生猪饲养场猪瘟监测及分离毒株同源性分析

猪瘟是一种具有高度传染性和致死性的病毒性疾病,为了及时发现和控制猪瘟的传播,生猪饲养场需要进行有效的猪瘟监测,并对分离的毒株进行同源性分析。技术限制、样本获取困难以及数据处理和解读的复杂性是当前面临的主要问题。此外,监测网络和报告机制的完善性也亟待改进。本文旨在探讨生猪饲养场猪瘟监测及分离毒株同源性分析的重要性,并提出相关的研究问题。

传染性支气管炎病毒(IBV)国内分离毒株的分子流行病学分析

选择9个来自我国不同地区的传染性支气管炎病毒(IBV)地方毒株,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分别扩增出它们的完整S1基因,再将各扩增产物与T载体连接转化,筛选出相应毒株的阳性克隆,采用双脱氧链终止法测定基因序列。将这些国内分离毒株、我国常用疫苗毒株和国际上其他血清型的代表参考毒株一起,用DNAstar软件分别进行基因与氨基酸系统发生进化关系分析,结果将这些毒株分成3群:Ⅰ群内的毒株与疫苗毒株H120和M41的同源性很高,Ⅱ群内的毒株与其他毒株的同源性较低,Ⅲ群内的毒株与疫苗毒株有一定的同源性。3个群的毒株以疫苗毒株H120为核心,形成进化距离的梯度,提示弱毒疫苗的使用可能是我国IBV流行毒株的主要来源之一。分析结果还显示,我国IBV的分离毒株没有明显的时间和地理分布规律可循。

禽传染性支气管炎病毒分离毒株的血清型鉴定与免疫防制研究

应用基于单克隆抗体的间接免疫荧光实验（Ｍａｂ－ＩＦＡ）和病毒血清中和实验，分别对１１个禽传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）分离毒株进行血清型鉴定。其中３株为Ｍａｓ型，２株为Ａｒｋ型，２株为Ａｒｋ／Ｍａｓｓ混合型，其余４株为不可分类型或未知型。将４株不可分类型毒株混合制成ＩＢＶ分离毒株油乳灭能苗。经ＳＰＦ鸡免疫攻毒实验证明，这种不可分类型毒株灭能苗与Ｈ１２０弱毒苗合用能够有效抵抗各不可分类型毒株的攻毒感染，保护率为８４％～１００％。另外，ＳＰＦ实验鸡经Ｈ１２０和Ａｒｋ二联苗免疫后对Ａｒｋ型分离毒株和Ａｒｋ／Ｍａｓ混合型分离毒株的保护率为７５％～８５％。但是，虽经Ｈ１２０弱毒苗免疫ＳＰＦ鸡则不能抵抗ＩＢＶ不可分类型毒株。

番鸭新病——花肝病的研究 Ⅱ分离毒的致弱及灭活苗的保护试验

文章通过试验找出能适合于花肝病分离毒生长和繁殖的胚 ,并检测了自制灭活苗对雏番鸭的保护作用。将病料匀浆液接种到番鸭胚、鸭胚和鸡胚上分离病毒 ,并作病毒适应性试验 ,检测继代病毒对雏番鸭的致病性 ;制备了普通灭活苗、油佐剂灭活苗、左旋咪唑灭活苗 ,并分别进行了几种灭活苗的保护试验。结果表明 :分离毒在番鸭胚上能较好地适应并继代 ,随着代次增加 ,其毒力逐步下降 ;灭活疫苗对雏番鸭的保护试验表明 ,灭活疫苗有一定的保护作用 。

番鸭新病—花肝病的研究 Ⅰ.分离毒的致病性及感染途径试验

番鸭花肝病是近年流行的一种新的番鸭疫病 ,其特征性病变是死亡番鸭的肝、脾、小肠等部位出现灰白色的坏死点。本文自广东省主要疫区分离到几株病毒 ,这些病毒在番鸭胚上可继代繁殖 ,其胚液可使番鸭发病。不同途径感染试验表明该病毒通过肌肉注射、爪垫部注射、口服、同居感染均可使番鸭发病和死亡 ,并具有典型病变。分离毒不能使半番鸭、本地鸭、鸡发病。

