细胞体积介导的力学响应相分离蛋白质研究

目标生命通过细胞内的相分离过程调控信号转导、基因表达等。相分离蛋白质极易受到细胞内微环境的影响,且多数相分离蛋白质可能表现成力学响应特征。基于此,本工作研究相分离蛋白质的广谱力学响应特质。更进一步的,是否可以发现更多种类的力学响应相分离蛋白质。方法 本研究创造性地利用细胞体积挤压,促使细胞内水分外流,造成细胞内蛋白质浓度的升高和分子拥挤程度增加。细胞内正在相分离的蛋白质,或者在相分离条件边缘的蛋白质,感受到物理调控因子的影响,也将必然改变其相分离程度。为了高效捕获到相分离程度发生微弱变化的蛋白质,项目团队结合蔗糖密度梯度离心技术和定量质谱技术,将在细胞体积挤压(1 min)前后发生寡聚程度变化的蛋白质进行组学水平的高通量鉴定,所鉴定出的蛋白质即为候选相分离蛋白质。结果 鉴定了1 454种内源相分离蛋白质,以及522种未报道的相分离蛋白质。更重要的,发现了1 215种力学响应的内源性相分离蛋白质。结论 细胞内的相分离蛋白质存在广谱的力学感受和响应行为,且由相分离蛋白质组成的无膜细胞器同样具有力学感受与响应能力。

椰子分离蛋白质提取工艺的研究

利用磷酸盐缓冲溶液从椰子肉中提取椰子分离蛋白质,采用单因素实验和正交实验研究最佳工艺条件。结果表明,各因素对提取率的影响次序为:料液比>温度>提取时间>pH,其中,料液比对提取率的影响达到了显著水平;最佳工艺参数为:35℃、pH9.5、料液比1∶20、时间120min,在此条件下,椰子分离蛋白质的提取率为76.60%。

热处理大豆分离蛋白质饲粮对肉鸡胰腺功能的影响

本试验旨在探讨热处理大豆分离蛋白质饲粮对肉鸡胰腺功能的影响。选用1日龄爱拔益加(AA)肉鸡320只,随机分为4个组,每组8个重复,每个重复10只,分别饲喂4种饲粮:正常大豆分离蛋白质饲粮(对照组),100℃热处理1、4及8 h的大豆分离蛋白质饲粮,试验期为21 d。结果表明:与对照组相比,各热处理大豆分离蛋白质饲粮对14日龄肉鸡胰腺功能相关指标均无显著影响(P>0.05);21日龄,各热处理大豆分离蛋白质饲粮均显著提高了肉鸡胰腺的相对重量(P<0.05),热处理8 h大豆分离蛋白质饲粮使肉鸡胰腺胰蛋白酶和蛋白酶活性显著降低(P<0.05);热处理8 h组肉鸡胰腺丙二醛含量显著升高(P<0.05),氧化型谷胱甘肽含量有升高趋势(P=0.065),但总抗氧化能力(P=0.058)及过氧化氢酶(P=0.064)、谷胱甘肽还原酶(P=0.061)活性有降低的趋势;此外,热处理8 h大豆分离蛋白质饲粮使胰腺中还原型谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽和谷胱甘肽过氧化物酶活性显著下降(P<0.05)。试验结果提示,摄食热处理大豆分离蛋白质饲粮一定时间后会对肉鸡胰腺功能产生负面作用。

固定化胰蛋白酶亲和层析法制备低STI残存大豆分离蛋白质

聚苯乙烯阴离子交换树脂(GM201)经预处理除去杂质后先与戊二醛(2—6％)反应,再与胰蛋白酶(5000u/mg,8—10mg/mL,pH 8.0)反应即制得固定化胰蛋白酶。此法得到的固定化胰蛋白酶具有良好的热稳定性,贮藏稳定性和操作稳定性,可用于工业化目的。脱脂豆粉经萃取(PH9.0)后,稀释4倍,在pH5.0下沉淀分离出大豆球蛋白,然后用酸性水(pH5.0)洗涤两次,并进行碱溶与酸沉淀两次,即可将大豆分离蛋白质的STI残留降低到1.85％,比活性降到1u/mg以下。最后再用固定化胰蛋白酶亲和层析,就可以除去大豆分离蛋白质中残留的STI。

