使用流式细胞仪分离精子进行仔猪性别控制的研究

本研究旨在探索流式细胞仪分离精子在猪性别控制中的应用。使用流式细胞仪分离猪XY精子,而后通过母猪输卵管授精生产"预知"性别的仔猪,并使用吖啶橙染色法检测粗分离对精子核酸含量的影响。结果,成功利用分离获得的猪X和Y精子对母猪进行输卵管授精,母猪怀孕率、产仔率均为100%;输Y精子母猪产仔雄性率100%(♂6/6),对照母猪产仔雄性率57.14%(♂8/14);3头输X精子母猪产母仔率91.67%(♀11/12),对照母猪产雌性仔猪40%(♀2/5);使用性别分离精子不影响母猪的怀孕率、产仔率,但窝产仔数较低;吖啶橙染色法检测结果表明,流式细胞仪粗分离对猪精子核酸含量没有显著影响(P>0.05)。本研究结果提示,使用流式细胞仪分离精子授精可以有效改变仔猪的性别比例。本研究结果为猪分离精子性别控制技术的推广应用奠定了基础。

牛分离精子对体外受精的影响

本研究的目的是测定流动细胞分离仪分离的精子对牛卵母细胞体外受精和胚胎发育的影响。共使用了4273个牛的卵母细胞和3种类型的精子(分离、染色未分离和未染色未分离)进行体外受精试验。这些精子分别来自于3头公牛,每头公牛重复试验3～5次。数据使用ANOVA程序进行统计分析。结果显示,用3种类型精子受精后的卵母细胞囊胚率无显著差异,分别为20.4%,22.62%和22.14%,但用分离精子受精后的卵裂率显著低于未分离的精子(53.66%比71.93%,P<0.05)。所测试的3头公牛的卵裂率和囊胚率在不同公牛之间有所差异,H008号公牛所产生的囊胚明显低于H010号公牛组(分别为17.4%比25.1%,P<0.05)。结果证明分离过程或染色并没有影响胚胎发育,流动细胞分离仪可以有效地用于牛胚胎的体外生产。此外,分离、染色未分离和未分离精子的受精和胚胎发育率,在不同公牛之间有差异的这一发现表明,选择能产生高质量精子的公牛精液进行精子分离,可以提高体外受精的效率。

两种不同方法处理牛分离精子对体外受精效果的影响

本试验旨在探讨采用2种不同方法处理牛分离精子对精子活力、浓度及体外受精(IVF)效果的影响。将体外培养成熟卵母细胞随机分为2组,与分别用洗涤法和Percoll法处理牛分离精子进行IVF,并观察处理后各组的精子活率、浓度和IVF后囊胚发育率。结果显示,洗涤法和Percoll法处理后精子活力和IVF后的囊胚发育率均无显著差异,但采用洗涤法处理后分离精子浓度极显著高于Percoll法,可显著提高分离精子利用效率,且方法简便、经济,应优先选择使用。

牛分离精子对其IVF胚胎染色体影响的研究

采用传统的细胞遗传学方法,研究了由流式细胞仪分离的、染色未分离的及作为对照用的未染色未分离的分别来自于3头公牛的精子体外授精(in vitrofertilization,IVF)后产生的6～8d囊胚的染色体异常情况,以确定流式细胞仪分离精子的过程及染色对胚胎染色体异常的影响。结果显示,分离精子、染色未分离精子和未染色未分离精子的胚胎中,染色体组成均出现异常,嵌合体胚胎分别占40.7%、35.8%和37.0%,三者染色体异常的比例无显著差异。胚胎染色体异常的频率在不同公牛之间存在差异(33.0%∶44.6%)(p<0.05)。结果证明,染料和分离过程不影响精子的DNA亦不影响胚胎的染色体组成;胚胎染色体异常的频率在不同公牛之间存在差异。

