选到B4、B5、B2和B7共4株对该废水有机物具有高效降解作用并对β-内酰胺环类抗生素有耐受能力的细菌,分别归类于不动杆菌属(Acinetobacter)、假单胞菌属(Pseudomonas)、埃希氏菌属(Escherichia)和芽孢杆菌属(Bacillus);通过正交试验得出,温度是影响有机物降解效果的首要因素,其次是摇床转速;在摇瓶模拟的最佳作用条件下:即温度35℃、转速150 r/min和初始pH 7.0时,加入效应菌株组合的试验组有机物降解力比对照组提高10%左右,并使整个体系对有机物变化冲击的抗力增强。

一株溶藻细菌的分离、筛选与分子鉴定

为了筛选对铜绿微囊藻有溶藻活性的菌株,采用试管法筛选溶藻效果好的细菌,显微观察高效溶藻菌的溶藻作用方式,对其热稳定性、耐酸碱能力及紫外稳定性进行考察,并采用16S r DNA序列分析鉴定溶藻菌种类。共筛选获得7株具有溶藻效果的细菌,其中F15菌株对铜绿微囊藻溶藻效果最好。菌株F15的溶藻活性物质为胞外产物,当其生长到对数期时,其胞外产物的溶藻效果达到最大,按体积比1∶6将其加入藻液,培养3 d后,铜绿微囊藻的去除率达55%以上。该溶藻活性产物对加热、酸碱及紫外线处理均具有较好的稳定性。16S r DNA序列分析表明,F15菌株与Bacillus cereus strain ATCC 14579同源性最高,达99%,被鉴定为蜡状芽孢杆菌。F15菌株溶藻效果好,稳定性高,具有开发成生物控藻菌剂的潜在价值。

水霉拮抗放线菌的分离、筛选与鉴定

目的:以珍珠健康养殖水体底泥为材料分离放线菌,筛选对水产动物水霉病病原菌有抗菌活性的放线菌。方法:采用稀释涂布法,选用萘啶酮酸和放线菌酮双抗平板分离获得放线菌;以黄颡鱼和湘云鲫鱼卵水霉病原菌为靶标菌,采用琼脂块法测试所分离菌株抗水霉菌活性及其稳定性;对拮抗活性强的放线菌采用形态观察和16S r DNA序列分析进行分类鉴定。结果:从分离获得的27株放线菌中筛选出3株对水霉病原菌有拮抗活性的菌株QF1、DNC17和QHV2,其中QHV2抗菌活性与稳定性最好;形态学观察与16S r DNA序列分析结果表明QF1、DNC17和QHV2均属于链霉菌属(Streptomycete sp.),分别鉴定为Streptomyces diastatochromogenes、Streptomyces variabilis和Streptomyces collinus。结论:3株放线菌对水霉病原菌具有较好的拮抗活性,具有开发成抗水霉药物的潜在价值。

丁二腈高效降解菌的筛选及其降解性

以丁二腈为唯一碳源和氮源 ,从石化腈纶废水及其处理构筑物的生物膜中 ,分离、筛选出 2株高效降解丁二腈的菌株 :J 1 3和J 1 3 1 .经形态学观察和生理生化特征研究 ,两者均被鉴定为假单胞菌 (Pseudomonasspp .) .通过摇瓶试验得出 2菌株的最适生长条件 :温度为 3 0℃ ,摇床转速 (间接反映通气量 )为 2 5 0r/min ,接种量为0 1 % ,初始pH为 6.在最适生长条件下 ,分别对不同初始浓度丁二腈进行降解率试验 .结果表明 ,2菌株对丁二腈的降解能力强 ,尤以J 1 3 1更为显著 .当丁二腈的初始浓度约为 60 0 0mg/L、80 0 0mg/L和 1 0 0 0 0mg/L时 ,J 1 3 1菌株对丁二腈的降解率分别在 1 2 5h、1 4h和 1 6h时达到 1 0 0 % .

高产菌株:姬松茸一号

福建省轻工业研究所在福建闽西北分离与筛选出‘姬松茸1号’高产菌株。经实地栽培,平均每平方米产量可达0.5公斤以上。目前,每公斤干品市场收购价一级品人民币200元以上,还供不应求。 姬松茸(Agaricus blazei Murrill)在福建每年可栽培两季,即每年3—5月份与9—11月份。最适出菇温度为20—25℃,相对湿度为85—90％。栽培方法与方式与双孢蘑菇栽培技术基本上相同;亦可袋栽。 姬松茸整菇脆嫩滑爽、美味可口,不仅是珍稀的菇类佳肴,而且具有抗肿瘤的活性多糖类、活性甾醇类、活性核酸,以及具抗肿瘤的外源凝集素(ABL)。另外,该菇还具脱胆固醇、抗血栓活性等作用。现已引起国际医药界广泛重视与强烈兴趣。据传在日本将姬松茸与灰树花作为预防爱滋病的食药用菌,故倍受消费者的青睐。