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离线pH梯度-强阳离子交换色谱法分离肽段混合物 被引量:1
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作者 郑兆彬 应万涛 +2 位作者 蔡耘 田中民 钱小红 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期804-808,共5页
复杂肽段混合物的有效分离是高覆盖率地鉴定蛋白质混合物的前提。Shotgun蛋白质组学研究通常采用二维液相色谱(强阳离子交换色谱-反相色谱)分离后接串联质谱检测的方法。但由于离子交换色谱体系中含有高浓度的盐,使得在线分析的难度较大... 复杂肽段混合物的有效分离是高覆盖率地鉴定蛋白质混合物的前提。Shotgun蛋白质组学研究通常采用二维液相色谱(强阳离子交换色谱-反相色谱)分离后接串联质谱检测的方法。但由于离子交换色谱体系中含有高浓度的盐,使得在线分析的难度较大;而在离线分析时,也常因需要对高盐组分进行脱盐处理而易引起样品损失。因此,该文尝试用pH梯度替代盐梯度,实现pH梯度-强阳离子交换色谱方法应用于复杂肽段混合物的分离。通过对缓冲体系pH值的计算,优化了乙酸-乙酸铵体系线性pH梯度配合盐梯度的离子交换色谱方法,以及柠檬酸-氨水体系线性pH梯度的离子交换色谱方法。将这两种方法应用于牛血清白蛋白酶切产物的分离取得了与常规强阳离子交换色谱相似的分离效果。乙酸-乙酸铵体系采用的是低浓度的可挥发性铵盐,采用真空冻干的方法可以有效除盐,基质辅助激光解吸质谱靶上自然挥发也可以达到较好的脱盐效果,简化了常规方法繁琐费时的脱盐步骤及避免了由此造成的样品损失。柠檬酸-氨水体系采用pH梯度洗脱替代盐梯度洗脱,大大降低了体系中的盐浓度。这两种方法在复杂体系蛋白质组研究的样本预分离中具有较好的应用前景。 展开更多
关键词 离子交换色谱 缓冲体系 pH梯度 分离
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接枝丙烯酸亲水化改性聚砜超滤膜及其在多肽分离中的应用 被引量:10
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作者 董春华 齐崴 何志敏 《化工学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第6期1501-1506,共6页
Hydrophilic surface modification of polysulfone hollow fiber membrane was performed by acrylic acid treatment.Stannic chloride was selected as the proper catalyst, and phosphoric acid as the co-catalyst.The modificati... Hydrophilic surface modification of polysulfone hollow fiber membrane was performed by acrylic acid treatment.Stannic chloride was selected as the proper catalyst, and phosphoric acid as the co-catalyst.The modification conditions, such as the ratio of the reagents (acrylic acid∶catalyst=1∶0.05), temperature (30℃) and reaction time (60 min), were optimized based on the contact angle measurements.The grafting of carboxyl group to the membrane surface was confirmed by IR spectrum and wettability analysis, and no degradation of the modified membrane skin or framework was observed with