水牛分离精子与不同来源卵母细胞体外受精的效果研究

本研究的目的是探讨水牛分离精子与不同来源(活体采卵或屠宰场卵巢采卵)卵母细胞体外受精的效果.活体采卵是选用20头空怀河流型母水牛(其中摩拉母牛12头,尼里-拉菲母水牛8头)每间隔3 d采卵1次,连续采卵5～6周.活体采集卵母细胞;屠宰场卵巢采卵是收集屠宰场水牛卵巢,用10 mL注射器连接18 G针头吸取水牛卵巢上可视的卵泡来收集卵母细胞.将收集的AB级水牛卵母细胞在相同的条件下进行体外成熟、然后用分离或未分离精子进行体外受精以及体外培养至囊胚.结果发现:活体采卵组和屠宰场收集的水牛卵母细胞组用分离精子受精分裂率和囊胚率没有差异(P＞0.05);分离精子和未分离精子的体外受精分裂率和囊胚率也没有差异(P＞0.05).由此说明,水牛分离精子可以用于体外生产性控胚胎.

牛分离精子ICSI后卵母细胞激活方法的研究

本研究的目的是比较采用由流式细胞仪分离的牛X和Y精子进行胞质内精子注射(ICS I)后,两种不同激活方法对ICS I卵母细胞的激活效果。ICS I后,卵母细胞用5μm o l/L的Ionom yc in(离子霉素)处理5 m in后,先在化学成分明确培养液(CDM-1)中培养3 h,然后再在含有1.9 mm o l/L 6-DM AP(6二-甲氨基嘌呤)的培养液中培养3 h(Ionom yc in+CDM-1+DM AP),或用5μm o l/L的Ionom yc in处理5 m in后,不经过CDM培养直接转入1.9 mm o l/L DM AP的培养液中培养3 h(Ionom yc in+DAM P)。结果发现,两种激活处理的效果差异不显著。

不同因素对奶牛分离精子ICSI效率的影响

本研究旨在探讨不同的联合激活处理、精子预处理方法和单精子注射方式对奶牛分离精子ICSI效率的影响。借助显微操作仪将经不同预处理的奶牛分离X精子直接注入体外成熟22～24h的牛卵母细胞胞质内,注射过程采用回吸胞质和不回吸胞质2种处理,最后分别用3种激活方案对注射卵进行激活。结果表明:用CR1aa+Ionomycin+6-DMAP对ICSI注射卵进行激活后,卵裂率和囊胚率都高于A23187+CHX和7%ET+CHX两种联合激活组(63.74%vs61.09%、53.75%;28.54%vs17.68%、22.00%,P<0.05);采用percoll密度梯度离心法处理精子,卵裂率(77.10%vs62.19%,P<0.05)与囊胚率(26.95%vs22.82%,P>0.05)均高于上游法处理组;ICSI时回吸胞质获得的注射卵,其卵裂率和囊胚率均显著高于不回吸胞质处理组(63.10%,25.35%vs41.56%,19.40%,P<0.05)。结果表明,用percoll密度梯度离心法处理精子、注射时回吸胞质、用CR1aa+Iono-mycin+6-DMAP激活ICSI注射卵,可显著提高奶牛分离精子ICSI的效率。

密度梯度离心法分离精子在宫腔内人工授精中的应用

目的:探讨密度梯度离心法应用于宫腔内人工授精的精子分离时精子指标的变化及精子形态对回收率的影响。方法:选择2008年9-10月间所有进行宫腔内夫精人工授精的51份精液,采用密度梯度离心法分离精子,记录精子分离前后的各项指标,计算回收率并作统计分析。结果:(1)精子存活率由(53.63±15.94)%提高至(88.75±9.69)%(P<0.05),平均回收率为(25.84±16.57)%。(2)正常形态精子比例由9%提高至18%(P<0.05),各类畸形精子均显著减少,尤其颈部和尾部畸形的精子减少最为明显。(3)根据处理前精子正常形态的比例分为≤4%、5%～14%、≥15%3组,分离后精子存活率分别为(80.45±14.05)%、(91.32±7.30)%、(90.00±4.33)%(P=0.004),回收率分别为(19.67±10.49)%、(28.51±16.87)%、(41.14±15.02)%(P=0.013)。精子正常形态比例与回收率呈正相关(r=0.456,P=0.001)。结论:密度梯度离心法可以有效回收活力好、形态正常的精子,对于去除颈部和尾部畸形的精子效果更好,精子正常形态与回收率呈正相关。