鱼下脚料分离蛋白质的制备及功能性质研究

利用美国鱼生产鱼片加工的下脚料制备分离蛋白质,研究提取液pH值、提取时间、提取温度和料液比等单因素对蛋白质提取率的影响,通过正交试验得出分离蛋白质的最佳工艺参数,再通过酸沉、水洗、脱腥和喷雾干燥等步骤最终得到分离蛋白质粉,对此分离蛋白质进行部分性质与功能的鉴定与分析。结果表明,鱼加工下脚料中含有大量蛋白质,其含量高达55.42%。分离蛋白质的最佳工艺参数:料液比为1∶10(g∶mL),提取液pH值11,提取时间90 min,提取温度40℃;并通过在等电点pH值5.2时酸沉、水洗、添加30 g/Lβ-环糊精进行脱腥,最后经喷雾干燥得到分离蛋白质粉。蛋白质得率为42.12%,提取率为76.0%。分离蛋白质的溶解度在pH值为5.0左右时最小,其保水性为1.48 mL/g,吸油性为2.8 mL/g,乳化性为40.59%,乳化稳定性为57.97%。

螺旋藻分离蛋白质的制备技术

螺旋藻是一种全天然、高蛋白、富含生理活性成分的藻类植物,它是目前已知蛋白质含量最高的植物种类之一,联合国粮农组织(FAO)已将其列入21世纪人类食品资源开发计划,并认为是人类未来最理想的食品之一。螺旋藻的蛋白质含量高达60％～70％,其氨基酸组成十分理想,其中8种必须氨基酸含量接近或超过FAO推荐的标准,有如大豆蛋白质一样,随着螺旋藻蛋白质推广普及,其有望在不远的将来成为人类重要的蛋白质来源。

双水相萃取结合液相色谱法分离蛋白质

建立了PEG/(NH4)2SO4双水相体系萃取富集,结合液相色谱分离分析多种蛋白质的方法。考察了无机盐种类和浓度、PEG分子量、pH值和温度等因素对双水相形成以及对细胞色素C、肌红蛋白、牛血清白蛋白、溶菌酶、胰蛋白酶分配行为的影响。结果表明,上述5种蛋白在室温、pH 3.5～9.0范围内,可在15%PEG-4000/10%(NH4)2SO4双水相体系中得到富集,且主要集中在下相。同样条件下,血清中的高丰度蛋白在上下相均有分配,下相分配量较大。通过双水相萃取分离蛋白质及对液相色谱一定时间段的色谱峰收集,可初步实现血清中高丰度蛋白质的分离去除。

凝胶过滤分离蛋白质实验条件的研究

目的研究凝胶过滤各影响因素对蛋白质分离的影响。方法应用一般色谱方法,选择葡聚糖凝胶Sephadex G-75和几种蛋白质对装柱、洗脱液、流速和操作压等条件进行试验。结果选用不同浓度的凝胶悬液进行装柱,不同离子成分、pH的洗脱液,不同流速和操作压对几种蛋白质进行色谱分离,得到不同的结果。结论凝胶悬液较稀利于装柱,洗脱液的离子成分不直接影响分离效果,而洗脱液的pH对几种蛋白质分离产生明显影响,酸性条件下分离的效果好,适当的流速和操作压有利于提高色谱柱的分辨率,保证色谱柱的反复正常使用。

无外相合成的葡聚糖凝胶PT-50分离蛋白质与脱盐的性能

通过无外相法合成的葡聚糖凝胶 PT-50分离蛋白质与脱盐性能的试验表明,该凝胶具有国外同类产品 Sephadex G50 的分离性能。

神府煤对大豆分离蛋白质的吸附特性研究

采用静态吸附法探讨了神府煤粉(SFC)对大豆分离蛋白质(SPI)的吸附特性。研究了SPI溶液初始质量浓度(3.0—12.0 kg/m3)、温度(20、30、40、50℃)、pH值(4.0—9.0)等条件对吸附量的影响。结果表明,吸附平衡时间为12 h,适宜的pH值为6.0。SFC对SPI吸附过程为非自发的放热过程,吸附过程符合二级动力学模型。红外光谱分析表明,蛋白质分子主要通过C O和NH与煤大分子结构中的OH和C O对应形成2个活性位点的氢键作用,吸附于煤表面。