scanning electron microscopy.The experimental results of filtrating bovine serum albumin solutions indicated that the property of resisting protein adsorption on the membrane surface for the modified membrane was much better than that for unmodified membrane.In the process of separating casein hydrolysates, the advantages of modified membrane were also shown by comparing the permeate flux and molecular mass distribution with those of unmodified membrane. 展开更多
关键词 丙烯酸 超滤 亲水聚砜膜 抗吸附 分离
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反相毛细管整体柱的制备及其在多肽混合物分离中的应用 被引量:5
3
作者 谢晶鑫 毕开顺 +1 位作者 钱小红 张养军 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期186-190,共5页
采用甲基丙烯酸月桂酯为基础功能单体,乙二醇二甲基丙烯酸酯为交联剂,正十二醇、1,4-丁二醇及二甲基亚砜为致孔剂,在内径为75μm的石英毛细管内制备了具有良好机械性能及化学稳定性的反相毛细管整体柱。考察了致孔剂的种类、比例以及交... 采用甲基丙烯酸月桂酯为基础功能单体,乙二醇二甲基丙烯酸酯为交联剂,正十二醇、1,4-丁二醇及二甲基亚砜为致孔剂,在内径为75μm的石英毛细管内制备了具有良好机械性能及化学稳定性的反相毛细管整体柱。考察了致孔剂的种类、比例以及交联剂在单体混合物中的比例对柱压和分离效果的影响;以单体15%、交联剂15%、致孔剂70%(均为质量分数)作为优化配方,在70℃条件下反应24h;并对所合成的毛细管整体柱进行了电镜表征,测试了流速、柱长与柱压的关系。结果表明,毛细管整体柱的通透性良好,可通过延长柱长的方法提高分离效果。将所制备的毛细管整体柱装于纳升级高效液相色谱仪上进行牛血清白蛋白及血浆样本的胰蛋白酶酶切液的分离,获得了比较理想的分离效果。 展开更多
关键词 毛细管整体柱 纳升级液相色谱 分离
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强阳离子交换色谱分离多肽混合物的条件优化 被引量:6
4
作者 王璐 周兰兰 +1 位作者 钱小红 张养军 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期368-373,共6页
以酵母全蛋白提取液的胰蛋白酶切产物为研究对象,对多维色谱分离中常用的强阳离子交换色谱的分离条件,包括上样量、盐的种类、调节缓冲液pH值的酸的种类及有机溶剂的比例进行了考察和比较。结果表明,在强阳离子交换色谱分离线性上样量... 以酵母全蛋白提取液的胰蛋白酶切产物为研究对象,对多维色谱分离中常用的强阳离子交换色谱的分离条件,包括上样量、盐的种类、调节缓冲液pH值的酸的种类及有机溶剂的比例进行了考察和比较。结果表明,在强阳离子交换色谱分离线性上样量范围内,在氯化铵溶液作为流动相,用磷酸调节流动相缓冲液pH值至2.7,且流动相中乙腈的体积分数为30%条件下进行梯度洗脱时,可获得最佳的分离结果。本结果可为采用二维色谱-质谱策略分析多肽混合物时的第一维强阳离子交换色谱分离条件的选择提供有益的参考。 展开更多
关键词 强阳离子交换色谱 蛋白质组学 分离
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蝎毒抗癌多肽及其分离组分分析及鉴定方法 被引量:5
5
作者 孔天翰 郭进武 +4 位作者 陈蕴 韩雪飞 陈华艳 吴逸明 董伟华 《河南医科大学学报》 北大核心 2001年第6期647-650,共4页