鸡传染性支气管炎中国地方分离毒株LX4 mRNA1 ORF1的遗传变异特征

应用RT-PCR方法扩增了冠状病毒鸡传染性支气管炎中国分离毒株LX4的mRNA1ORF1,并将其进行了克隆、序列测定和分析。表明LX4mRNA1基因包含2个ORF,其中ORF1a由11916个核苷酸组成,编码一条3971个氨基酸残基组成的多肽。ORF1b由7950个核苷酸组成,编码2649个氨基酸残基组成的多肽。与美国Beaudette株对应的ORF1a核苷酸及推导的氨基酸序列同源性均为85%,与对应的ORF1b的同源性分别为89%和95%。二者ORF1a和ORF1b重叠区推测的"滑脱序列"(slipperysequence)核苷酸序列一致,"假结"(pseudoknot)基本结构相似。不同之处在于"假结"第2环中LX4的第7位为A,而Beaudette株在该位置为G。与Beaudette株比较,LX4ORF1a核苷酸变异最频繁的区域集中在第2656～3098位碱基处,且在该区域有60个碱基的插入,导致推导的氨基酸序列插入了20个氨基酸残基。LX4ORF1b序列缺失9个核苷酸,主要集中在第5168～5181位之间,导致对应的氨基酸缺失3个。但这些差异是否与病毒的生物学特性有关不明。

乳牛病毒性腹泻-粘膜病分离毒的鉴定

乳牛病毒性腹泻粘膜病分离毒的鉴定陈茂盛寇改霞蒋宏伟吴双民（西安动植物检疫局７１００６８）牛病毒性腹泻粘膜病（ＢＶＤ／ＭＤ）是危害养牛业的主要传染病之一。我国于８０年代初从进口牛中首次检出ＢＶＤ／ＭＤ，接着又从西藏牦牛和东北黄牛流产胎儿中分离到ＢＶ...

华南农业大学教授毕英佐:MS分离毒株对不同药物的敏感性出现差异

病原学 鸡滑液囊支原体病,是由鸡滑液囊支原体（MS）引起的鸡的传染病。该病特征为关节、腱鞘和脚掌肿胀,气囊有干酪物。MS为革兰氏染色呈阴性、无细胞壁的细菌,对能影响细胞壁合成的抗生素有抵抗力。MS在PH值为6.8或更低时不稳定,对高于39℃的温度敏感,羽毛上的支原体最多可存活3天,但在其他材料上不会超过1天。在电子显微镜下观察形态不一,有的为圆形,有的呈丝状。其只有一个血清型,不同菌株间差异很小。

山羊流产病毒分离毒株SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳分析与研究

应用聚丙烯酰胺凝胶电泳所具有的分子筛子电泳的双重效应和SDS（十二烷基硫酸钠）可直接列解病毒颗粒，打开病毒结构蛋白分子的非共价键而获得良好的分离效果等优势对从流产出羊胎儿中分离到的可致山羊流产的病毒进行RNA－PAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳）分析，基因组由6个RNA片段组成，其数量及带型分布与蓝舌病毒内蒙毒株（BTV－NM）完全不同。

鸡传染性支气管炎分离毒株病理组织学试验

鸡传染性支气管炎（IB）是由鸡传染性支气管炎病毒（IBV）引起的一种急性、高度接触传染性、病毒性呼吸道疾病。该病的主要特征是：病鸡咳嗽、打喷嚏、气管啰音;肾脏肿大、苍白,输尿管扩张、有大量尿酸盐沉积,外观呈现典型的“花斑肾”。IBV自然感染通常在48h内出现症状;人工接种后24h到7d始终可从鸡气管、肾、法氏囊中分离出病毒,不同日龄、品种和性别的鸡均易感,雏鸡常由于呼吸道或肾脏感染而引起死亡。