用分离精子进行性别控制研究的现状

哺乳动物后代性别控制的方法有两种 ,即植入前胚胎性别的选择和受精前精子的分离 ,后者是动物性别控制最有效的途径。目前最有重复性、科学性和有效性的分离精子的方法 ,是根据精子DNA含量存在差异的原理 ,利用荧光染料与DNA相结合 ,并通过流动细胞检索分离仪进行精子的分离。

流式细胞仪分离精子研究进展

本文概述了近年来用流式细胞仪分离动物X、Y精子的研究进展、存在的问题和应用前景。流式细胞仪分离精子的研究已经取得了很大进展 ,在某些动物 (如牛 )分离的精子已开始用于人工授精。尽管该技术还存在许多亟待解决的问题 ,但随着流式细胞仪的改进和与各项辅助生殖技术 (如手术授精、体外受精、胞质内精子注射、低剂量精子人工授精 )结合 ,性别分离精子必将在实践中得到广泛的应用 。

获能物质及微流控精子分离器对牛性控精子的影响

实验旨在研究获能物质及微流控精子分离器(MFSS)对牛性控精子的影响。在BO液中添加获能物质(空白对照组、10μg/mL肝素组、5 mmol/L咖啡因组、10μg/mL肝素+5 mmol/L咖啡因组)对牛性控精子进行获能,比较各组性控精子活率、活力及运动参数;利用MFSS(MFSS分为入口A储精室、B培养液室和出口C运动不良精子分离室、D运动良好精子分离室4个小室)分离获能效果较好的牛性控精液,测定A、C、D各小室精子的活率、活力、密度以及运动参数,分离后的精子经JC-1染色,流式细胞仪检测各小室精子线粒体相对活性和线粒体活性均衡精子。结果表明:空白对照组、10μg/mL肝素组、5 mmol/L咖啡因组、10μg/mL肝素+5 mmol/L咖啡因组精子获能后的精子活力、活率、运动性能均无显著差异。5 mmol/L咖啡因组经MFSS分离5 min后D室中精子活力、活率和线粒体相对活性高于A室和C室(P<0.05),精子密度低于A室(P<0.05),其他各组间差异均不显著。由此可见,获能物质咖啡因能够诱导牛精子体外获能,但作用效果不显著;MFSS能分离出高活力、高运动性能的精子,且精子的活力、运动性能与精子线粒体活性有关。

流式细胞仪分离哺乳动物精子的研究进展

目前,分离精子性别准确率在90%以上,受精率是未分离精子的70%～80%。尽管动物分离精子还存在许多亟待解决的问题,但随着精子分离仪的改进以及与各项辅助生殖技术的结合,动物分离精子必将在实践中得到广泛的应用,并产生巨大的社会效益和经济效益。主要概述了近年来用流式细胞仪分离哺乳动物X、Y精子的研究进展、存在的问题和应用前景。

X、Y精子分离纯度评价方法的研究进展

对检测分析分离精液中X、Y精子纯度的方法进行了综述,并将各种方法的原理、技术操作过程和方法的优缺点进行了比较分析。认为如能在技术上有所突破,提高方法的灵敏度、精确性,降低检测时间,单精子巢式PCR方法将可能成为一种低成本、常规化的检测手段,在精子分离方法优化研究中发挥更大的作用,并推动其他单精子遗传检测技术取得新进展。