目的 :探讨蝎毒抗癌多肽 (antineoplasticpolypeptidefromButhusmartensiivenom ,APBMV)及其分离组分的分析及鉴定方法。方法 :采用SepharoseFF阳离子交换凝胶柱 (2 5cm× 5cm交换柱 ,流速 0 .8ml/min ,梯度洗脱 12 0 0min)层析法分... 目的 :探讨蝎毒抗癌多肽 (antineoplasticpolypeptidefromButhusmartensiivenom ,APBMV)及其分离组分的分析及鉴定方法。方法 :采用SepharoseFF阳离子交换凝胶柱 (2 5cm× 5cm交换柱 ,流速 0 .8ml/min ,梯度洗脱 12 0 0min)层析法分离APBMV ,用高效毛细管电泳 (highperformancecapillaryelectrophoresis,HPCE)及高效液相色谱法 (highperformanceliquidchromatography ,HPLC)分析检测。结果 :用SepharoseFF阳离子交换凝胶层析可将APBMV分离为 2个峰。经HPCE、HPLC分析显示 ,APBMV主要成分为峰Ⅰ~Ⅳ ,其分离组分分别以峰Ⅰ或峰Ⅲ为主 ,其纯度分别为86 .35 %、6 9.5 7%。结论 :SepharoseFF用于进一步分离APBMV可望获得较高纯度的单一有效成分 ,HPCE及HPLC均可较好地显示蝎毒中小分子多肽的组成及相对含量 。 展开更多
关键词 蝎毒 抗癌多分离 高效液相色谱法 高效毛细管电泳法 APBMV
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响应面法优化磷酸化改性花生分离蛋白-多肽膜的制备工艺 被引量:5
6
作者 于丽娜 杜德红 +7 位作者 彭娅萍 杨伟强 李勇 顾博 孙杰 张初署 毕洁 王明清 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期130-143,共14页
为了优化磷酸化改性花生分离蛋白-多肽膜制备工艺条件,在单因素基础上,通过响应面Box-Benhnken进行实验设计。结果表明,最优工艺参数:蛋白浓度8%、p H值8. 2、甘油百分含量(占蛋白) 13. 4%、黄原胶百分含量(占蛋白) 1%、时间60min、温... 为了优化磷酸化改性花生分离蛋白-多肽膜制备工艺条件,在单因素基础上,通过响应面Box-Benhnken进行实验设计。结果表明,最优工艺参数:蛋白浓度8%、p H值8. 2、甘油百分含量(占蛋白) 13. 4%、黄原胶百分含量(占蛋白) 1%、时间60min、温度69℃、超声波功率270W、超声波频率28kHz、多肽溶液的浓度61mg/mL;此工艺条件下,膜厚度、吸水率和透光率理论预测值分别为86μm、41. 9%和53. 6%,验证实验值分别为88±2μm、43. 1±1. 2%和52. 4±1. 5%,两者的差值分别为2. 33%、2. 86%和2. 24%,说明响应面二次模型的拟合良好;磷酸化改性花生分离蛋白-多肽膜的抗拉强度9. 62MPa、断裂延伸率101. 68%、溶解性47. 69%、水蒸气透过率6. 95g·m-2·h-1等功能性质和DPPH自由基清除活性IC50值7. 70mg·mL^(-1)、羟自由基清除活性IC50值5. 98mg·mL^(-1)、超氧阴离子自由基清除活性IC50值4. 20mg·mL^(-1)、铁离子螯合力活性IC50值3. 79mg·mL^(-1)、铜离子螯合力活性IC50值13. 61mg·mL^(-1)、脂质过氧化抑制活性IC50值8. 62mg·mL^(-1)、铁还原力IC50值13. 93mg·mL^(-1)、钼还原力IC50值5. 49mg·mL^(-1)等抗氧化活性较磷酸化改性花生分离蛋白膜有所改善。本研究结果为磷酸化改性花生分离蛋白在蛋白膜方面的应用提供一种新途径。 展开更多
关键词 磷酸化改性花生分离蛋白-多 制备工艺 响应面法 抗氧化活性
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生物功能化纳米SiO_2微球的构建及对谷胱甘肽S-转移酶的捕获分离 被引量:3
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作者 邹雪艳 褚留杰 +2 位作者 董烁 赵彦保 李宾杰 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2012年第7期1394-1400,共7页