猪流感福建流行毒株的分离、鉴定

疑似猪流感(SIV)病猪的鼻拭子尿囊腔接种10日龄SPF鸡胚,72 h后致死鸡胚.取尿囊液进行血凝试验,分离物能使多种禽类和哺乳动物红细胞发生凝集;取尿囊液接种鸭胚、鹅胚,48 h后即致死鸭胚、鹅胚;取尿囊液接种鸡、鸭、鹅胚等成纤维原代细胞和Vero、PK、BHK、MA-104等传代细胞,发现病毒能使成纤维细胞、Vero出现变圆、皱缩、脱落等病变;尽管PK、BHK21、MA-104等细胞接种后不出现病变,但培养上清能凝集鸡红细胞;亚型鉴定该株病毒属猪流感病毒H1N1.进行病毒对BALB/C小鼠、信鸽、8周龄仔猪的回归试验,发现该株流感病毒能使信鸽和8周龄仔猪发病;BALB/C小鼠接种病毒后临床上不表现症状,但体内产生针对该病毒的抗体.

我国新分离ECHO30病毒VP1序列分析

测定了引起2003年苏北地区无菌性脑膜炎暴发流行的病因病毒FDJS03分离株的VP1基因序列,并与国外同型流行毒株做比较,以了解本流行株的分子生物学特点及遗传变异规律。随机选取FDJS03分离毒株中的4株,用肠道病毒VP1序列的特异性引物008/011进行RT—PCR,扩增产物经凝胶纯化后测序。将序列输入GenBank,用BLAST程序进行核苷酸和氨基酸序列比对;选取32株不同地区不同年代的ECHO30分离毒株,在PHYLIP3.573c和TREE—PUZZLE5.0中构建进化树,比较它们完整VP1序列(876nt)的进化关系。核苷酸和氨基酸同源性比较结果证明:4株分离病毒均为ECHO30。进化树分析显示:本次FDJS03分离株与欧美20世纪70、80年代流行株亲缘关系最近,但自成一簇,与国外毒株仍然有地区差别。ECHO30的VP1基因进化有时间效应,但存在地区差异。本次流行的病原可能是单一基因型的ECHO30病毒。

我国新分离乙型脑炎病毒株毒力特征研究

将分离自不同年代的17株乙脑毒株在小鼠脑内传代,然后将病毒在BHK21细胞单层上观察不同毒株的空斑形成大小形态,小鼠脑内和皮下途径接种观察病毒的毒力,结果显示不同毒株在BHK21细胞上形成的噬斑大小不尽相同,减毒株形成的噬斑最小。所有毒株对小鼠的脑内毒力都很强,病毒滴度高达lg8.0/mL以上,毒株间无明显差异。毒株对9～11g小日龄小鼠的皮下毒力有一定差异但不明显,但对14～16g较大日龄小鼠则差别明显。PFU/LD50的对数值差异除一株(M47株)为8.44外,其余各株差别在3.94～0.45间。本研究结果证明自然界乙脑毒株存在明显的神经外毒力差异,毒力差异与分离年代和病毒基因型无关,但从人体分离到的毒株毒力表现较强。

J亚群禽白血病病毒安徽分离株的鉴定及其gp85基因序列分析

从安徽省的黄羽肉鸡和罗曼蛋鸡中各分离鉴定出1株J亚群禽白血病病毒,克隆获得了2条相应的gp85基因序列,并与参考毒株进行序列比对。结果表明,两分离毒株与J亚群参考毒株同源性为82.1%～99.4%,分离毒株之间同源性为85.4%。其中肉鸡分离毒株与J亚群原型毒株HPRS-103同源性为97.1%,与J亚群国内毒株SD09TA04、SDYC02J同源性均为99.4%;蛋鸡分离毒株与HPRS-103的同源性为89.0%,与SD09TA04和SDYC02J同源性仅为88.6%。两分离毒株的gp85氨基酸序列出现突变和缺失,在高变区hr1、hr2变异明显。进化分析进一步表明,2个分离毒株亲缘关系较远,可能来源于不同的原始病毒株。