精子分离两种方法的比较和评价

目的 :探讨王氏管法和精子上游法在精子分离中的应用 ,比较两者的优缺点。 方法 :随机选择 12 7份精液 ,采用 2种方法进行配对处理 ,比较 2种方法分离前后精子活动率、形态、活力和精子顶体形态、精子染色质以及精子膜完整性等参数的变化。 结果 :2种方法处理后的精子活动率、精子活力以及精子形态有显著的差异 (P <0 0 1) ,王氏管法处理后精子顶体完整率、正常染色质率及精子膜完整率亦显示出显著的差异 (P <0 0 1)。 结论 :王氏管法和精子上游法在精子处理中均可获得较好的精子质量 ,但王氏管法则获得更优质的精子 ,且具有方便操作和实用的特点。

分离后精子输精对超排奶牛卵子受精和胚胎质量的影响

研究应用性控精液对超排育成牛和成母牛输精,生产性控胚胎。结果表明:非性控精液组受精卵数同性控精液组相比差异不显著(P>0.05),但可用胚胎比例高于性控精液组(90.17%对89.73%,66.03%对63.57%)。育成牛群组受精卵比例高于成母牛群组(92.74%对84.93%)差异不显著(P>0.05);但可用胚胎比例显著高于成母牛群组(68.77%对55.28%)(P<0.05)。1次输2支性控精液组中,育成牛群组受精卵数、可用胚胎比例都显著高于成母牛群组(90.83%对79.69%,67.89%对53.13%)(P<0.05)。2次人工授精,每次输1支性控精液组中,育成牛群组受精卵及可用胚胎比例都显著高于成母牛群组(93.75%对87.41%,69.23%对56.30%)(P<0.05)。

单次上游单次离心高活力精子分离与宫腔内授精

介绍了一种用于宫腔内授精（ＩＵＩ）的高活力精子分离方法一单次上游单次离心法，活性精子提取率为（１９．９±６．３）％，其中，ａ精子提取率为（３２．０±１３．８）％。提取的精子悬液中，ａ精子率为（８３．８±５．５）％。精子活动率约９５％，畸形精子率下降了６个百分点。应用上述方法进行精子分离对２７对男性少、弱、畸精子症致不育夫妇进行了４０个周期的ＩＵＩ治疗，妊娠率（ＰＧＲ）２０％。ＩＵＩ中精子数量超过６×１０＿６，ＰＧＲ为３２％，而不足６×１０＿６者无一例妊娠（Ｐ＜０．０５）。

实时精子分离技术(王氏管法)的实验和临床应用研究

目的 :为临床不育症和优生优育提供一种安全、高效的精子分离技术。方法 :采用实时精子分离技术 (王氏管法 )对 2 0份正常精液和 40份感染精液标本进行了优质精子分离纯化和去除精浆的杂质和微生物 (如细菌、病毒、沙眼衣原体、解脲支原体等 )的效果 ;80例少、弱、畸形精子患者使用王氏管法筛选获得优质精子后对其配偶施行宫内人工授精 (IUI)获孕效果进行了观察 ;与上游法和 Percoll梯度法的分离效果和授精成功率进行了比较。结果 :王氏管法在筛选优质精子、去除精浆杂质和微生物以及使用筛选后的精子作配偶 IUI成功率均明显优于上游法和 Percoll密度梯度离心法。结论 :实时精子分离技术值得临床进一步研究和推广应用。

精子分离及其在畜牧业中的应用

概述了哺乳动物精子分离的研究和应用状况,重点阐述了流式细胞检索仪分离精子的研究和应用进展。流式细胞检索仪分离精子这种控制动物后代性别的方法,目前虽然还存在一些问题,但已经用于牛的商业化生产中,羊、猪等方面也已临近实用。随着技术的进步和设备的改进,流式细胞检索仪分离精子等精子分离技术将会得到广泛的使用,并为畜牧业生产带来巨大的效益。