采用巯基丙基三甲氧基硅烷(MPS)一步水解法制备了表面带有巯基(—SH)的纳米SiO2微球(nSiO2-SH),探讨了水/醇体积比、反应温度、MPS初始浓度及反应时间对nSiO2-SH微球形貌的影响,并分析了反应机理.制备的nSiO2-SH微球进一步与还原型谷胱... 采用巯基丙基三甲氧基硅烷(MPS)一步水解法制备了表面带有巯基(—SH)的纳米SiO2微球(nSiO2-SH),探讨了水/醇体积比、反应温度、MPS初始浓度及反应时间对nSiO2-SH微球形貌的影响,并分析了反应机理.制备的nSiO2-SH微球进一步与还原型谷胱甘肽(GSH)中的—SH反应生成双硫键(—S—S—),在微球表面键合上GSH分子,得到了生物功能化的纳米nSiO2-GSH微球.通过扫描电子显微(SEM)、透射电子显微镜(TEM)、傅里叶变换红外光谱(FTIR)和热重分析仪(TG)对样品的表面形貌、尺寸和组成等进行了表征.利用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)检测样品对谷胱甘肽S-转移酶(GST)的分离效果,结果表明,nSiO2-GSH微球能从混合蛋白中特异性吸附GST,达到了分离GST的目的. 展开更多
关键词 巯基纳米SiO2 生物功能化 特异性吸附 谷胱甘S-转移酶分离
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硅胶基质聚天冬氨酸固定相的合成及对多肽的分离
8
作者 林纯 陈俊 +3 位作者 范军 张晶 喻丽 章伟光 《华南师范大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2017年第2期43-48,共6页
分别将不同分子量的聚琥珀酰亚胺(PSI)化学键合到氨丙基硅胶表面得到4种键合聚天冬氨酸(YCSiP)的固定相材料(即YCSiP-Ⅰ、-Ⅱ、-Ⅲ和-Ⅳ),采用红外光谱、热重分析、扫描电镜和Zeta电位测定等方法进行表征,研究硅胶孔径、PSI的相对分子... 分别将不同分子量的聚琥珀酰亚胺(PSI)化学键合到氨丙基硅胶表面得到4种键合聚天冬氨酸(YCSiP)的固定相材料(即YCSiP-Ⅰ、-Ⅱ、-Ⅲ和-Ⅳ),采用红外光谱、热重分析、扫描电镜和Zeta电位测定等方法进行表征,研究硅胶孔径、PSI的相对分子质量、流动相pH和离子强度等因素对分离多肽的影响.结果表明,在红外光谱中3 072、1 720和1 030 cm^(-1)等处吸收峰对应于v_(N—H)、v_(C=O)和v_(Si—O—Si)的伸缩振动峰,说明聚琥珀酰亚胺结合到硅胶上;YCSiP分离多肽主要受底物与固定相之间的静电作用影响;由小孔径的硅胶和低相对分子质量的聚琥珀酰亚胺制备得到的固定相YCSi P对多肽表现更好的分离性能;随着流动相的离子强度增大,多肽在固定相上的保留均显著减弱,在离子强度为50 mmol/L的流动相中,6种多肽在固定相上的分离效果最好.该研究丰富了硅胶基质聚天冬氨酸固定相材料在多肽分离中的应用. 展开更多
关键词 聚天冬氨酸固定相 分离 离子交换色谱 制备 离子强度
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大豆分离蛋白肽-硒螯合物的制备及结构、抗氧化活性研究 被引量:2
9
作者 张馨元 徐梁棕 汪少芸 《食品与机械》 CSCD 北大核心 2018年第4期163-167,共5页
对大豆分离蛋白酶解工艺及大豆分离蛋白肽-硒螯合物的制备工艺进行优化;采用吸收光谱和荧光光谱对大豆分离蛋白肽-硒螯合物的结构进行表征,并对其抗氧化性进行研究。结果表明,大豆分离蛋白经复合风味蛋白酶于温度50℃、底物浓度3%、酶/... 对大豆分离蛋白酶解工艺及大豆分离蛋白肽-硒螯合物的制备工艺进行优化;采用吸收光谱和荧光光谱对大豆分离蛋白肽-硒螯合物的结构进行表征,并对其抗氧化性进行研究。结果表明,大豆分离蛋白经复合风味蛋白酶于温度50℃、底物浓度3%、酶/底物5g/100g条件酶解后,于pH 10、时间2h、温度78℃条件进行螯合时,所得螯合物螯合力为46.143mg/g,结构表征证明硒与大豆分离蛋白肽螯合并可引起荧光猝灭现象,且其具有高于大豆分离蛋白肽的抗氧化活性。 展开更多
关键词 大豆分离蛋白 螯合 结构 抗氧化
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激光诱导荧光检测微流控芯片毛细管电泳分离多肽的研究