毛细管等电聚焦分离蛋白质

毛细管等电聚焦（CIEF）可分离等电点（pI）相差0．02pH单位的蛋白质。本文介绍了CIEF分离蛋白质的基本原理、方法和特点；阐述了CIEF分离蛋白质应解决的基本问题，包括消除或减小电渗的涂层方法。检测方法和条件。蛋白质区带的迁移及pI测定方法。讨论了影响CIEF分离效能的因素，如两性电解质的组成和浓度、毛细管长度、聚焦电压等。列举了应用CIEF分离具有不同pI蛋白质混合物的实例，对CIEF的应用前景进行了展望。

我厂大豆分离蛋白质的生产

我们厂早在一九七八年就开始研究大豆分离蛋白质的生产.并在实验室利用我厂生产的高温脱溶的大豆脱脂粕提取分离蛋白质.在多次实验的基础上掌握了生产大豆分离蛋白质生产工艺中的萃取、酸沉、分离和灭菌等重要工序的操作方法、步骤和工艺数据,为建立大豆分离蛋白质车间奠定了基础.一九八一年我们在省粮食局、市科委和市粮食局的关怀下,开始了大豆分离蛋白质生产车间的设计和建设工作.

聚合物涂层技术在毛细管电泳分离蛋白质中的应用

影响毛细管电泳分离蛋白质效率和重现性的主要原因是毛细管壁对蛋白质的吸附。本文综述了解决这一问题的途径,包括极端pH值法、添加小分子添加剂、对毛细管内壁改性等方法,重点介绍并比较了用于毛细管内壁改性的两类聚合物涂层-化学键合和物理吸附的涂层。分别讨论了两类涂层在对电渗流的抑制和调节、对蛋白质吸附的阻止等方面的作用效果,并且对同种涂覆机理下不同聚合物的涂覆效果做了相关比较。总体上说,物理吸附的涂层比化学键合的涂层性能优越,因此在毛细管涂覆领域更受欢迎。尽管目前该领域的工作取得了较大进展,但仍未找到一种对所有种类蛋白质的分离都有效的普适性涂层,因此未来的一段时间内分离复杂组分的蛋白质仍面临着挑战。

金纳米微粒修饰毛细管电泳分离蛋白质的研究

报道了金纳米微粒(Au NP)修饰毛细管电泳分离蛋白质的方法。采用物理吸附法将Au NP修饰在熔融石英毛细管内表面,制备成Au NP修饰毛细管。探讨了修饰剂Au NP的浓度对电渗流及蛋白质分离的影响。结果表明,Au NP修饰的毛细管能有效地抑制电渗流及蛋白质在毛细管内壁上的吸附,提高分离效率。在优化的实验条件下,实现了人血清白蛋白(HSA)与牛血清白蛋白(BSA)两种蛋白质的基线分离,且HSA与BSA的浓度与其峰面积呈现良好的线性关系,相关系数分别为0.9843和0.9948,检出限(S/N=3)分别为0.83μg/mL和0.80μg/mL。

磁性纳米颗粒分离蛋白质的研究进展

蛋白质作为食品中的一种重要成分,其分离纯化技术受到许多科研工作者的关注。近年来,磁性纳米颗粒在蛋白质分离技术中的应用迅速发展,研究者们在磁颗粒表面上结合不同的基团,如螯合物、官能团、与模板蛋白对应的聚合物结构等,来实现对不同蛋白质的特异性分离和纯化。

