有丝分裂原激活的蛋白激酶作用激酶抑制剂研究进展

有丝分裂原激活的蛋白激酶作用激酶(MNK)对真核细胞翻译起始因子4E(eIF4E)209位丝氨酸的磷酸化作用与肿瘤相关mRNA的翻译起始过程密切相关,在肿瘤的发生、转移等过程中具有重要作用,MNK已经逐渐成为抗肿瘤的重要靶标。近年来MNK小分子抑制剂的开发已受到了研究人员的关注,因此本文在总结MNK的结构和信号转导机制的基础上,对MNK小分子抑制剂的研究进展进行综述。

促分裂原活化蛋白激酶激活的蛋白激酶-2全新抑制剂的3D-QSAR研究

促分裂原活化蛋白激酶激活的蛋白激酶-2(MK-2)可以作为治疗类风湿性关节炎(RA)的靶标,并显示出巨大的潜力,此类酶的抑制剂用于治疗RA具有相当好的疗效,一系列β咔啉衍生物对于MK-2具有高的活性和选择性。通过自组织分子场(SoMFA)分析方法建立了MK-2抑制剂———β咔啉衍生物的三维定量构效关系(3D-QSAR)模型。SoMFA模型的相关系数r2=0.731,交叉验证相关系数q2=0.686,标准偏差s=0.388,Fisher检验值F=63.538。该模型具有很好的稳定性和较为满意的预测能力。

支架蛋白对丝裂原活化蛋白激酶信号途径中震荡的抑制

通过一种两体支架蛋白参与的丝裂原活化蛋白激酶 (mitogen activatedproteinkinase,MAPK)信号转导模型 ,研究了支架蛋白参与的存在负反馈的MAPK信号转导途径 .支架蛋白(scaffoldprotein)既可以促进信号过程 ,也可以抑制信号的转导 .由系统中支架蛋白的浓度以及支架与信号分子的相互作用共同决定了增加支架浓度造成的不同结果 .不仅如此 ,系统中支架蛋白浓度的增加 ,还会抑制负反馈系统中出现的持续震荡 .

急性结肠炎性内脏痛中MAPK通路蛋白的表达及吗啡治疗效果

目的：探讨MAPK通路在急性结肠炎性内脏痛中的作用.方法：实验一,将大鼠分为正常对照组,结肠炎组（结肠内注射6％醋酸0.5 ml）和制模对照组（结肠内注入等量生理盐水）.观察大鼠疼痛行为和结肠炎症反应;用Western blot法检测脊髓内MAPK通路蛋白表达.实验二,将大鼠分为吗啡预治疗组（制模前皮下注射吗啡5 mg/kg）和溶剂（生理盐水）对照组,所有大鼠同前制模,观察终点同实验一.结果：急性结肠炎可引起L5～S1脊髓内pERK、pJNK显著升高,在C2～4脊髓内无明显变化;p38蛋白无明显变化;吗啡预治疗可明显减轻内脏疼痛程度,降低结肠炎症分级,降低L5～S1脊髓内pERK和pJNK的表达,升高C2～4脊髓内pERK的表达.结论：MAPK通路通过ERK和JNK的激活介导急性结肠炎性疼痛,吗啡治疗作用也与这两个通路有关.

p38信号通路激活与肾小球硬化的研究进展

肾小球硬化是各种肾小球疾病发展的最终结局，是慢性。肾小球肾炎进展的主要原因。细胞内信号通路在肾小球硬化中的作用是目前研究的热点。MAPK（有丝分裂原激活的蛋白激酶）是调节细胞内一系列病理、生理功能改变的重要信号通路，p38MAPK通路在炎症、应激、细胞周期、凋亡等多种细胞生理／病理过程发挥着重要的作用，本文综述如下。