10
作者 唐敏 方群 方肇伦 《分析试验室》 CAS CSCD 北大核心 2003年第z1期290-290,共1页
  微流控分析系统是分析科学及分析仪器重要的发展前沿,是90年代初发展起来的微分析系统的主要组成部分及目前较为活跃的领域.将微流控分析系统应用于电泳分离,与传统的电泳分离手段相比较而言,具有微型化、可集成化、速度快、进样量...   微流控分析系统是分析科学及分析仪器重要的发展前沿,是90年代初发展起来的微分析系统的主要组成部分及目前较为活跃的领域.将微流控分析系统应用于电泳分离,与传统的电泳分离手段相比较而言,具有微型化、可集成化、速度快、进样量小等特点.它的检测方法有多种,其中激光诱导荧光(Laser induced fluorescence,LIF)法因其灵敏度高,成为微流控芯片分析检测目前最广为采用的方法[1].…… 展开更多
关键词 微流控芯片 毛细管电泳 激光诱导荧光检测:多分离
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仿刺参(Apostichopus japonicus)和海地瓜(Acaudina leucoprocta)体壁多肽的响应面法酶解和N末端测序 被引量:5
11
作者 李妍妍 戴娟 +3 位作者 胡玲萍 江振洲 尚靖 张陆勇 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期620-627,共8页
为充分开发利用海参资源,优化海参体壁酶解工艺,鉴定海参多肽,本文以水解度为指标,设计了3因素(时间、温度和加酶量)3水平的响应面实验,得到海参水解的最优条件是:仿刺参(Apostichopus japonicus)体壁在加酶量1.97%、温度55.7°C、... 为充分开发利用海参资源,优化海参体壁酶解工艺,鉴定海参多肽,本文以水解度为指标,设计了3因素(时间、温度和加酶量)3水平的响应面实验,得到海参水解的最优条件是:仿刺参(Apostichopus japonicus)体壁在加酶量1.97%、温度55.7°C、水解136.8min的条件下,水解度为83.39%;海地瓜(Acaudina leucoprocta)体壁在加酶量1.70%、温度55.4°C、水解115.6min的条件下,水解度为63.68%。之后通过使用超滤膜、反相高效液相色谱(RP-HPLC)、基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF)技术和蛋白测序仪等分析手段从水解产物中分离鉴定出4种多肽。其中,经N端序列鉴定出仿刺参多肽S1、S2氨基酸残基序列分别为Gly-Pro-Val-Gly-Ala-Ser-Gly-Pro-Gln-Gly-ProGln-Gly-Pro-Gln-Gly-Leu-Ser-Ala-Leu和Trp-Pro-Pro-Gly-Asn-Ser-Gly-Ile-Gln-Gly。海地瓜多肽A1和A2氨基酸残基序列分别为Gly-Ala-Asn-Gly-Asn和Trp-Leu-Pro-Gly-Asp-Thr-Gly-Pro-Gln-GlyVal-Thr-Gly-Pro-Val-Gly-Pro-Ala-Gly。 展开更多
关键词 仿刺参 海地瓜 响应面 分离纯化 N端测序
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蛋白质/多肽的微流控二维芯片电泳 被引量:2
12
作者 徐溢 申纪伟 +1 位作者 陆嘉莉 温志渝 《化学进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第5期754-761,共8页
在微流控芯片上构建多维分离系统,为蛋白质组学研究提供了一个有发展前景的高效分离分析技术平台。本文介绍了二维芯片电泳系统耦联模式的选取及正交性评价的方法;综述了针对蛋白质/多肽分离分析的各种耦联模式微流控二维芯片电泳分析系... 在微流控芯片上构建多维分离系统,为蛋白质组学研究提供了一个有发展前景的高效分离分析技术平台。本文介绍了二维芯片电泳系统耦联模式的选取及正交性评价的方法;综述了针对蛋白质/多肽分离分析的各种耦联模式微流控二维芯片电泳分析系统,如胶束电动力学色谱(MEKC)与毛细管区带电泳(CZE),开管电色谱(OCEC)与CZE,等电聚焦(IEF)与CZE,IEF与SDS毛细管凝胶电泳(CGE),SDS-CGE与MEKC等。特别对二维电泳芯片切换接口的类型进行了分类,探讨了用于微流控二维芯片电泳系统的检测技术,并展望了微流控二维电泳芯片在蛋白质组学研究中的应用前景和发展方向。 展开更多
