分离白细胞法、低渗红细胞法、全血直提法提取的冻存血RNA质量及其反转录后基因扩增效果

目的观察分离白细胞法、低渗红细胞法、全血直提法提取的冻存血RNA质量及其反转录后基因扩增效果。方法将冻存血标本12例份随机分为3组,分别采用分离白细胞法、低渗红细胞法、全血直提法提取RNA,提取出的RNA溶液分别记为A、B、C组。使用NANODROP 1000分光光度计测算各组RNA浓度及OD(A260/A280)值、OD(A260/A230)值,以OD(A260/A280)值、OD(A260/A230)值表示RNA纯度。采用琼脂糖凝胶电泳法观察各组RNA完整性。各组RNA反转录后,采用PCR法扩增,观察扩增产物电泳条带情况;各组RNA反转录后,采用qPCR法扩增,计算循环阈值(Ct值)。结果A组RNA浓度、OD(A260/A280)值、OD(A260/A230)值均高于B、C组(P均<0.05)。A组琼脂糖凝胶电泳没有出现任何条带,B组条带严重弥散,C组有条带存在。C组RNA反转录后得到的扩增产物条带最为明亮。A、B、C组Ct值分别为28.27±1.01、27.49±0.22、24.20±0.25,其中C组Ct值与A、B组相比,P均<0.05。结论与分离白细胞法、低渗红细胞法相比,全血直提法提取的冻存血RNA完整性更好,其反转录后基因扩增效果更高。