氟比洛芬酯对神经病理性疼痛大鼠脊髓背角p38丝裂原活化蛋白激酶活化的影响

目的 观察氟比洛芬酯对神经病理性疼痛大鼠脊髓背角p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）表达的影响.方法 成年健康雄性SD大鼠108只,体质量200 ～ 250 g,采用随机数字表法,将其随机分为3组（n=36）：假手术组（S组）、神经病理性痛组（NP组）和氟比洛芬酯组（F组）.S组仅分离坐骨神经但不结扎,NP组和F组采用坐骨神经慢性压迫损伤法建立神经病理性痛模型.F组于术毕开始腹腔注射氟比洛芬酯10 mg/kg,1次/d,连续14 d;S组和NP组以等容量生理盐水替代.于术前1d、术后3、7、14 d时测定热缩足反射潜伏期（PWL）,并于术后3、7、14d时测定痛阈后各取12只大鼠处死,采用Western blot法测定脊髓背角环氧合酶-2（COX-2）、总p38MAPK（t-p38MAPK）和磷酸化p38MAPK （p-p38MAPK）蛋白表达水平.结果 与S组比较,术后3～14d时PWL在NP组[（3.34±0.22）、（3.54±0.47）、（3.84±0.55）s]和F组[（7.68±0.61）、（8.76±0.71）、（9.68±0.83）s]缩短,术后3～7d脊髓背角COX-2的表达在NP组（3.34±0.22、3.58±0.35）和F组（1.88±0.23、1.56±0.17）上调（P＜0.05）,p-p38MAPK蛋白表达在NP组（36.8±4.1、35.6±3.8）和F组（26.6±3.9、20.4±2.4）升高（P＜0.05）;与NP组比较,F组术后3～14dPWL[（7.68±0.61）、（8.76±0.71）、（9.68±0.83）s]延长,术后3～14d脊髓背角COX-2的表达（1.88±0.23、1.56±0.17、1.03±0.09）下调,p-p38MAPK蛋白表达（26.6±3.9、20.4±2.4、13.6±2.1）降低（P＜0.05）;3组各个时间点脊髓背角t-p38MAPK蛋白表达差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 氟比洛芬酯可减轻大鼠神经病理性痛,其机制可能与抑制脊髓背角p38MAPK活化有关.

体外顺铂诱导肝癌 SMMC- 7721细胞凋亡时细胞信号转导因子活性变化

目的 体外使用顺铂诱导肝癌 SMMC- 772 1细胞凋亡 ,检测细胞转导因子 MAPKs及转录因子 (JUN,CREB)活性的变化 .方法 采用免疫细胞化学法和流式细胞术法 .结果 15 m g· L- 1 顺铂作用肝癌 SMMC- 772 1培养细胞 4 8h可观察到明显的凋亡峰 ,72 h免疫细胞化学染色发现胞质或(和 )胞核中 MAPKs(JIN/ SAPKs,p38MAPK,ERK)及转录因子 (JUN,CREB)均有明显表达 .结论 在体外顺铂诱导肝癌 SMMC- 772 1细胞凋亡过程中 ,MAPKs途径 (JIN/ SAPKs,p38MAPK,ERK)及转录因子 (JUN,CREB)参与诱导了细胞凋亡 .

蛋白激酶A(PKA)介导的信号通路:正调节还是负调节?

蛋白激酶A是由 2个调节亚基与 2个催化亚基构成的异四聚体 .在不同的组织中 ,PKA可以起着不同的调节作用 ,如生长、分化和特定基因的表达 .在免疫系统中 ,PKA介导了一个普遍性的抑制性信号 ,对维持免疫系统的稳定起着重要的作用 .PKA通过对Raf 1的磷酸化抑制了Raf 1的激活 ,从而阻断了Ras/Raf 1 /MEK/MAPK信号通路的激活 ,抑制细胞的增殖 .在转录因子的调节方面 ,PKA可以激活CREB而促进了含CRE基因的转录 ;但它同时却抑制了NF kB的活性而介导了细胞因子等表达的抑制 .