关键词 微流控芯片 二维芯片电泳 蛋白质/多分离
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从噬菌体展示随机肽库中筛选豌豆凝集素的结合肽
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作者 周翔 詹金彪 +1 位作者 毛献荣 王克夷 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 2005年第5期412-416,共5页
目的:从噬菌体展示随机肽库中筛选能与豌豆凝集素(PSA)特异结合的短肽。方法:①用豌豆凝集素(PSA)作为靶蛋白,对噬菌体展示的随机六肽库进行亲和筛选;②α-甲基-D-甘露糖苷对筛选出的噬菌体和PSA结合的影响实验(点印迹法);③选择性地合... 目的:从噬菌体展示随机肽库中筛选能与豌豆凝集素(PSA)特异结合的短肽。方法:①用豌豆凝集素(PSA)作为靶蛋白,对噬菌体展示的随机六肽库进行亲和筛选;②α-甲基-D-甘露糖苷对筛选出的噬菌体和PSA结合的影响实验(点印迹法);③选择性地合成了3条6肽ARMWSF、RYDYSY、LRLRQL,用不同浓度的6肽对PSA、ConA与HRP的结合进行竞争抑制实验。结果:经过三轮筛选后,这些噬菌体展示肽有明显的富集,从第三轮挑选的22个克隆的插入氨基酸序列可分为三大类;点印迹结果表明,这些噬菌体展示肽能与PSA特异结合,而α-甲基-D-甘露糖苷不同程度地抑制这种结合;LRLRQL不溶于水,ARMWSF和RYDYSY对PSA和HRP的结合有抑制,而对ConA和HRP的结合没有明显抑制。结论:人工合成的2条6肽和PSA的结合部位与α-甲基-D-甘露糖苷和PSA结合的部位并非相同。 展开更多
关键词 噬菌体 类/分离提纯 模拟 外源凝集素类/遗传学 植物 噬菌体展示随机 豌豆凝集素 亲和筛选 结合
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大豆抗氧化肽分子特征及制备技术概述 被引量:4
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作者 王晓燕 唐传核 《粮食与油脂》 北大核心 2009年第4期1-3,共3页
该文概述并评价大豆抗氧化肽制备、分离纯化及构效关系,提出目前存在问题和未来发展前景,旨在为大豆抗氧化肽深入研究提供一定借鉴,进而加快大豆抗氧化肽工业化进程。
关键词 大豆抗氧 分离纯化 大豆
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基于强阳离子交换色谱与等电聚焦的磷酸化蛋白质组学分离策略比较 被引量:4
15
作者 隋少卉 董俊军 +2 位作者 王京兰 蔡耘 钱小红 《分析化学》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2012年第2期177-183,共7页
比较分析了强阳离子交换(SCX)与等电聚焦(IPG-IEF)技术在磷酸化蛋白质组学中的应用。采用3种标准磷酸化蛋白对SCX与IPG-IEF两种技术对磷酸化肽段富集的有效性进行考察。以HepG2细胞为复杂样本,考察SCX与IPG-IEF在实际样本中的应用情况。... 比较分析了强阳离子交换(SCX)与等电聚焦(IPG-IEF)技术在磷酸化蛋白质组学中的应用。采用3种标准磷酸化蛋白对SCX与IPG-IEF两种技术对磷酸化肽段富集的有效性进行考察。以HepG2细胞为复杂样本,考察SCX与IPG-IEF在实际样本中的应用情况。对SCX与IPG-IEF技术在18O标记的磷酸化蛋白质组定量研究中的应用情况进行考察。蛋白鉴定采用高准确度、高灵敏度、高分辨率的LTQ-FTICR-MS/MS质谱仪。实验表明:SCX和IPG-IEF在大规模磷酸化肽段分离过程中均有效;在复杂样本中,SCX技术的分离效果优于IPG-IEF;IPG-IEF的重复性好于SCX;在磷酸化蛋白质组定量分析结果表明,IPG-IEF技术的稳定性优于SCX。本研究为根据不同实验目的而选择适当的磷酸化蛋白质组预分离技术提供了有用信息。 展开更多