聚(2-甲基-2-[口恶]唑啉)在毛细管电泳分离蛋白质中的应用

毛细管电泳作为一种常见的液相分离技术,因其分析速度快、分离效率高、样品消耗量少等特点,在蛋白质分离分析领域有广泛应用。然而,常用的熔融硅毛细管容易吸附蛋白质,导致电渗流不稳定,分离结果重现性变差;此外,商用毛细管电泳中常用的紫外检测器由于光程短,使得毛细管电泳的检测灵敏度往往不能达到低丰度蛋白质的直接分析要求。因此寻找能够阻止蛋白质吸附、同时能够提高检测灵敏度的涂层是毛细管电泳分离分析蛋白质的重要课题之一。聚(2-甲基-2-[口恶]唑啉)(PMOXA)作为一种类肽类亲水性聚合物,具有与抗蛋白质吸附聚合物聚乙二醇类似的亲水性、抗蛋白质吸附性和生物相容性,而且其类肽结构使之具有较聚乙二醇更好的稳定性,因此近年来在生物质传递、药物载体和阻抗蛋白质吸附等领域得到越来越多的应用。该文主要从两个方面对聚(2-甲基-2-[口恶]唑啉)在毛细管电泳中的应用进行了阐述。一是利用多巴胺作为黏合层将其涂覆在毛细管内壁作为抗蛋白质吸附涂层,这种涂层不仅能成功分离多种蛋白质的混合物(如溶菌酶、细胞色素C、核糖核酸酶A和α-胰凝乳蛋白酶原A),而且在定量检测奶粉中三聚氰胺、乳铁蛋白的过程中,能阻抗其他蛋白质的非特异性吸附,提高了毛细管电泳对奶粉中三聚氰胺、乳铁蛋白的检测效率。二是将其与具有刺激响应性的聚合物(如聚丙烯酸)构成二元混合刷涂层,在一定的pH和离子强度条件下,涂层可吸附目标蛋白质(如牛血清白蛋白、溶菌酶),在另一pH和离子强度条件下可将吸附的目标蛋白质全部释放,同时在释放过程中,处于涂层表面的聚(2-甲基-2-[口恶]唑啉)会进一步阻止蛋白质的吸附,释放的蛋白质在电渗流和电泳的双重作用下快速迁移,到达检测器的蛋白质瞬时浓度大大增加,使目标蛋白质得到富集,目标蛋白质的检测信号得到放大,从而达到了提高低丰度蛋白质检测灵敏度的目的。此外,该文还对聚(2-甲基-2-[口恶]唑啉)在毛细管电泳分离蛋白质中的未来发展趋势进行了展望。

用离子交换树脂分离蛋白质水解液中的氨基酸

第三报中性氨基酸的分离经活性炭吸附芳香族氨基酸之后,继经 Wofatyt KPS-200H^+式柱吸附剩下的氨基酸。猪毛经酸水解可以得到几类氨基酸:酸性的(a、b 系)、中性的(b、c、d 系)和碱性的(e 系)以及混杂于其中的部分胱氨酸。

多维液相色谱 bottom-up top-down 阵列式 完整蛋白质 蛋白质分离

蛋白质组学出现之后,多维高效液相色谱（multidimensional HPLC,MD-HPLC）系统以其快速、高效、自动化程度高以及容易与质谱等其他技术联用等优势而成为蛋白质组学相关分析技术中研究应用的热点。本文主要以本实验室在蛋白质组学研究中的技术进展为主线,介绍了多维高效液相色谱技术的发展,包括经典的“bottom-up”技术和“top-down”式的多维高效液相色谱技术路线,以及为了提高系统的分离通量而自行设计搭建的阵列式多维高效液相色谱平台,这些技术路线在蛋白质组学研究中有着极大的潜在应用价值。

蛋白质分离器中的不同臭氧浓度对工厂化养殖净水效果的试验

The water treatment effect of a protein skimmer with different ozone concentrations for recirculation system of industrial fish farming was studied in this paper.Foam separation principle and ammonia nitrogen removing theory of the protein skimmer was described.A protein skimmer with a discharge of 50 m3·h-1 was designed.The skimmer was used in a recirculation system,and relative water quality parameters: protein,ammonia nitrogen,nitrite,nitrate,organic nitrogen,suspended solid,dissolved oxygen,were tested.The results showed that the egesta of the fish reared and the feedstuff residual could be removed efficiently.The removal efficiency of ammonia nitrogen and protein in the recirculation system was very high by entering ozone into the protein skimmer.The removal rate of protein,ammonia nitrogen,nitrite,nitrate,organic nitrogen,suspended solid were various along with the different ozone concentrations.And the dissolved oxygen was greatly increased.

微流控芯片毛细管电泳在蛋白质分离分析中的应用研究进展

重点介绍了近年来国内外在微流控芯片毛细管电泳法用于蛋白质分离分析方面的研究进展。按照分离模式的不同,综述了各种应用于蛋白质分离的微流控芯片毛细管电泳系统,讨论了抑制芯片中的蛋白吸附的各种方法,并展望了芯片毛细管电泳系统在蛋白质分离领域的发展前景。引用文献47篇。