从P38-MAPK信号通路研究黄芩苷对Ac-LDL+LPS诱导的与动脉粥样硬化相关巨噬细胞凋亡的影响

目的:从P38-MAPK信号通路研究黄芩苷对Ac-LDL+LPS诱导的与AS相关巨噬细胞凋亡的影响。方法:收集鼠腹腔巨噬细胞进行体外培养,使用100μg/m L乙酰低密度脂蛋白及1μg/m L脂多糖诱导巨噬细胞凋亡,以120、240、480μg/m L黄芩苷作为低、中、高3种剂量进行干预,Annexin-V和PI双染后用流式细胞仪检测细胞凋亡,Western-bolt技术检测磷酸化P38蛋白表达量。结果:正常组、对照组与模型组的细胞凋亡率差异有统计学意义(P<0.01),模型组细胞凋亡率明显高于正常组和对照组,可知实验造模成功。低剂量黄芩苷观察组与模型组细胞凋亡率差异无统计学意义(P>0.01)。中、高剂量黄芩苷观察组与模型组相比细胞凋亡率差异有统计学意义(P<0.01),细胞凋亡率明显高于模型组。Ac-LDL+LPS联合干预较Ac-LDL或LPS单独干预引起的磷酸化P38含量高。随着黄芩苷干预剂量增高,磷酸化P38表达有升高趋势,高剂量黄芩苷干预组中磷酸化P38表达升高明显。结论:脂多糖和乙酰低密度脂蛋白双重打击是诱导巨噬细胞凋亡的重要原因,P38-MAPK信号通路参与这一过程。高剂量的黄芩苷可能通过增强磷酸化P38表达来促进脂多糖和乙酰低密度脂蛋白诱导的巨噬细胞早期凋亡,从而拮抗早期动脉粥样硬化的病理进程。

黄芩苷诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的p38MAPK途径研究

目的研究黄芩苷对人肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用及其对p38MAPK信号通路的影响。方法以不同浓度的黄芩苷与人肝癌HepG2细胞共同培养24、48、72 h后,采用MTT法测定细胞增殖抑制率;通过活细胞计数,检测不同浓度黄芩苷处理后细胞活力的变化;采用western blotting方法检测黄芩苷处理72 h后HepG2细胞p38和p-p38蛋白的表达变化。结果黄芩苷对HepG2细胞生长有抑制作用,并随药物作用时间的延长和药物浓度的增加,其抑制效果越明显;通过对活细胞计数发现黄芩苷对HepG2细胞生长有抑制作用,随黄芩苷浓度的增加,细胞存活率下降,细胞增殖速度明显减缓;在黄芩苷处理72 h后p38蛋白表达兀明显变化,而p-p38蛋白表达上调且随黄芩苷浓度升高蛋白表达升高。结论黄芩苷可能通过激活p38MAPK信号通路诱导人肝癌HepG2细胞凋亡。

白介素1-β对人肺腺癌细胞COX-2表达的作用及调节机制(英文)

目的探讨细胞因子白介素-1β(IL-1β)对人肺腺癌细胞株A549细胞环氧合酶2(COX-2)表达的影响及调节机制。方法A549细胞培养达80%融合后,用不同浓度的IL-1β(0、0.1、1、5和10ng/mL)干预或用5ng/mLIL-1β干预不同时间(0、3、6、9、12和24h)观察白介素-1β(IL-1β)对A549细胞COX-2表达的影响;用5ng/mLIL-1β与有丝分裂原激活的细胞外调节激酶(ERK)抑制剂PD098059、P38有丝分裂原激活的蛋白激酶(MAPK)抑制剂SB203580、蛋白激酶C(PKC)抑制剂H-7共同干预A549细胞观察IL-1β诱导A549细胞COX-2表达的信号传导途径;用COX-2系列报告基因质粒及对照质粒转染A549细胞后予以IL-1β干预,以不加IL-1β干预的细胞为对照组观察IL-1β对COX-2启动子的影响;Westernblot检测COX-2蛋白表达,RT-PCR检测COX-2mRNA表达。COX-2报告基因活性应用荧光素酶活性分析法测定。结果A549细胞COX-2蛋白表达和mRNA表达呈IL-1β浓度依赖性表达增加,干预9h表达达高峰;SB203580、H-7可明显抑制IL-1β诱导A549细胞COX-2表达,PD098059对IL-1β诱导A549细胞COX-2表达无影响;IL-1β对COX-2报告基因无影响。结论PKC途径和P38MAPK途径参与IL-1β诱导A549细胞COX-2蛋白表达。