关键词 磷酸化分离 强阳离子交换 等电聚焦 傅里叶交换离子回旋质谱
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植物源功能活性多肽研究进展 被引量:2
16
作者 张作达 吴若娜 +2 位作者 王琴飞 牛晓磊 张振文 《中国农学通报》 2022年第12期88-94,共7页
为了促进开发利用更多植物源功能活性多肽,本文归纳总结了植物源功能活性多肽提取、制备、分离、鉴定和功能验证等方面的研究,比较分析不同研究方法和应用结果的差异,总结了当前植物源功能活性多肽研究主要存在问题,提出今后应在降低提... 为了促进开发利用更多植物源功能活性多肽,本文归纳总结了植物源功能活性多肽提取、制备、分离、鉴定和功能验证等方面的研究,比较分析不同研究方法和应用结果的差异,总结了当前植物源功能活性多肽研究主要存在问题,提出今后应在降低提取成本和加强标准体系建设等方面开展工作,为未来植物源功能性多肽研究奠定基础。 展开更多
关键词 植物活性多 制备 分离 功能 功能验证
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一种对HepG2细胞生长有抑制作用的玉米六肽
17
作者 王华丽 王一玮 +4 位作者 王萌 耿伟涛 王金菊 贾龙刚 王艳萍 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2021年第12期8-13,共6页
采用DEAE-FF离子交换和Sephdax G-15葡聚糖凝胶层析方法,从玉米肽中分离、纯化,获得具有抑制HepG2细胞增殖活性的短肽,采用高效液相色谱串联质谱电喷雾法(liquid chromatography-electrospray ionization tandem mass spectrometry,LC-E... 采用DEAE-FF离子交换和Sephdax G-15葡聚糖凝胶层析方法,从玉米肽中分离、纯化,获得具有抑制HepG2细胞增殖活性的短肽,采用高效液相色谱串联质谱电喷雾法(liquid chromatography-electrospray ionization tandem mass spectrometry,LC-ESI-MS/MS)对其活性片段进行结构鉴定。结果表明:其短肽的一级结构为LPPYLP[命名为玉米六肽(corn peptides-6,CPs-6)],通过四唑盐[3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,MTT]比色法试验发现,CPs-6具有抑制HepG2细胞增殖的效果,且对L-02细胞的毒性低。 展开更多
关键词 玉米活性(CPs-6) HepG2抑制作用 肝癌细胞 活性 分离纯化
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Alloferon-1抗生肽串联重组表达及重组Alloferon-1体外抗肿瘤活性
18
作者 徐小寅 严杰 孙琦 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期501-507,共7页
目的:构建含胰蛋白酶酶切位点的Alloferon-1抗生肽重复串联DNA片段及其原核表达系统,了解有赖氨酸尾重组Alloferon-1(rAlloferon-1)体外抗肿瘤活性。方法:根据Alloferon-1序列不含精氨酸和赖氨酸的特点,构建C端加有含胰蛋白酶酶切位点... 目的:构建含胰蛋白酶酶切位点的Alloferon-1抗生肽重复串联DNA片段及其原核表达系统,了解有赖氨酸尾重组Alloferon-1(rAlloferon-1)体外抗肿瘤活性。方法:根据Alloferon-1序列不含精氨酸和赖氨酸的特点,构建C端加有含胰蛋白酶酶切位点赖氨酸的14×Alloferon-1抗生肽重复串联DNA片段。采用pET42a表达载体和E.coli BL21DE3表达宿主菌,构建Alloferon-1重复串联DNA片段原核表达系统。SDS-PAGE联合Bio-Rad凝胶图像分析系统检测目的重组产物表达量,Ni-NTA亲和层析、胰蛋白酶酶切和Sephadex G-50层析法提纯14×rAlloferon-1-K及其rAlloferon-1-K单体。