汉坦病毒四川分离毒株SN7——HTN的新亚型

目的 对四川省社鼠分离株SN7进行生物学和分子生物学鉴定。方法 应用单克隆抗体抗原性分析和空斑减少中和试验 (PRNT)和PCR分型方法分析、克隆测定了SN7株的M和S片段基因 ,并同汉坦病毒其他病毒株进行比较。结果 单克隆抗体和PRNT、PCR分型方法均无法对SN7株定性 ,序列分析表明SN7毒株与现有的HTN型毒株M片段同源性为 80 .2 %～ 87.1% ,差异高达 12 .9%～ 19.8% ;S片段为 76 .6 %～ 92 .0 % ,差异也高达 8%～ 2 3.4 % ,而与SEO毒株M片段的同源性为 70 .0 %～ 71.6 % ,S片段为 71.0 %～ 72 .2 % ,SN7株病毒可以定型为HTN型病毒。结论 SN7株为HTN型的新亚型毒株。

肾综合征出血热患者流产胎儿分离毒株84FLi的全基因序列分析

目的 克隆和测定汉滩病毒疫苗生产株 84FLi的全基因组序列 ,了解其分子基础。方法 采用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR) ,分节段扩增 84FLi株L、M和S基因片段的cDNA ,直接用PCR产物或克隆入pMD18 T载体后进行测序。结果 84FLi株L、M、S 3个片段的全基因组序列为6 5 33,36 16和 16 88个核苷酸 ,分别编码 2 15 1,1135 ,4 2 9个氨基酸。A、C、G、T 4种核苷酸分别为 3830 ,2 0 5 0 ,2 5 10和 344 7个 ,GC含量为 38 5 2 % ,AT含量为 6 1 4 8%。序列同源性分析表明 84FLi株与分离自广州的RG9株和分离自安徽的Chen4株高度同源。S片段核苷酸的同源性 99 6 %。与HTNV的国际标准毒株 76 118的 3个片段核苷酸同源性分别为 83 7%、84 0 %和 87 2 % ,氨基酸同源性分别为97 5 %、96 0 %和 97 9%。结论 84FLi株属于汉滩型病毒 ,并与分离自国内的汉滩病毒同源性较高 。

我国部分地区猪繁殖与呼吸综合征病毒分离株ORF5基因的遗传变异分析

参考Genbank发表的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ATCC VR-2332的ORF5基因序列,设计 并合成了一对引物,对来自福建、浙江、山东等地的PRRSV分离毒株进行RT-PCR扩增,获得约748 bp的 DNA片断,将其分别克隆入pMD18-T载体中,并进行测序。应用DNAStar软件分析所测序列,并与ATCC VR-2332、CH-1a、MLV、LV等毒株的ORF5序列进行比较,结果表明:SHD1与FJ14、MLV、ATCCVR-2332 同源性高达98．5％,与CH-1a同源性为91．0％,与其它毒株同源性为86．6％-88．4%;FJ14与MLV、ATCC VR- 2332同源性为99．3％-99．7％,其余分离毒株在遗传关系上和CH-1a又分为明显的两个群,显示近年来各地 PRRSV分离毒株与CH-1a株的遗传差异越来越大。

禽副粘病毒2型标准株和国内分离株的透射电镜及免疫电镜观察

将禽副粘病毒 2型的标准毒株Yucaipa病毒和国内分离株F4、F6和F8株分别接种SPF鸡胚 ,收获鸡胚尿囊液 ;经差速离心和蔗糖密度梯度离心后 ,分别制备电镜样品和免疫电镜样品 ;经 10 g/L醋酸双氧铀负染后电镜观察病毒粒子形态。电镜下病毒粒子大小差别较大 ,形态呈圆形或椭圆型 ,直径 15 0— 3 0 0nm ,有结构致密的基质蛋白膜 ,有的囊膜外可见纤突。免疫电镜样品中病毒明显集中 ,便于观察。