β3肾上腺素能受体上调对慢性心力衰竭大鼠左心室p38 MAPK表达的影响

目的:探讨β3肾上腺素能受体(β3-AR)对慢性心力衰竭(CHF)大鼠左心室p38分裂原激活的蛋白激酶(p38 MAPK)表达的影响。方法:18只雄性Wistar大鼠随机选取6只作为假手术组,另12只采用主动脉缩窄法建立CHF动物模型,将存活大鼠再随机分为CHF组(n=5)和BRL组(n=6),BRL组大鼠接受尾静脉注射β3-AR特异性激动剂BRL-37344(0.4 nmol/kg·min,每次持续10 min,每周2次,共4周)。右颈总动脉插管检测大鼠血流动力学指标,HE染色检测大鼠左心室肌病理学变化,RT-PCR检测大鼠左心室β3-AR mRNA表达,蛋白免疫印迹法检测大鼠左心室p-p38 MAPK蛋白表达。结果:与假手术组比较,CHF组和BRL组大鼠左心室收缩末压(LVESP)、左心室内压最大上升速率(+dp/dtmax)和左心室内压最大下降速率(-dp/dtmax)的绝对值均降低(P<0.01),左心室舒张末压(LVEDP)升高(P<0.01);左心室质量指数(LVMI)均增加(P<0.01)。与CHF组比较,BRL组大鼠的LVESP、dp/dtmax降低(P<0.01),LVEDP、LVMI升高(P<0.05),大鼠左心室肌病理学改变更显著(P<0.05)。与假手术组比较,CHF组和BRL组大鼠左心室β3-AR mRNA表达水平均上调(P<0.01),其中BRL组大鼠β3-AR表达水平较CHF组升高(P<0.01)。与假手术组比较,CHF组和BRL组大鼠左心室p-p38MAPK蛋白表达水平均升高(P<0.01),其中BRL组大鼠p-p38MAPK表达水平较CHF组有升高趋势,但差异无统计学意义(P=0.065)。结论:虽然左心室β3-AR表达上调导致CHF大鼠心室重构、功能下降进一步加重,但β3-AR激动可能对p38 MAPK表达无明显影响。

丝氨酸526位点在MEKK3介导的IL-1信号途径中的作用

目的:确定MEKK3分子中介导IL-1信号途径的关键性氨基酸.方法:对哺乳动物MEKK3活性环526位点的丝氨酸进行人工诱变后,用瞬时转染的方法分别将526A基因单独及与TRAF6基因同时导入GES-1细胞中;用免疫印迹、NF-κB荧光素酶报告基因测定及免疫沉淀实验检测了526A突变体的表达水平、对IL-1及TRAF6介导的NF-κB基因的表达及MEKK3与TRAF6相互作用的影响.结果:通过与野生型MEKK3的对比,观察到526A不但阻断了IL-1及TRAF6介导的依赖于MEKK3的NF-κB基因的激活,同时阻断了TRAF6与MEKK3的相互作用.结论:526位点的丝氨酸在MEKK3介导的IL-1信号途径中起关键性的作用,是不可缺少的关键性氨基酸.

p38 MAPK信号通路及其在全身炎症反应中的作用

分裂原激活的蛋白激酶（ＭＡＰＫ）级联是细胞内主要的信号转导系统。细胞运用这一系统将细胞外信号传递细胞核，介导细胞产生反应。近年来发现一类新的ＭＡＰＫ通路——ｐ３８ＭＡＰＫ信号通路，对其结构和功能以及在全身炎症反应中的作用机制已有所了解，在信号通路水平阻断和调控ｐ３８ＭＡＰＫ的表达和活性、治疗过度炎症反应性疾病可能成为急性炎症反应新的治疗途径。