BALB/c小鼠脾细胞分别与K562、KB和SGC肿瘤细胞共培养模,采用CCK-8法检测rAlloferon-1-K、化学合成Alloferon-1(cAlloferon-1)及Alloferon-1-K(cAlloferon-1-K)体外抑制肿瘤细胞生长及增殖的活性并进行比较。结果:原核表达系统E.coli BL21DE3pET42a-14×Alloferon-1-K在IPTG诱导下能有效表达14×rAlloferon-1-K蛋白,其产量约为细菌总蛋白的30%。0.1~10 ng/ml的rAlloferon-1-K具有明显提高小鼠脾细胞抑制K562、KB和SGC肿瘤细胞的生长及增殖(P<0.01),rAlloferon-1-K的抗肿瘤活性与cAlloferon-1及cAlloferon-1-K比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:本研究成功构建了Alloferon-1抗生肽重复串联原核表达系统,有效地提高了Alloferon-1产量;而且rAlloferon-1-K仍保持原有的体外抗肿瘤活性。 展开更多
关键词 重组融合蛋白质类 类/分离和提纯 抗菌药/分离和提纯 抗肿瘤药/药理学 重组 遗传 质粒
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基于大肠杆菌蛋白质质谱鉴定的阳离子交换色谱优化研究
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作者 朱平川 岑卫健 +2 位作者 付强 胡炜 卢洁 《湖北大学学报(自然科学版)》 CAS 2014年第5期435-438,共4页
以大肠杆菌蛋白质的胰蛋白酶切产物为研究对象,对蛋白质的提取效率进行初步探讨,重点是对多维色谱分离中常用的强阳离子交换色谱的分离条件,包括缓冲液的种类、pH值,洗脱盐的种类、有机溶剂的比例以及上样量进行了考察和比较.结果表明:... 以大肠杆菌蛋白质的胰蛋白酶切产物为研究对象,对蛋白质的提取效率进行初步探讨,重点是对多维色谱分离中常用的强阳离子交换色谱的分离条件,包括缓冲液的种类、pH值,洗脱盐的种类、有机溶剂的比例以及上样量进行了考察和比较.结果表明:功率为400W,超声时间为15min,蛋白质的提取效率达到最高.在强阳离子交换色谱分离线性上样量范围内,10mmol/L磷酸二氢钾(pH=3.0)作为缓冲体系,在氯化钾溶液作为洗脱盐、流动相中乙腈的体积分数为30%的条件下进行梯度洗脱时,可获得最佳的分离结果. 展开更多
关键词 大肠杆菌蛋白质 蛋白提取 强阳离子交换色谱 分离
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重组人酸性成纤维细胞生长因子C-末端测序
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作者 史新昌 饶春明 +5 位作者 杨英 刘兰 韩春梅 赵阳 张翊 王军志 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期10-13,共4页
目的:应用蛋白质 N-末端序列分析仪测定重组人酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)C-末端氨基酸序列。方法:应用多肽分析软件选择合适的蛋白内切酶完全酶切 aFGF,酶切后用 RP-HPLC 进行分离,收集软件预测 C-末端肽段保留时间处的肽段峰,用蛋白... 目的:应用蛋白质 N-末端序列分析仪测定重组人酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)C-末端氨基酸序列。方法:应用多肽分析软件选择合适的蛋白内切酶完全酶切 aFGF,酶切后用 RP-HPLC 进行分离,收集软件预测 C-末端肽段保留时间处的肽段峰,用蛋白质 N-末端序列分析仪直接测得该肽段氨基酸全序列。结果:实测肽图图谱与软件预测理论图谱一致,所得到的肽段为 aFGF C-末端肽段,经测序其结果与理论序列完全一致。结论:通过选择合适的蛋白内切酶,可运用 RP-HPLC和蛋白质 N-末端序列分析仪测定基因工程产品 C-末端氨基酸序列。 展开更多
关键词 重组人酸性成纤维细胞生长因子 预测 分离 C-末端测序
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