阻断p38信号转导通路对血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究老年大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖和凋亡与p38信号转导通路的关系,明确以p38为靶向的信号转导在VSMCs中的分子调控机制。方法:将p38特异性抑制剂SB203580(25μmol/L)作用于大鼠VSMCs,运用MTT比色法检测细胞增殖状态,流式细胞术检测SB203580对细胞凋亡的影响,Western blot法检测药物作用前后p38通路相关蛋白p38α、MKK3、GADD153和c-myc的表达及相关蛋白磷酸化活性。结果:SB203580可以时间、剂量依赖的方式抑制VSMCs增殖促进其凋亡。加入SB203580的VSMCs中p-p38α、GADD153和c-myc表达的水平,随作用时间的延长而下降(P<0.01)。结论:阻断p38信号转导通路可能通过下调其下游靶基因GADD153和C-myc的表达,抑制血管平滑肌细胞增殖,促进其凋亡。

反义PKCζ对角质形成细胞增殖的调节

目的:探讨角质形成细胞中,反义蛋白激酶Cζ与磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)和细胞外信号调节激酶ERK1/2信号转导网络以及与核因子NF-κB的相互作用关系。方法:通过细胞原位杂交、间接免疫荧光和激酶活性测定方法,研究反义PKCζ抑制角质形成细胞增殖的信号转导机制。结果:表达反义PKCζ的角质形成细胞中,PI3K的基因表达显著下调,ERK1/2和NF-κB的核内表达水平以及ERK1/2的激酶活性明显降低。结论:表达反义PKCζ可通过下调PI3K和ERK1/2信号通路抑制角质形成细胞的增殖。

小檗碱通过P38MAPK/ERK通路抑制阴茎海绵体细胞凋亡以增强糖尿病大鼠勃起功能

目的 探讨小檗碱对糖尿病勃起功能障碍(DMED)大鼠影响及作用机制。方法 将60只SD大鼠随机分为正常组、DMEM组和小檗碱组,每组20只。除正常组外,其余各组以腹腔注射链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病大鼠模型,造模成功后,采用阿朴吗啡诱导阴茎勃起实验(APO)以筛选DMED大鼠模型。成模后,小檗碱组每日予以200 mg/kg的小檗碱进行灌胃,正常组和DMED组分别灌以等量生理盐水。给药4周后测定大鼠阴茎海绵体内压(ICP)和平均动脉压(MAP)以评估各组大鼠勃起功能;HE染色观察大鼠阴茎海绵体组织的病理变化;Masson染色检测阴茎海绵体组织的纤维化水平;Tunel染色检测阴茎海绵体组织细胞凋亡,Western blot检测海绵体组织中Bcl-2、Bax、Caspase-3以及p38MAPK/ERK通路相关蛋白p38MAPK(p38MAPK/p-p38MAPK)和ERK1/2(p-ERK1/2/ERK1/2)磷酸化水平。结果 与正常组比较,DMED组和小檗碱组最大ICP、MAP值和Bcl-2蛋白表达均显著降低(P<0.05),阴茎海绵体组织细胞凋亡指数、Bax、Caspase-3、p38MAPK/p-p38MAPK和p-ERK1/2/ERK1/2表达水平均显著升高(P<0.05);与DMED组相比,小檗碱组最大ICP、MAP值和Bcl-2蛋白表达水平均显著升高(P<0.05);阴茎海绵体组织细胞凋亡指数、Bax、Caspase-3、38MAPK/p-p38MAP和p-ERK1/2/ERK1/2表达均显著下降(P<0.05)。结论 小檗碱能改善糖尿病大鼠阴茎海绵体纤维化并增强勃起功能,其机制可能是通过p38MAPK/ERK通路抑制阴茎海绵体细胞凋亡实现的。